鸡传染性支气管炎病毒变异株的分离及分子特征研究 被引量：7

1

作者 边葶苈 朱林文思 +4 位作者 雷静 任景乐 李烨 周继勇 廖敏 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期960-963,共4页

为了解近年来鸡传染性支气管炎病毒（IBv）分子生物学特征及其变异情况，本研究以最近从山东潍坊某鸡场产蛋鸡卵巢中分离的一株IBV WF2011为研究对象，进行基因2～基因6的基因组测序及分析。结果表明分离株3’端基因组具有典型的IBV基... 为了解近年来鸡传染性支气管炎病毒（IBv）分子生物学特征及其变异情况，本研究以最近从山东潍坊某鸡场产蛋鸡卵巢中分离的一株IBV WF2011为研究对象，进行基因2～基因6的基因组测序及分析。结果表明分离株3’端基因组具有典型的IBV基因编码特征5’．S．3a．3b．E．M．5a．5b．N．3’，S蛋白裂解位点为ⅫRRSRR，，与美国株Gray、Holte、JMK、Conn46和韩国株SNU8067的s蛋白裂解位点相同。同源性比较和系统进化分析显示，WF2011分离株与常见的参考病毒株的同源性普遍较低，s1基因的同源性在49．7％～86．0％之间，并且与LX4、SAlBK和Mass类型的病毒株存在较大的遗传距离。WF2011是一株变异程度比较大的IBV变异株。 展开更多

关键词 鸡传染性支气管炎病毒 变异株 遗传进化分析

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冠状病毒非结构蛋白的研究进展 被引量：19

2

作者 边葶苈 周继勇 廖敏 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第4期67-74,共8页

冠状病毒(Coronavirus)家族成员是许多家畜、宠物包括人类的重要病原,引起多种急性和慢性疾病。冠状病毒有一巨大的基因组RNA,全长27~32 kb,编码结构蛋白、非结构蛋白和一些辅助蛋白。冠状病毒非结构蛋白(nonstructural prtein,nsp)由... 冠状病毒(Coronavirus)家族成员是许多家畜、宠物包括人类的重要病原,引起多种急性和慢性疾病。冠状病毒有一巨大的基因组RNA,全长27~32 kb,编码结构蛋白、非结构蛋白和一些辅助蛋白。冠状病毒非结构蛋白(nonstructural prtein,nsp)由病毒编码的多聚蛋白1a/1ab水解而来,共有15或16个。这些非结构蛋白参与调节病毒基因组RNA的复制和亚基因组RNA的转录,或作为转录/复制复合体参与基因组的复制转录,并参与感染宿主等过程,是冠状病毒重要的功能蛋白。随着冠状病毒引起的严重急性呼吸系统综合症(severe acute respiratory syndrome,SARS)在中国乃至全球的爆发,对冠状病毒尤其是其非结构蛋白的研究得到越来越多的重视。本文就冠状病毒非结构蛋白的研究进展做一综述。 展开更多

关键词 冠状病毒 非结构蛋白 研究进展

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Hsp90AB1在狂犬病病毒复制过程中的功能初探 被引量：2

3

作者 许运斌 孙玉章 +4 位作者 刘娟 颜焰 高兴红 罗果 王欢 《动物医学进展》 北大核心 2018年第6期1-5,共5页

为了探究宿主蛋白Hsp90AB1在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制过程中的功能,以RABV疫苗毒株HEP-Flury感染鼠神经瘤母细胞N2a为模型,分析Hsp90AB1对RABV复制的影响。采用RNA干扰的方式,发现Hsp90AB1基因敲降后可影响病毒基因的转录及... 为了探究宿主蛋白Hsp90AB1在狂犬病病毒(Rabies virus,RABV)复制过程中的功能,以RABV疫苗毒株HEP-Flury感染鼠神经瘤母细胞N2a为模型,分析Hsp90AB1对RABV复制的影响。采用RNA干扰的方式,发现Hsp90AB1基因敲降后可影响病毒基因的转录及其表达,而未影响病毒的反基因组水平以及病毒感染力,表明Hsp90AB1在转录或蛋白表达水平上影响RABV的复制。由此初步发现Hsp90AB1在RABV复制过程中的作用方式,为继续深入研究Hsp90AB1在RABV感染过程中的作用机制提供了基础数据。 展开更多

关键词 热休克蛋白90AB1 狂犬病病毒 复制 功能

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传染性支气管炎病毒非结构蛋白nsp5在真核细胞中的重组表达及鉴定 被引量：1

4

作者 耿阳 牟小东 +3 位作者 刘然 边葶苈 廖敏 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第2期11-16,共6页

本文以嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得IBV非结构蛋白5(non-structural protein,nsp5)基因片段后,构建了杆状病毒重组质粒IBVnsp5-Bacmid。IBVnsp5-Bacmid转染Sf9细胞... 本文以嗜肾型鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus,IBV)毒株的RNA为模板,通过RT-PCR扩增获得IBV非结构蛋白5(non-structural protein,nsp5)基因片段后,构建了杆状病毒重组质粒IBVnsp5-Bacmid。IBVnsp5-Bacmid转染Sf9细胞,获得nsp5重组杆状病毒,经(immunofluorescence assay,IFA)和Western blot检测到转染细胞表达的nsp5蛋白。进一步从感染的细胞中纯化重组蛋白,并用纯化的蛋白免疫小鼠制备了抗nsp5的多抗血清,该多抗血清可检测到IBV四川株SC021202感染的DF-1细胞中特异性的nsp5蛋白。结果表明IBV nsp5在Bac-to-Bac真核表达系统中获得了成功表达,而且具有良好的免疫原性和反应原性。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 非结构蛋白5 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统

