期刊文献+
共找到29篇文章
< 1 2 >
每页显示 20 50 100
犬卵巢颗粒细胞瘤的诊断和治疗
1
作者 叶蒂 王鹿敏 +4 位作者 李琦 张华 师福山 林琳 王华南 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2025年第1期14-18,共5页
犬卵巢颗粒细胞瘤在我国较为罕见。本院接诊了1例因咳嗽、呼吸急促转诊的患犬病例。经实验室检查和影像学检查确诊为卵巢肿瘤并伴有右肺中叶实变、胸腔积液和腹腔积液。肿瘤经手术切除后进一步做组织病理学检查。苏木精-伊红(H.E.)染色... 犬卵巢颗粒细胞瘤在我国较为罕见。本院接诊了1例因咳嗽、呼吸急促转诊的患犬病例。经实验室检查和影像学检查确诊为卵巢肿瘤并伴有右肺中叶实变、胸腔积液和腹腔积液。肿瘤经手术切除后进一步做组织病理学检查。苏木精-伊红(H.E.)染色结果显示,卵巢组织结构消失,肿瘤细胞形态多样,呈实性片状、索状、小梁状或巢状排列,肿瘤细胞胞质丰富,细胞核呈空泡状,核分裂罕见,可见核仁,染色质粗大;免疫组织化学染色结果显示,卵巢颗粒细胞瘤特异性标记物抑制素-α(INH-α)表达5%阳性,非特异性标记物肾母细胞瘤蛋白1(WT1)和白细胞分化抗原10(CD10)表达阳性。患犬最终确诊为卵巢颗粒细胞瘤,临床分期判定为恶性。该犬在切除肿瘤后第3年复查,状态良好,未见复发,但仍需持续观察。本文旨在对犬卵巢颗粒细胞瘤的诊疗流程进行总结,以供临床参考。 展开更多
关键词 腹腔肿瘤 卵巢颗粒细胞瘤 免疫组织化学
在线阅读 下载PDF
H3N2亚型猪流感病毒HA1蛋白的原核表达及多克隆抗体制备
2
作者 司维 谭茜宇 +3 位作者 徐玲芸 罗廷荣 李晓宁 顾金燕 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1739-1749,共11页
【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04... 【目的】获得免疫原性良好的H3N2亚型猪流感病毒(Swine influenza virus, SIV)血凝素(haemagglutinin, HA)头部结构域HA1蛋白,并制备特异性多克隆抗体,用于HA1蛋白的鉴定及功能研究。【方法】本研究通过扩增A型SIV(A/swine/Guangdong/04/2005(H3N2))毒株的HA1片段,采用同源重组方法构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1,经PCR和测序鉴定正确后将重组阳性质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞。对HA1蛋白表达条件(诱导温度、诱导时间、IPTG浓度)进行优化,通过镍柱亲和层析法纯化蛋白。将获得的重组蛋白与QuickAntibody-Mouse3W佐剂混合后以肌内注射方式免疫BALB/c小鼠,制备H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,并通过ELISA、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)对多克隆抗体的效价、反应性及特异性进行鉴定。【结果】本研究成功构建原核表达载体pET-28a(+)-H3N2-HA1;H3N2亚型SIV HA1重组蛋白在1 mmol/L IPTG 26℃诱导10 h时表达量最高,且主要以包涵体形式表达,蛋白分子质量大小约为39.5 ku。成功制备5株H3N2亚型SIV HA1蛋白多克隆抗体,效价均为1∶1 638 400。Western blotting和IFA鉴定结果显示,制备的多克隆抗体可特异性识别真核表达的H3N2亚型SIV HA1蛋白,与H1N1亚型SIV、H7N9亚型禽流感病毒(AIV)等其他亚型流感病毒的HA1蛋白均不发生反应,具有良好的反应性及特异性。【结论】本研究成功表达并纯化了免疫原性良好的H3N2亚型SIV HA1蛋白,制备了反应性及特异性良好的鼠源多克隆抗体,为深入研究H3N2亚型SIV HA1蛋白的生物学功能提供了重要工具。 展开更多
关键词 猪流感病毒(SIV) H3N2亚型 HA1蛋白 原核表达 多克隆抗体
在线阅读 下载PDF
一例猫鼻神经内分泌恶性肿瘤的病理和免疫组化分析
3
作者 郑艺蕾 沈冯婷 +6 位作者 辛良 袁希望 林琳 曹迪 吴旧生 师福山 王华南 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2948-2956,共9页
本文旨在报道1例猫鼻神经内分泌恶性肿瘤的病理和免疫组化特征。4岁雄性英国短毛猫,在他院按肺炎治疗一个月未见好转遂转至本院,检查发现鼻部肿块,手术活检取鼻腔肿块进行组织病理学和免疫组化检查。组织病理学结果显示肿瘤细胞大小形... 本文旨在报道1例猫鼻神经内分泌恶性肿瘤的病理和免疫组化特征。4岁雄性英国短毛猫,在他院按肺炎治疗一个月未见好转遂转至本院,检查发现鼻部肿块,手术活检取鼻腔肿块进行组织病理学和免疫组化检查。组织病理学结果显示肿瘤细胞大小形态不一,异型性明显,细胞核多呈泡状,且已侵袭至周围组织;免疫组化结果显示神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase,NSE)、突触素(synaptophysin,Syn)、血管活性肠肽(vasoactive intestinal peptide,VIP)、CD99(cluster of differentiation 99,CD99)呈阳性。根据实验室检查、组织病理学以及免疫组化结果,最后诊断为鼻神经内分泌恶性肿瘤,更倾向于低分化神经内分泌癌(neuroendocrine carcinoma,NEC)。本病例可为诊断该肿瘤并与其他鼻腔肿瘤相区分提供参考依据。 展开更多
