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单核细胞增生李斯特菌σ~B启动子报告质粒的构建及其在应激研究中的应用 被引量:3
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作者 夏叶 辛永萍 +2 位作者 李肖梁 方维焕 江玲丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期211-215,共5页
为探索人畜共患单核细胞增生李斯特菌的应激调控因子Sigma B(σ^B)在抗应激过程中的激活机制,本研究以pERL3为骨架,通过SOE-PCR技术构建携带3种不同σ^B依赖型启动子控制下的gfp基因的报告质粒,并利用荧光酶标仪分析携带这些报告质粒... 为探索人畜共患单核细胞增生李斯特菌的应激调控因子Sigma B(σ^B)在抗应激过程中的激活机制,本研究以pERL3为骨架,通过SOE-PCR技术构建携带3种不同σ^B依赖型启动子控制下的gfp基因的报告质粒,并利用荧光酶标仪分析携带这些报告质粒载体的单增李斯特菌在酸或盐应激条件下的σ^B活性以及不同σ^B调控子在应激条件下对σ^B激活能力的影响。结果显示:sigB自身启动子PsigB比P0880和P1602更为敏感,可以准确指示σ^B的活性;盐应激比酸应激对σ^B的激活程度高;5%的NaCl和30 min的应激时间足以对σ^B产生显著的激活效应;rsbS、rsbT和rsbV基因缺失显著降低σ^B在应激中的激活水平,而rsbX基因不介导应激诱导的σ^B激活。本研究所构建的GFP报告质粒可以准确指示单增李斯特菌的σ^B活性,可以用于应激条件下σ^B激活机制的研究。 展开更多
关键词 单核细胞增生李斯特菌 SIGMA B 绿色荧光蛋白 盐应激
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鸡传染性法氏囊病病毒(ZJ2000)基因组B节段全长的克隆及其毒力位点的分析预测 被引量:2
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作者 魏永伟 郑江涛 +2 位作者 王连胜 李龙 于涟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期252-256,共5页
将本实验室保存的ZJ2000株囊毒加生理盐水研磨后接种9~10日龄鸡胚增殖病毒,收集尿囊液透析纯化,用蛋白酶K法提取病毒基因组dsRNA。通过RT-PCR获得基因组B节段全长的cDNA,并将其克隆到PUC18-T载体中进行测序。同时,本研究对GenBank中登... 将本实验室保存的ZJ2000株囊毒加生理盐水研磨后接种9~10日龄鸡胚增殖病毒,收集尿囊液透析纯化,用蛋白酶K法提取病毒基因组dsRNA。通过RT-PCR获得基因组B节段全长的cDNA,并将其克隆到PUC18-T载体中进行测序。同时,本研究对GenBank中登录的IBDV基因组B节段进行了大量分析,发现B节段的5′-NCR存在1个基因高突变区,并且ZJ2000株的5′-NCR可形成独特的二级结构。经过对VP1一级结构的大量分析,筛选出B节段中17个可能对IBDV毒力产生影响的候选毒力位点,并在此基础上又对这些位点氨基酸的特性进行统计分析,进一步探讨了这些位点对VP1功能影响的可能性,为深入研究IBDV基因组B节段对其毒力的影响作了有益的探索。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒 基因组B节段全长 克隆
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猪瘟病毒基因2型流行毒株和疫苗C株抗血清与相应E2蛋白交叉免疫反应性分析 被引量:2
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作者 廖迅 王作欢 +3 位作者 曹统 谷元兴 李肖梁 方维焕 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期172-176,共5页
为研究猪瘟病毒(CSFV)2.1基因亚型病毒株和疫苗C株E2蛋白与相应抗血清的免疫反应性差异,本研究在分析4株CSFV浙江流行株(QZ-14、JH-14、QZ-07和HZ-08)与疫苗C株E2变异程度的基础上,制备了流行病毒株和疫苗C株全病毒猪抗血清以及针对流行... 为研究猪瘟病毒(CSFV)2.1基因亚型病毒株和疫苗C株E2蛋白与相应抗血清的免疫反应性差异,本研究在分析4株CSFV浙江流行株(QZ-14、JH-14、QZ-07和HZ-08)与疫苗C株E2变异程度的基础上,制备了流行病毒株和疫苗C株全病毒猪抗血清以及针对流行株E2的单克隆抗体(MAb)4F4,比较了它们与同源株和异源株重组杆状病毒表达的E2蛋白的亲和性。结果显示,4株浙江分离株中2株(QZ-14和JH-14)属于亚型2.1d,另2株(QZ-07和HZ-08)为亚型2.1b,它们与C株E2的核苷酸同源性在82%~84%;间接免疫荧光鉴定显示MAb 4F4能够识别4株流行株,但不与C株反应;接种流行株的动物均出现不同程度临床症状;ELISA分析显示疫苗C株血清与流行株E2蛋白的反应性约为C株E2蛋白的27%~49%,2株流行株感染血清与C株E2蛋白反应性约为流行株E2蛋白的34%~50%,免疫印迹分析显示类似结果。以上结果表明CSFV基因2型流行株与疫苗C株E2蛋白的差异显著影响其与相应抗血清的交叉免疫反应性,这一现象是否与C株猪瘟疫苗免疫保护效果下降有关还有待于进一步研究。 展开更多
关键词 猪瘟病毒 囊膜糖蛋白E2 抗原性变异
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