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间充质干细胞体外成骨及成脂肪分化中sortilin基因表达的研究 被引量:1
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作者 岑洪 林茂芳 +1 位作者 蔡真 黄河 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期238-241,共4页
目的 :研究间充质干细胞 (MSC)体外成骨、成脂肪分化时sortilin基因表达变化。方法 :从骨髓中分离培养人间充质干细胞 ,流式细胞术鉴定其表型 ,加入成骨和成脂肪诱导剂 ,RT -PCR检测成骨标志骨桥蛋白 (Op)和成脂肪标志脂蛋白脂肪酶 (LpL... 目的 :研究间充质干细胞 (MSC)体外成骨、成脂肪分化时sortilin基因表达变化。方法 :从骨髓中分离培养人间充质干细胞 ,流式细胞术鉴定其表型 ,加入成骨和成脂肪诱导剂 ,RT -PCR检测成骨标志骨桥蛋白 (Op)和成脂肪标志脂蛋白脂肪酶 (LpL)表达 ,半定量RT -PCR分析sortilin基因随诱导时间的表达变化。结果 :①体外分离培养的人间充质干细胞能向成骨细胞和脂肪细胞分化 ,分别表达Op和LpL。②在体外成骨分化过程中 ,sortilin基因表达第 1d开始上调 ,持续约 1周后恢复至原水平 ;在培养 3d时 ,sortilin基因表达明显上调 ,与未诱导组相比 ,差异明显 (P <0 0 1)。③体外成脂肪分化时 ,sortilin基因表达无明显的改变 (P >0 0 5 )。结论 :sortilin基因可能参与间充质干细胞成骨分化的调节 ,而与成脂肪分化无关 ,通过调控sortilin基因的表达 ,有可能为成骨障碍性疾病的治疗 ,提供新的思想和策略。 展开更多
关键词 间充质干细胞 基因 SORTILIN 分化 骨生成 脂肪细胞
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可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体基因的克隆和原核表达 被引量:1
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作者 岑洪 林茂芳 +1 位作者 黄河 蔡真 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期412-414,共3页
目的:克隆可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体(sMR)基因,在大肠杆菌中表达,经纯化、复性后获得活性蛋白。方法:从人骨髓细胞中提取总RNA,在sMR基因引物两端分别加上NdeI和BamHI酶切位点,利用RT-PCR技术扩增sMR基因,经NdeⅠ和BamHⅠ酶切后... 目的:克隆可溶性巨噬细胞集落刺激因子受体(sMR)基因,在大肠杆菌中表达,经纯化、复性后获得活性蛋白。方法:从人骨髓细胞中提取总RNA,在sMR基因引物两端分别加上NdeI和BamHI酶切位点,利用RT-PCR技术扩增sMR基因,经NdeⅠ和BamHⅠ酶切后连接到表达载体pET28a,测序证实克隆基因的正确性,并在大肠杆菌BL21菌株中诱导表达,采用his-tag纯化柱纯化目的蛋白,并经复性处理,配体结合实验证实蛋白活性。结果:限制性内切酶切出了预期条带,测序证实了克隆基因的正确性,sMR经诱导后在大肠杆菌中以包涵体形式表达,表达蛋白经纯化和复性处理,获得了具有活性的功能蛋白。结论:成功克隆与表达了sMR基因,得到了具有活性的功能蛋白,为进一步研究其生物学功能和应用奠定了基础。 展开更多
关键词 受体 可溶性巨噬细胞集落刺激因子 克隆 原核表达 pET-28a(+) 蛋白质复性
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脐带血造血前体细胞在间质干细胞微环境中的增殖和分化特性研究 被引量:3
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作者 岑洪 林茂芳 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期995-998,共4页
目的:用间质干细胞(MSC)体外模拟造血微环境,探讨脐带血造血前体细胞在MSC微环境中的增殖和分化特性。方法:实验组(CK+MSC组)以MSC为基质层细胞,建立基于MSC的体外造血细胞扩增体系,接种脐带血单个核细胞,培养体系中加入外源性造血生长... 目的:用间质干细胞(MSC)体外模拟造血微环境,探讨脐带血造血前体细胞在MSC微环境中的增殖和分化特性。方法:实验组(CK+MSC组)以MSC为基质层细胞,建立基于MSC的体外造血细胞扩增体系,接种脐带血单个核细胞,培养体系中加入外源性造血生长因子SCF、Flt3L、TPO和IL-6,培养第1、2、3、4周对扩增的细胞进行细胞计数、集落培养,对照组为单纯细胞因子组(CK组,无MSC基质层细胞)和单纯MSC组(无脐带血单个核细胞)。结果:(1)第4周时CK+MSC组的细胞数扩增108倍,而CK组只有7.8倍。(2)CK+MSC组和CK组扩增的集落形成细胞(CFC)数量在第3周时达高峰,第4周时CFC数量已迅速下降。(3)红系CFC和高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)均于扩增1周后到达高峰,CK+MSC组的扩增效率要优于CK组,到第3周时两组均降为零。(4)粒单系CFC则在扩增第3周时到达高峰,CK+MSC组扩增效率优于CK组,从第4周开始出现回落。(5)扩增1周后,单位细胞(104个MNC)中的CFC数到达高峰,CK+MSC组优于CK组,从第2周开始每104个MNC中的CFC数迅速呈下降趋势,到第4周时已降至低于扩增前水平。(6)单纯MSC组无造血细胞生长。结论:(1)体外扩增脐带血造血前体细胞时,基于MSC的扩增体系要优于单纯细胞因子体系。(2)MSC在体外有利于脐带血造血前体细胞扩增的同时,并不能阻止其分化。(3)红系扩增出现在体外扩增的早期,粒单系扩增持续的时间比红系长,扩增的CFC数量更多。 展开更多
关键词 间质干细胞 胎血 细胞分化
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