关键词 神经内分泌肿瘤 组织病理学 免疫组化
在线阅读 下载PDF
11例猫先天性门体分流病例的影像学和血清生化指标回顾性分析
4
作者 郑艺蕾 陈龙熙 +4 位作者 何雨桦 黄耀东 沈冯婷 袁希望 王华南 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期126-131,共6页
本文通过收集2021年1月—2023年12月在浙江大学动物医学中心教学动物医院、北京宠爱国际动物医院和杭州虹泰宠物医院天目里转诊中心确诊为先天性门体分流(CPSS)的患猫病例信息,共筛选到11例符合入选标准的CPSS患猫病例,其中胃左-膈静脉... 本文通过收集2021年1月—2023年12月在浙江大学动物医学中心教学动物医院、北京宠爱国际动物医院和杭州虹泰宠物医院天目里转诊中心确诊为先天性门体分流(CPSS)的患猫病例信息,共筛选到11例符合入选标准的CPSS患猫病例,其中胃左-膈静脉分流5例,脾-后腔静脉分流4例,左结肠-后腔静脉分流1例,肝内门静脉中央分流1例。经计算机断层扫描血管造影(CTA)测量获得分流前门静脉(Caudal PV)直径、分流后门静脉(Cranial PV)直径、分流血管(S)直径和主动脉(Ao)直径,评估胃左-膈静脉分流与脾-后腔静脉分流CPSS患猫Caudal PV/Ao、Cranial PV/Ao和S/Ao的差异性;经计算机断层扫描(CT)测量获得肾脏长度(RL)和第2腰椎长度(L2),分析RL/L2值与血清生化指标的相关性。结果显示,所有患猫的Caudal PV直径大于Cranial PV直径,胃左-膈静脉分流和脾-后腔静脉分流CPSS患猫间的Cranial PV/Ao、Caudal PV/Ao和S/Ao差异均不显著(P> 0.05)。63.6%(7/11)患猫肾脏肿大(RL/L2值升高),RL/L2与血清生化指标无显著相关性(P>0.05)。CTA可判定CPSS的类型并准确评估门体分流的形态特征,CT可准确评估患猫肾脏是否肿大,对猫CPSS的诊断具有重要意义。 展开更多
关键词 先天性门体分流 计算机断层扫描(CT) 计算机断层扫描血管造影(CTA) 血清生化指标
在线阅读 下载PDF
2例犬口腔肉瘤的病理学分析 被引量:1
5
作者 苏真 惠天朝 +7 位作者 韦方华 徐亚嵩 张舒六 许世军 吴旧生 师福山 林琳 王华南 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第1期9-14,共6页
口腔肉瘤是犬常见的口腔肿瘤,尤其在老年犬多发。本试验通过苏木精-伊红(H.E.)染色和免疫组织化学检测对2例犬口腔肿物进行组织病理学分析。H.E.染色结果显示,2例患犬肿物组织可见大量增生的梭形细胞和局部黑色素颗粒,伴随继发性出血和... 口腔肉瘤是犬常见的口腔肿瘤,尤其在老年犬多发。本试验通过苏木精-伊红(H.E.)染色和免疫组织化学检测对2例犬口腔肿物进行组织病理学分析。H.E.染色结果显示,2例患犬肿物组织可见大量增生的梭形细胞和局部黑色素颗粒,伴随继发性出血和坏死性囊变,高倍镜下细胞具多形性和异型性,核仁明显,核分裂象易见,初步诊断为恶性黑色素瘤或软组织肉瘤。免疫组织化学检测结果显示,2例患犬口腔肿物中广谱细胞角蛋白(CKp)表达均呈阴性,波形蛋白(Vimentin)表达均呈阳性,1号犬上皮细胞膜抗原(EMA)和2号犬人角蛋白抗原决定簇(Cam5.2)表达均呈阴性,可知肿瘤是间质来源;黑色素-A(Melan-A)、钙结合蛋白(S-100)和人类黑色素瘤标志物-45(HMB45)等特异性抗体表达均呈阴性,故黑色素瘤和神经鞘肉瘤的可能性不高。1号犬中α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、中间丝状体蛋白(Desmin)在部分区域呈阳性,肌细胞生成素(Myogenin)呈阴性,考虑部分肌源性分化;2号犬无肌源性标志物表达。综合分析,2例患犬口腔肿物均为高级软组织肉瘤。 展开更多
关键词 口腔肿瘤 组织病理 免疫组织化学 肉瘤
在线阅读 下载PDF
基于微生物组和宿主转录组整合分析香砂六君子汤对ETEC诱导断奶腹泻仔猪回肠损伤的调控机制 被引量:1
6
作者 肖乐 刘峻源 +8 位作者 曾雯玉 汪芹 韩雯珏 刘彦泠 范誉 徐雨婷 杨贝妮 肖雄 王自力 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期797-808,共12页
