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猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定: 1; 作者张丹卢舒婷 +8 位作者卢辰赫王子仪徐丽华陈伊玄王圣文金子安倪成章周继勇郑肖娟《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期424-434,共11页; 为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以... 展开更多; 关键词猫冠状病毒核衣壳蛋白可溶性表达多克隆抗体交叉反应性; 在线阅读下载PDF 职称材料

猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位被引量：1: 2; 作者王子仪金子安 +5 位作者卢辰赫乔治王圣文颜焰周继勇郑肖娟《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期744-754,共11页; 冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronaviru... 展开更多; 关键词猫冠状病毒非结构蛋白3 原核表达多克隆抗体亚细胞定位; 在线阅读下载PDF 职称材料

3株H3N2亚型禽流感病毒的基因组特征与演化分析: 3; 作者崔明仙王星博 +5 位作者黄彦铭卞希一冯梦珂颜焰董伟仁周继勇《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期4116-4122,共7页; 旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%(71/923);共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,... 展开更多; 关键词 H3N2亚型禽流感病毒浙江地区遗传进化氨基酸变异; 在线阅读下载PDF 职称材料

鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析: 4; 作者王圣文张丹 +2 位作者邬雨倩周继勇郑肖娟《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期137-146,共10页; 载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物... 展开更多; 关键词鸡载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达多克隆抗体亚细胞定位; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定: 1; 作者张丹卢舒婷卢辰赫王子仪徐丽华陈伊玄王圣文金子安倪成章周继勇郑肖娟; 机构浙江大学动物医学中心浙江省农业科学院畜牧兽医研究所浙江大学海南研究院; 出处《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期424-434,共11页; 基金浙江大学大学生科研训练计划(SRTP)项目(Y34462)。; 文摘为制备猫冠状病毒(feline coronavirus, FCoV)核衣壳(nucleocapsid, N)蛋白的特异性抗体,本研究将Ⅰ型FCoV(ZJU1709)的N蛋白基因全长c DNA亚克隆到pCold TF原核表达载体上,通过低温诱导表达、镍柱亲和纯化获得可溶性重组N蛋白;进一步以纯化的重组N蛋白为免疫原制备兔多克隆抗血清(多抗血清),再通过酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)、蛋白质印迹法(Western blotting, WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, IFA)等多种方法对兔多抗血清进行反应性鉴定。结果显示:经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside, IPTG)和低温诱导,成功表达出分子量约为100 kDa的可溶性重组N蛋白,在非变性条件下亲和纯化获得的重组N蛋白质量浓度达到1.4 mg/mL;N蛋白兔多抗血清的ELISA效价可达1×10^(6),与真核表达的重组蛋白Flag-N以及FCoV感染细胞中的N蛋白均具有良好的WB和IFA反应性。交叉反应性结果显示:该多克隆抗体能与α属冠状病毒中不同亚型的FCoV以及犬冠状病毒(canine coronavirus,CCoV)、猪传染性胃肠炎病毒(porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)的N蛋白发生反应,但不与β属冠状病毒中的严重急性呼吸综合征冠状病毒2(severe acute respiratory syndrome-related coronavirus 2, SARS-CoV-2)和γ属冠状病毒中的传染性支气管炎病毒(infectious bronchitis virus, IBV)的N蛋白发生反应。综上所述,以pCold TF原核系统表达的可溶性重组N蛋白具有良好的免疫原性,以该蛋白制备的FCoV N蛋白兔多抗血清能识别多种来自不同物种的α属冠状病毒N蛋白,但与β、γ属冠状病毒N蛋白没有交叉反应性,这为进一步研究FCoV复制机制以及开发高效的抗原和抗体检测技术奠定了基础。; 关键词猫冠状病毒核衣壳蛋白可溶性表达多克隆抗体交叉反应性; Keywords feline coronavirus nucleocapsid(N)protein soluble expression polyclonal antibody cross-reactivity; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位被引量：1: 2; 作者王子仪金子安卢辰赫乔治王圣文颜焰周继勇郑肖娟; 机构浙江大学动物医学中心浙江大学海南研究院浙江大学-帕特诺尔联合研发中心; 出处《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期744-754,共11页; 基金浙江大学-帕特诺尔联合研发中心项目(K20211327)。; 文摘冠状病毒的非结构蛋白3(non-structural protein 3,Nsp3)是复制/转录复合体的组成部分,也是重要的潜在抗病毒靶标之一。本研究在对Nsp3进行跨膜区、信号肽和抗原表位预测的基础上,通过聚合酶链反应扩增Ⅱ型猫冠状病毒(feline coronavirus,FCoV)代表毒株(WSU 79-1683)Nsp3蛋白中抗原性较好的区段(第50—550位氨基酸),随后将其亚克隆到pCOLD-TF原核表达载体上。在低温条件下,经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷诱导,成功表达分子量约为130 kDa的His-Nsp3重组融合蛋白。在非变性条件下,采用镍柱亲和层析获得了纯度较高的目的重组蛋白。