本研究旨在探讨香砂六君子汤对产肠毒素大肠杆菌(entexotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导的断奶仔猪腹泻的干预作用及其机制。将24头21日龄断奶仔猪随机分为空白组(CON)、模型组(MOD)和香砂六君子汤组(XS),连续14 d给XS组灌服香砂... 本研究旨在探讨香砂六君子汤对产肠毒素大肠杆菌(entexotoxigenic Escherichia coli,ETEC)诱导的断奶仔猪腹泻的干预作用及其机制。将24头21日龄断奶仔猪随机分为空白组(CON)、模型组(MOD)和香砂六君子汤组(XS),连续14 d给XS组灌服香砂六君子汤(1 mL·kg^(-1),1 g·mL^(-1)),其余组灌服等量无菌水,第15天给MOD组、XS组仔猪按1 mL·kg^(-1)连续3 d灌服1011 CFU·mL^(-1) ETEC菌液,XS组继续灌服香砂六君子汤。分别记录各组仔猪腹泻评分,HE法检测回肠组织病理学变化,实时荧光定量PCR检测回肠组织IL-1β、IL-6、IL-8 mRNA水平,转录组学分析回肠组织RNA差异表达情况,微生物宏基因组学分析回肠菌群变化情况,Western blot检测回肠组织p-p38/p38、p-ERK/ERK、p-JNK/JNK蛋白水平。结果表明,灌服ETEC后,MOD组腹泻评分极显著高于CON组(P<0.01),回肠组织结构破坏,V/C值极显著下降(P<0.01),且IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA表达量极显著升高(P<0.01),肠道菌群门水平上变形菌门极显著上调(P<0.01),厚壁菌门极显著下调(P<0.01),属水平上乳酸菌属下调,志贺菌属上调,回肠组织p-p38/p38和p-JNK/JNK比值显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01)。与MOD组相比,XS组腹泻评分极显著下降(P<0.01),回肠组织结构完整,V/C值极显著升高(P<0.01),回肠组织IL-1β、IL-6和IL-8 mRNA表达量显著或极显著降低(P<0.05或P<0.01),肠道菌群门水平上变形菌门极显著下调(P<0.01),厚壁菌门极显著上调(P<0.01),属水平上乳酸菌属上调,志贺菌属下调,回肠组织p-p38/p38和p-ERK/ERK比值极显著降低(P<0.01)。肠道组织基因转录组学筛选出与炎症免疫相关的差异显著的10个基因,分别为TNFAIP8L2、TRIM67、CXCL2、EGF、NOX1、CCL28、FABP2、FABP6、IL1RAP和CEBPB。微生物组学筛选出各组可能的标志物种分别为CON组的Lactobacillaceae,MOD组的Shigella,XS组的Deinococcus和Eubacterium。综上所述,香砂六君子汤可有效缓解ETEC诱导的断奶仔猪腹泻,提高肠道菌群中有益菌的丰度,逆转ETEC诱发的菌群结构的改变,并可通过抑制MAPK信号通路的激活,从而缓解ETEC诱导的肠道炎性损伤。 展开更多
关键词 香砂六君子汤 产肠毒素大肠杆菌 断奶仔猪 腹泻 肠道菌群 转录组学 MAPK信号通路
在线阅读 下载PDF
生物力调控CIDEC分子间动态互作的力学-化学耦合分子机制研究
7
作者 张仪琳 王小洒 +6 位作者 张勇 陈国华 裴洋 娄继忠 陈伟 武鹏 李蓬 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期412-412,共1页
脂滴的动态调控对脂质代谢至关重要,而脂滴作为一个力学敏感细胞器,其运动和大小受生物机械力的调控。脂膜蛋白CIDEC是调控脂滴动态的关键分子,CIDEC可以通过分子间动态互作并发生胶样相变介导脂滴融合和脂质交换。然而,生物机械力调控C... 脂滴的动态调控对脂质代谢至关重要,而脂滴作为一个力学敏感细胞器,其运动和大小受生物机械力的调控。脂膜蛋白CIDEC是调控脂滴动态的关键分子,CIDEC可以通过分子间动态互作并发生胶样相变介导脂滴融合和脂质交换。然而,生物机械力调控CIDEC分子间动态互作的力学-化学耦合分子机制仍不清楚。目的阐明生物机械力调控CIDEC分子间动态互作的力学-化学耦合分子机制方法流式细胞术;分子动力学模拟;单分子生物力谱技术结果(1)利用GFP split系统,发现CIDEC的N端(aa1-39)和N-结构域(aa40-119)在细胞内脂滴的单层脂膜上处于一种自抑制构象,并且CIDEC的N端可以调控N-结构域与脂滴脂膜的结合,这表明CIDEC在脂膜上的构象可以调控其功能活性。(2)通过分子动力学模拟,进一步发现生物机械力潜在可以诱导CIDEC的N端发生构象变化并产生新的相互作用,进而增强CIDEC分子间互作。(3)利用单分子生物膜力学探针技术,发现在生物机械力作用下,CIDEC分子间可以形成“逆锁键”,并且键合时间在10 p N左右达到最大值,而缺少N端的CIDEC分子间的“逆锁键”被明显削弱,表明CIDEC的N端对CIDEC分子间互作的力学稳定性至关重要。结论本研究明确了生物机械力对CIDEC分子间动态互作的调控作用,揭示了生物机械力调控CIDEC分子介导脂滴间融合过程中新的调控机制,为脂滴的动态调控和脂质代谢研究提供新方法、新思路。 展开更多
关键词 动态调控 分子生物 脂质代谢 脂膜 力学稳定性 流式细胞术 构象变化 单分子
在线阅读 下载PDF
机械力调控PD-1介导的T细胞抑制
8
作者 陈辉 张勇 +3 位作者 崔蕾 范娟 陈伟 娄继忠 《医用生物力学》 CAS CSCD 北大核心 2024年第S01期401-402,共2页
目的PD-1与其配体PD-L1或PD-L2结合后,可以抑制TCR信号、阻止T细胞活化,是抗肿瘤免疫疗法中广泛应用的检查点分子。然而PD-1信号转导的分子机制目前还不清楚,本研究希望从生物力学角度出发研究PD-1与其配体之间的相互作用,进而明晰PD-1... 目的PD-1与其配体PD-L1或PD-L2结合后,可以抑制TCR信号、阻止T细胞活化,是抗肿瘤免疫疗法中广泛应用的检查点分子。然而PD-1信号转导的分子机制目前还不清楚,本研究希望从生物力学角度出发研究PD-1与其配体之间的相互作用,进而明晰PD-1抑制T细胞的分子机制,为基于PD-1的抗肿瘤免疫疗法开发提供指导。方法综合利用生物膜力探针、分子动力学模拟、超分辨成像技术以及传统的免疫学手段研究了PD-1与其配体在力加载条件下的相互作用以及机械力对PD-1信号的调控。结果PD-1与配体形成逆锁键,复合体结构除了在晶体结构中观察到的不受力的构象外,还存在一个力诱导以及力稳定的构象,而稳定这两种构象的相应残基的突变会削弱逆锁键并降低PD-1的抑制功能。基于DNA力探针的T细胞活化实验也证明机械力加载是导致PD-1信号活化以及T细胞抑制的重要因素。PD-L1的可溶性胞外结构域可以结合PD-1同时不提供外力,能与细胞表面表达的PD-L1竞争,从而削弱PD-1对T细胞活化的抑制作用,抑制小鼠肿瘤生长。结论PD-1与其配体相互作用介导的T细胞抑制受机械力调控,PD-L1可溶性胞外结构域由于能结合PD-1同时不提供外力刺激,因此是一种潜在的PD-1阻断剂。 展开更多
关键词 T细胞活化 小鼠肿瘤 生物力学 检查点 胞外结构域 阻断剂 抑制功能 超分辨成像
在线阅读 下载PDF
鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析
9
作者 王圣文 张丹 +2 位作者 邬雨倩 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期137-146,共10页
载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物... 载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达 多克隆抗体 亚细胞定位
在线阅读 下载PDF
犬下颌恶性黑色素瘤的诊治
10
作者 郑智杰 潘嘉臻 +3 位作者 王鹿敏 李越鹏 鲁彦 吴海冲 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第7期147-150,共4页
恶性黑色素瘤是犬常见的口腔恶性肿瘤,其治疗方法以手术切除为主,但难以根治。本院接诊了1例因门齿间出现1个红色肿物而前来就诊的拉布拉多巡回犬。通过超声检查发现患犬脾脏肿大,通过计算机断层扫描(CT)进行辅助诊断,并行左侧下颌部分... 恶性黑色素瘤是犬常见的口腔恶性肿瘤,其治疗方法以手术切除为主,但难以根治。本院接诊了1例因门齿间出现1个红色肿物而前来就诊的拉布拉多巡回犬。通过超声检查发现患犬脾脏肿大,通过计算机断层扫描(CT)进行辅助诊断,并行左侧下颌部分切除术和脾切除术治疗,病理切片结果显示为口腔恶性黑色素瘤和脾脏慢性充血。2023年1月回访,患犬预后良好未见复发。本文通过对该病例的病史、诊断和治疗过程进行总结和分析,以期为国内兽医诊治该类疾病提供参考。 展开更多
关键词 口腔 恶性黑色素瘤 脾脏慢性充血
在线阅读 下载PDF
猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定
11
作者 张丹 卢舒婷 +8 位作者 卢辰赫 王子仪 徐丽华 陈伊玄 王圣文 金子安 倪成章 周继勇 郑肖娟 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期424-434,共11页
为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以... 为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以纯化的重组N蛋白为免疫原制备兔多克隆抗血清(多抗血清),再通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting, WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)等多种方法对兔多抗血清进行反应性鉴定。结果显示:经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)和低温诱导,成功表达出分子量约为100 kDa的可溶性重组N蛋白,在非变性条件下亲和纯化获得的重组N蛋白质量浓度达到1.4 mg/mL;N蛋白兔多抗血清的ELISA效价可达1×10^(6),与真核表达的重组蛋白Flag-N以及FCoV感染细胞中的N蛋白均具有良好的WB和IFA反应性。交叉反应性结果显示:该多克隆抗体能与α属冠状病毒中不同亚型的FCoV以及犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的N蛋白发生反应,但不与β属冠状病毒中的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2, SARS-CoV-2)和γ属冠状病毒中的传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)的N蛋白发生反应。综上所述,以pCold TF原核系统表达的可溶性重组N蛋白具有良好的免疫原性,以该蛋白制备的FCoV N蛋白兔多抗血清能识别多种来自不同物种的α属冠状病毒N蛋白,但与β、γ属冠状病毒N蛋白没有交叉反应性,这为进一步研究FCoV复制机制以及开发高效的抗原和抗体检测技术奠定了基础。 展开更多
关键词 猫冠状病毒 核衣壳蛋白 可溶性表达 多克隆抗体 交叉反应性
在线阅读 下载PDF
BCMA靶向的嵌合抗原受体T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤患者发生急性肾损伤的危险因素 被引量:6
12