以纯化的重组蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,制备Nsp3多克隆抗血清(多抗血清),蛋白质印迹法(Western blotting,WB)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)结果显示,Nsp3多抗血清能特异性识别FCoV感染细胞中的Nsp3蛋白。采用免疫荧光双标法结合激光共聚焦显微镜对FCoV感染细胞中Nsp3蛋白的亚细胞定位进行分析,结果发现,FCoV感染细胞中Nsp3发生聚集现象,并与内质网存在共定位现象。Nsp3蛋白的特异性抗体制备以及亚细胞定位研究为进一步开展Nsp3蛋白的生物学功能分析奠定了基础。; 关键词猫冠状病毒非结构蛋白3 原核表达多克隆抗体亚细胞定位; Keywords feline coronavirus non-structural protein 3 prokaryotic expression polyclonal antibody subcellular location; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名3株H3N2亚型禽流感病毒的基因组特征与演化分析: 3; 作者崔明仙王星博黄彦铭卞希一冯梦珂颜焰董伟仁周继勇; 机构浙江大学动物医学中心农业农村部动物病毒学重点实验室; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期4116-4122,共7页; 基金国家自然科学基金重大项目(32192454) 现代农业产业技术体系岗位专家项目(CARS-40-K13)。; 文摘旨在了解浙江地区家禽H3N2亚型禽流感病毒(AIV)的流行变异情况,采用RT-PCR技术对2021年浙江923份样品进行检测,对AIV分离株进行分子特征及遗传演化分析。结果表明,AIV样品阳性率为7.69%(71/923);共分离到2株鸡源和1株鸭源H3N2亚型AIVs,其HA和NA基因相似性分别为93.4%~100%和94.0%~99.9%,分离株内部基因片段来源复杂,与H1N2、H1N4、H10N7等亚型亲缘关系密切;遗传进化分析显示,H3N2亚型AIV主要流行于华东地区,鸭是其主要宿主,3株H3N2亚型分离株HA和NA基因均属于禽源进化分支;分离株HA蛋白裂解位点均为PEKQTR↓GLF,符合低致病性禽流感病毒特征,HA蛋白与受体结合相关位点为226Q和228G,PB2蛋白与哺乳动物适应性相关的氨基酸位点为627E,均不同于人流感病毒对应蛋白的相关位点(226L、228S和627K),推测其跨种传播至人的潜力较低;分离株PB1蛋白的66位氨基酸突变为S,提示其对哺乳动物的致病性可能增强。综上所述,本研究分离的H3N2亚型AIV符合低致病性禽流感病毒特征,基因片段来源复杂,跨种传播至人的潜力较低,但是否影响对宿主的致病性仍需进一步探究。; 关键词 H3N2亚型禽流感病毒浙江地区遗传进化氨基酸变异; Keywords H3N2-subtype avian influenza virus Zhejiang province genetic evolution amino acid variation; 分类号 S852.659.5 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析: 4; 作者王圣文张丹邬雨倩周继勇郑肖娟; 机构浙江大学动物医学中心; 出处《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期137-146,共10页; 基金国家自然科学基金项目(31672555)。; 文摘载脂蛋白A-Ⅰ(apolipoprotein A-Ⅰ,Apo A-Ⅰ)在动脉粥样硬化、病毒感染、脂质代谢等方面发挥重要的调控作用。目前关于鸡载脂蛋白A-Ⅰ(chicken Apo A-Ⅰ,chApo A-Ⅰ)的研究较少,对其生物学功能尚不清楚。本研究在对chApo A-Ⅰ进行生物信息学分析的基础上,通过p ET-28a原核表达系统对chApo A-Ⅰ的重组蛋白进行表达和纯化。利用纯化后的重组蛋白免疫小鼠,制备鼠多克隆抗血清(多抗血清),通过酶联免疫吸附测定(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)检测其效价,并通过蛋白质印迹法(Western blot,WB)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)鉴定其反应性,随后利用多抗血清对chApo A-Ⅰ进行亚细胞定位分析。生物信息学分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白在第1—18位氨基酸处含有信号肽,由N端的连续α螺旋构成。氨基酸序列同源性分析显示,chApo A-Ⅰ蛋白与火鸡的同源性最高,与鱼类的同源性最低。利用成功表达和纯化的重组蛋白His-chApo A-Ⅰ制备多抗血清,其ELISA效价达1×10^(5)以上,与真核表达的chApo A-Ⅰ蛋白有WB和IFA反应性,能识别鸡血清中的Apo A-Ⅰ蛋白,而与鼠、兔、牛、猪血清中的Apo A-Ⅰ蛋白无交叉反应性。利用该多克隆抗体对全长片段chApo A-Ⅰ-FL和不含信号肽的片段chApo A-Ⅰ-NS进行亚细胞定位分析,经共聚焦显微镜观察发现,chApo A-Ⅰ-FL蛋白大多分布在细胞膜附近,而chApo A-Ⅰ-NS蛋白则定位于细胞胞浆中,且多数呈弥散分布。chApo A-Ⅰ蛋白的特异性多克隆抗体和亚细胞定位结果为进一步开展Apo A-Ⅰ的生物学功能研究奠定了基础。; 关键词鸡载脂蛋白A-Ⅰ 原核表达多克隆抗体亚细胞定位; Keywords chicken apolipoprotein A-Ⅰ prokaryotic expression polyclonal antibody subcellular localization; 分类号 S855.3 [农业科学—临床兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	猫冠状病毒核衣壳蛋白的可溶性表达与多克隆抗体反应性鉴定	张丹卢舒婷卢辰赫王子仪徐丽华陈伊玄王圣文金子安倪成章周继勇郑肖娟	《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2023	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猫冠状病毒非结构蛋白3的多克隆抗体制备及亚细胞定位	王子仪金子安卢辰赫乔治王圣文颜焰周继勇郑肖娟	《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2023	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	3株H3N2亚型禽流感病毒的基因组特征与演化分析	崔明仙王星博黄彦铭卞希一冯梦珂颜焰董伟仁周继勇	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2022	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	鸡载脂蛋白A-Ⅰ的多克隆抗体制备及亚细胞定位分析	王圣文张丹邬雨倩周继勇郑肖娟	《浙江大学学报(农业与生命科学版)》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料