作者 吕雨琦 张明明 +3 位作者 魏国庆 丁淑怡 胡永仙 黄河 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期137-143,共7页
目的:探究B细胞成熟抗原(BCMA)靶向的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤过程中患者发生急性肾损伤(AKI)的相关危险因素。方法:收集2018年7月至2021年12月在浙江大学医学院附属第一医院接受BCMA靶向的CAR-T细胞治疗的99... 目的:探究B细胞成熟抗原(BCMA)靶向的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤过程中患者发生急性肾损伤(AKI)的相关危险因素。方法:收集2018年7月至2021年12月在浙江大学医学院附属第一医院接受BCMA靶向的CAR-T细胞治疗的99例多发性骨髓瘤患者的临床资料。观察化疗预处理前后和CAR-T细胞输注后患者肾功能的动态变化,并采用logistic回归分析AKI发生的独立危险因素。结果:BCMA靶向的CAR-T细胞治疗过程中共有25例患者发生AKI,AKI发生率为25.3%,中位发生时间为8.0(5.5,11.0)d,其中AKI 1期2例(8.0%),AKI 2期3例(12.0%),AKI 3期9例(36.0%)。多因素logistic回归分析结果显示,化疗预处理后的血清肌酐(SCr)水平(OR=1.020,P<0.001)和细胞因子释放综合征(CRS)的严重程度(OR=6.501,P<0.01)与AKI的发生密切相关。化疗预处理后SCr水平预测AKI的曲线下面积为0.800(95%CI:0.694~0.904,P<0.001),最大约登指数为0.528,其所对应的截断值为83.0μmol/L,预测敏感度为72.0%,特异度为80.8%。3~4级CRS的患者AKI发生率为39.1%,而CRS低于3级的患者AKI发生率为13.2%,差异有统计学意义(χ^(2)=8.767,P<0.01)。结论:接受BCMA靶向的CAR-T细胞治疗的多发性骨髓瘤患者AKI多发生于CAR-T细胞输注后的15.0 d内,表现为一过性的严重肾功能损害。化疗预处理后存在肾功能异常的患者应警惕AKI的发生,同时在CAR-T细胞治疗期间须注意防治CRS。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 嵌合抗原受体T细胞 B细胞成熟抗原 急性肾损伤 细胞因子释放综合征 危险因素
在线阅读 下载PDF
CD19靶向的嵌合抗原受体T细胞治疗急性B淋巴细胞白血病伴髓外复发患者的疗效和安全性 被引量:3
13
作者 黄荦 张明明 +3 位作者 魏国庆 赵厚力 胡永仙 黄河 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期151-159,共9页
目的:评估CD19靶向的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)伴髓外复发患者的疗效和安全性。方法:回顾性收集2016年1月至2021年10月在浙江大学医学院附属第一医院接受CD19靶向的CAR-T细胞治疗的15例B-ALL伴髓外复发患... 目的:评估CD19靶向的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)伴髓外复发患者的疗效和安全性。方法:回顾性收集2016年1月至2021年10月在浙江大学医学院附属第一医院接受CD19靶向的CAR-T细胞治疗的15例B-ALL伴髓外复发患者的资料。采用Kaplan-Meier分析法评估患者的总存活率和无白血病存活率,观察不同部位的髓外病灶对CD19靶向的CAR-T细胞治疗的反应,并对CD19靶向的CAR-T细胞治疗期间细胞因子释放综合征(CRS)、血液学毒性、免疫效应细胞相关神经毒性综合征(ICANS)等不良反应进行统计分析。结果:15例患者中位随访时间为7(3~71)个月,最佳疗效为完全缓解11例(73.3%),中位完全缓解持续时间为6(2~27)个月;部分缓解3例(20.0%);疾病进展1例(6.7%)。CD19靶向的CAR-T细胞治疗总反应率达93.3%(14/15),随访终点总存活率为80.0%(12/15)。15例患者累计复发率和复发病死率分别为40.0%(6/15)和20.0%(3/15),目前9例(60.0%)患者无病生存。15例患者中,13例(86.7%)发生CRS,其中1~2级7例,3级6例;1例(6.7%)出现可逆性ICANS;15例(100.0%)出现B细胞发育不全;12例(80.0%)发生严重血液学不良反应;2例(13.3%)出现肝功能异常;1例(6.7%)出现肾功能异常;4例(26.7%)发生感染。上述不良反应均控制良好。结论:CD19靶向的CAR-T细胞治疗复发/难治B-ALL伴髓外复发患者疗效明确,不良反应控制良好。 展开更多
关键词 急性B淋巴细胞白血病 嵌合抗原受体T细胞 复发/难治 髓外复发 CD19 疗效 安全性
在线阅读 下载PDF
脂质纳米粒-mRNA递送系统及其在嵌合抗原受体T细胞治疗中的应用 被引量:4
14
作者 叶柏新 胡永仙 +1 位作者 张明明 黄河 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期185-191,共7页
尽管嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗在血液系统恶性肿瘤患者中取得了显著的临床疗效,但需要进一步优化。脂质纳米粒(LNP)-信使核糖核酸(mRNA)递送系统作为一种非病毒性基因载体运用于CAR-T细胞治疗研究中,一方面通过LNP将密封蛋白-6 mRNA... 尽管嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗在血液系统恶性肿瘤患者中取得了显著的临床疗效,但需要进一步优化。脂质纳米粒(LNP)-信使核糖核酸(mRNA)递送系统作为一种非病毒性基因载体运用于CAR-T细胞治疗研究中,一方面通过LNP将密封蛋白-6 mRNA靶向递送至抗原提呈细胞,从而实现抗原提呈细胞辅助性增强密封蛋白-6靶向的CAR-T细胞的功能,以进一步诱导对实体瘤的清除;另一方面,通过LNP将成纤维细胞激活蛋白(FAP)CAR mRNA靶向递送至T细胞,实现体内FAP靶向的CAR-T细胞的制备,以通过阻断心脏纤维化过程达到治疗急性心肌损伤的目的。在CAR-T细胞研究和治疗中,LNP-mRNA递送系统具有不与细胞基因组整合、价格便宜、毒副作用小及可修饰等优点,亦存在蛋白瞬时表达导致调控细胞功能的持久性不足及制备等方面的技术局限性。本文综述了LNP-mRNA递送系统及其在CAR-T细胞治疗中的应用研究。 展开更多
关键词 脂质纳米粒 信使核糖核酸 体内递送技术 基因递送载体 嵌合抗原受体T细胞 综述
在线阅读 下载PDF
BCMA靶向的嵌合抗原受体T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤患者并发噬血细胞综合征临床观察 被引量:6
15
作者 祖成 王柯馨 +2 位作者 张棋琦 胡永仙 黄河 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期160-166,共7页
目的:研究以B细胞成熟抗原(BCMA)为靶点的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤(MM)后并发噬血细胞综合征(carHLH)患者的临床特点和治疗方案。方法:回顾性分析2018年7月至2021年12月浙江大学医学院附属第一医院BCMA靶向的CA... 目的:研究以B细胞成熟抗原(BCMA)为靶点的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤(MM)后并发噬血细胞综合征(carHLH)患者的临床特点和治疗方案。方法:回顾性分析2018年7月至2021年12月浙江大学医学院附属第一医院BCMA靶向的CAR-T细胞治疗Ⅰ期单中心临床试验(注册号:ChiCTR1800017404)中的99例复发/难治MM患者(包括3例浆细胞白血病患者)的临床资料。收集carHLH组和非carHLH组的临床资料,比较两组临床特点、疗效、CAR-T细胞扩增特点、血清细胞因子水平等差异,并总结carHLH患者的治疗方案及转归。结果:99例患者中,发生carHLH 20例,carHLH发生率为20.20%,carHLH发生的中位时间为细胞因子释放综合征(CRS)后的第7天(第0~19天),集中发生于CRS后第5~10天。与非carHLH患者比较,carHLH患者中男性患者比例、CAR-T细胞治疗前骨髓浆细胞比例、治疗期间发生3~4级CRS的患者比例均更高(均P<0.05);CAR-T细胞扩增高峰更高(P<0.01);血清细胞因子白介素(IL)-6、IL-10和γ干扰素水平更高(均P<0.01);国际标准化比值和D-二聚体峰值更高,纤维蛋白原谷值更低(均P<0.01)。20例发生carHLH的患者中,单独使用托珠单抗治疗7例,单独使用糖皮质激素治疗5例,同时使用托珠单抗和糖皮质激素治疗6例,均好转。MM客观缓解率17例接受疗效评估的carHLH患者为100.00%,78例接受疗效评估的非carHLH患者为94.87%(P>0.05)。结论:接受BCMA靶向的CAR-T细胞治疗的MM患者carHLH发生率较高,治疗前骨髓浆细胞比例越大越容易发生carHLH,且治疗后CAR-T细胞扩增程度及细胞因子水平与carHLH发生密切相关。并发carHLH者在接受以托珠单抗和糖皮质激素为主的治疗后疗效大多较好。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 嵌合抗原受体T细胞 浆细胞白血病 B细胞成熟抗原 噬血细胞综合征
在线阅读 下载PDF
嵌合抗原受体T细胞治疗复发/难治B细胞非霍奇金淋巴瘤患者的长期疗效 被引量:4
16
作者 付珊 胡永仙 黄河 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期167-174,共8页
目的:评价嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗复发/难治B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的长期疗效。方法:收集2016年6月至2020年6月在浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心应用CAR-T细胞治疗的27例复发/难治B-NHL患者的资料,随访日期截至2022年... 目的:评价嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗复发/难治B细胞非霍奇金淋巴瘤(B-NHL)的长期疗效。方法:收集2016年6月至2020年6月在浙江大学医学院附属第一医院骨髓移植中心应用CAR-T细胞治疗的27例复发/难治B-NHL患者的资料,随访日期截至2022年2月1日。运用Kaplan-Meier生存分析评估患者总存活率和无进展存活率,并统计相关不良反应。结果:27例患者中位随访时间为32(1,56)个月,CAR-T细胞治疗总反应率为85.2%(23/27),完全缓解率为63.0%(17/27),部分缓解率为22.2%(6/27)。患者3年总存活率为(50.0±10.1)%,无进展存活率为(44.4±9.6)%。CAR-T细胞治疗后获完全缓解患者的总存活率和无进展存活率均优于未获完全缓解患者[总存活率分别为(66.9±12.7)%和(20.0±12.6)%,P=0.01;无进展存活率分别为(64.7±11.6)%和(10.0±9.5)%,P<0.01]。CD19单靶点和CD19/CD22双靶点的CAR-T细胞治疗患者总存活率和无进展存活率差异无统计学意义(均P>0.05)。92.6%(25/27)的患者发生细胞因子释放综合征;88.9%(24/27)的患者治疗期间发生Ⅲ~Ⅳ级骨髓抑制;其他不良反应包括免疫效应细胞相关神经毒性综合征、乙型肝炎病毒激活以及肺部或胃肠道感染等。未观察到远期不良反应发生。结论:CAR-T细胞治疗是复发/难治B-NHL患者的有效治疗方案,不良反应可控。CAR-T细胞治疗后获得完全缓解及随访至1年时处于存活状态的患者可能有更好的长期存活率。 展开更多
关键词 B细胞非霍奇金淋巴瘤 嵌合抗原受体T细胞 复发/难治 长期疗效
在线阅读 下载PDF
禽传染性支气管炎病毒S2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定 被引量:3
17
作者 李忠斐 周建卫 +4 位作者 张焕东 彭莉 颜焰 周继勇 廖敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期942-950,共9页
为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白,将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类... 为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb),本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白,将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株,分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类鉴定结果显示4株MAb的重链均为Ig G1,轻链均为κ。采用间接ELISA法检测上清及腹水效价,结果显示MAb细胞上清效价均不低于1∶12 800,腹水效价均不低于1∶51 200。采用western blot检测制备的S2蛋白MAb与IBV感染鸡胚尿囊液后天然表达的S2蛋白的反应原性;采用间接免疫荧光试验(IFA)检测IBV感染非洲绿猴肾细胞(Vero)后天然表达的S2蛋白的反应原性。Western blot结果显示,感染IBV的鸡胚尿囊液中出现了90 ku左右的特异性条带;IFA结果显示,感染IBV的Vero细胞中出现绿色荧光。以上结果表明,制备的S2蛋白MAb能够与天然表达的S2蛋白反应,反应原性较强。利用间接ELISA检测MAb与S2蛋白的亲和力,结果显示4株MAb对S2蛋白均有良好的亲和力。利用一系列表达部分重叠的重组S2片段并经western blot鉴定4株MAb识别的抗原表位,结果显示,1A7、4F12、4A7 MAb识别的抗原表位是^(69)VQINCLQYVCGSSLECRKLFQQ^(90),4D1MAb识别的抗原表位是^(175)YKKCTAGPLGTLKDLI^(190)。采用IFA检测MAb的中和活性,结果显示,4株MAb均不具有中和活性。通过western blot检测MAb的反应谱,结果显示,MAb均能够与所选不同基因型(GI-1、GI-7、GI-13、GI-19、GI-22、GI-23) IBV发生特异性反应,表明制备的MAb反应谱较广。本研究为进一步探究IBV S2蛋白的功能及病毒致病机制奠定了基础。 展开更多
关键词 禽传染性支气管炎病毒 S2蛋白 单克隆抗体 抗原表位
在线阅读 下载PDF
BCMA靶向的嵌合抗原受体T细胞治疗复发/难治多发性骨髓瘤患者发生肿瘤溶解综合征的危险因素 被引量:2
18
作者 张棋琦 祖成 +3 位作者 孟夜 吕雨琦 胡永仙 黄河 《浙江大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期144-150,共7页
目的:探究应用B细胞成熟抗原(BCMA)靶向的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗的复发/难治多发性骨髓瘤(MM)患者发生肿瘤溶解综合征(TLS)的危险因素。方法:收集浙江大学医学院附属第一医院2018年7月至2021年12月共99例接受BCMA靶向的CAR-T细胞治... 目的:探究应用B细胞成熟抗原(BCMA)靶向的嵌合抗原受体(CAR)T细胞治疗的复发/难治多发性骨髓瘤(MM)患者发生肿瘤溶解综合征(TLS)的危险因素。方法:收集浙江大学医学院附属第一医院2018年7月至2021年12月共99例接受BCMA靶向的CAR-T细胞治疗MM患者的临床资料,通过单因素分析及多因素logistic回归分析患者接受BCMA靶向的CAR-T细胞治疗后发生TLS的危险因素。结果:99例患者中,17例发生TLS(TLS组),发生率为17.2%,发生时间为BCMA靶向的CAR-T细胞输注后(8.9±3.0)d。TLS组均出现TLS相关临床表现,其中出现肾功能不全17例,心律失常8例。TLS组均发生细胞因子释放综合征(CRS),发生时间为BCMA靶向CAR-T细胞输注后1.0(1.0,6.5)d,其中3~4级CRS 13例。TLS组治疗前血肌酐、血尿酸较非TLS组高,3~4级CRS患者的比例也高于非TLS组(P<0.01或P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,高血肌酐水平(OR=1.015,P<0.01)和严重CRS(OR=9.371,P<0.01)是TLS发生的独立危险因素。结论:接受BCMA靶向的CAR-T细胞治疗的复发/难治MM患者具有较高的TLS发生率,高血肌酐水平和严重CRS是TLS的主要危险因素,临床可通过降低血肌酐、控制CRS严重程度预防TLS的发生。 展开更多
关键词 多发性骨髓瘤 嵌合抗原受体T细胞 B细胞成熟抗原 肿瘤溶解综合征 危险因素
在线阅读 下载PDF
不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白可溶性表达及免疫反应性比较 被引量:1
19
作者 冯梦珂 王星博 +3 位作者 林璐璐 崔明仙 颜焰 周继勇 《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2023年第6期873-880,共8页
本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a... 本研究旨在系统性地探究不同原核表达载体对非洲猪瘟病毒CD2v蛋白的可溶性表达差别,并利用临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清比较包涵体和可溶性CD2v蛋白的免疫反应性。利用5种原核表达载体pCold-TF、pET28a、pMAL-C6T、pGEX-4T-1、pET32a分别表达去除信号肽和跨膜区的非洲猪瘟病毒CD2v蛋白,利用镍-氨三乙酸(nickel-nitrilotriacetic acid,Ni-NTA)亲和层析法分别纯化源自pET28a和pCold-TF表达载体的包涵体和可溶性CD2v蛋白,并用间接酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)方法比较纯化蛋白的免疫反应性。结果显示,pCold-TF载体以表达可溶性蛋白为主,pMAL-C6T载体同时表达包涵体和可溶性蛋白,而其他载体主要表达包涵体蛋白。临床非洲猪瘟病毒抗体阳性血清检测数据显示,可溶性蛋白的免疫反应性显著优于包涵体蛋白(P<0.05)。pCold-TF载体的触发因子(trigger factor,TF)标签可促进CD2v蛋白的可溶性表达,其表达蛋白的免疫反应性优于包涵体蛋白。本研究结果为CD2v蛋白的免疫原性研究奠定了基础,亦为其他重要抗原的可溶性表达提供了思路。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 CD2v蛋白 原核表达 可溶性表达 免疫反应性
在线阅读 下载PDF
3株H3N2亚型禽流感病毒的基因组特征与演化分析
20
作者 崔明仙 王星博 +5 位作者 黄彦铭 卞希一 冯梦珂 颜焰 董伟仁 周继勇 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期4116-4122,共7页
旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%(71/923);共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,... 旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%(71/923);共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,其HA和NA基因相似性分别为93.4%~100%和94.0%~99.9%,分离株内部基因片段来源复杂,与H1N2、H1N4、H10N7等亚型亲缘关系密切;遗传进化分析显示,H3N2亚型AIV主要流行于华东地区,鸭是其主要宿主,3株H3N2亚型分离株HA和NA基因均属于禽源进化分支;分离株HA蛋白裂解位点均为PEKQTR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒特征,HA蛋白与受体结合相关位点为226Q和228G,PB2蛋白与哺乳动物适应性相关的氨基酸位点为627E,均不同于人流感病毒对应蛋白的相关位点(226L、228S和627K),推测其跨种传播至人的潜力较低;分离株PB1蛋白的66位氨基酸突变为S,提示其对哺乳动物的致病性可能增强。综上所述,本研究分离的H3N2亚型AIV符合低致病性禽流感病毒特征,基因片段来源复杂,跨种传播至人的潜力较低,但是否影响对宿主的致病性仍需进一步探究。 展开更多
关键词 H3N2亚型禽流感病毒 浙江地区 遗传进化 氨基酸变异
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 下一页 到第
使用帮助 返回顶部