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Hsp90AA1识别狂犬病病毒磷蛋白截短体及磷酸化位点突变体的研究 被引量：1

5

作者 许运斌 孙玉章 +4 位作者 刘娟 颜焰 高兴红 罗果 王欢 《动物医学进展》 北大核心 2018年第7期32-36,共5页

为了探究热休克蛋白90AA1(Hsp90AA1)识别狂犬病病毒(RV)磷蛋白(P)截短体及磷酸化位点突变体的能力,构建RV P蛋白多种截短体和磷酸化位点突变体,分别与Hsp90AA1真核表达载体共转染于鼠神经瘤母细胞(N2a)。免疫共沉淀分析显示Hsp90AA1能... 为了探究热休克蛋白90AA1(Hsp90AA1)识别狂犬病病毒(RV)磷蛋白(P)截短体及磷酸化位点突变体的能力,构建RV P蛋白多种截短体和磷酸化位点突变体,分别与Hsp90AA1真核表达载体共转染于鼠神经瘤母细胞(N2a)。免疫共沉淀分析显示Hsp90AA1能够广泛识别RV P蛋白的多种截短体和不同的磷酸化突变体。结果提示,Hsp90AA1在RABV感染过程中有着广泛的作用,这对解析RABV复杂的复制机理具有重要的意义。 展开更多

关键词 Hsp90AA1 狂犬病病毒 磷蛋白 相互作用

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狂犬病病毒磷蛋白在杆状病毒系统的表达及鉴定 被引量：1

6

作者 许运斌 徐洁萍 +3 位作者 张金阳 昝洁 阮系真 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第2期17-22,共6页

为了建立狂犬病毒磷蛋白(phosphoprotein,P)的体外表达系统,本研究将RT-PCR扩增的狂犬病病毒ERA株P蛋白基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA,构建重组质粒pFastBacHTA-P,并转染昆虫细胞Sf9包装形成重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示重... 为了建立狂犬病毒磷蛋白(phosphoprotein,P)的体外表达系统,本研究将RT-PCR扩增的狂犬病病毒ERA株P蛋白基因克隆于杆状病毒转移载体pFastBacHTA,构建重组质粒pFastBacHTA-P,并转染昆虫细胞Sf9包装形成重组杆状病毒。SDS-PAGE分析显示重组质粒pFastBacHTA-P转染的Sf9细胞中出现了分子量约为42 kDa的蛋白条带,Western blot证实分子量约为42 kDa的蛋白能与抗His的单克隆抗体发生特异性反应,间接免疫荧光(indirect immunofluorescence assay,IFA)分析进一步显示Sf9细胞表达的P蛋白与抗P蛋白单克隆抗体能特异性结合。这些实验证明,狂犬病病毒P蛋白不仅在Sf9细胞中获得表达,而且具有良好的免疫反应性。狂犬病病毒P蛋白杆状病毒表达体系的建立,为蛋白结构的解析和诊断试剂的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 狂犬病病毒 P蛋白 杆状病毒表达系统

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免疫鸡群H5N1和H9N2亚型禽流感病毒混合感染及H9N2亚型病毒进化分析

7

作者 曾嘉梅 房栋 +3 位作者 卞学兵 王俊桦 颜焰 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2012年第2期65-70,共6页

本研究分析了免疫鸡群H5N1和H9N2亚型禽流感病毒混合感染中H9N2亚型分离毒株A/chicken/Yuyao/01/2010(H9N2)的基因组特征。氨基酸序列分析显示,HA蛋白裂解位点为PSRSSR/GL,具有低致病性禽流感病毒特征,HA受体结合位点出现了人流感病毒... 本研究分析了免疫鸡群H5N1和H9N2亚型禽流感病毒混合感染中H9N2亚型分离毒株A/chicken/Yuyao/01/2010(H9N2)的基因组特征。氨基酸序列分析显示,HA蛋白裂解位点为PSRSSR/GL,具有低致病性禽流感病毒特征,HA受体结合位点出现了人流感病毒结合位点226L,D基因出现了S31N的突变。遗传分析表明,A/chicken/Yuyao/01/2010病毒的HA基因、NA基因和NS基因在进化上属于CK/BJ/94-Like谱系,D基因和PB2基因属于G1-Like谱系,NP基因、PA基因和PB1基因属于Ck/SH/F/98-Like谱系。结果表明,从H5N1和H9N2亚型混合感染鸡体内分离的H9N2亚型禽流感病毒是一株来源于CK/BJ/94-Like谱系、G1-Like谱系和Ck/SH/F/98-Like谱系的重组病毒。 展开更多

关键词 禽流感 混合感染 H9N2 分子进化分析

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免疫鸡群中分离的H9N2亚型禽流感病毒的分子特征研究 被引量：8

8

作者 卞学兵 曾嘉梅 +2 位作者 颜焰 廖敏 周继勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期15-18,共4页

为研究浙江省禽流感病毒(AIV)的流行病学情况,本实验应用鸡胚传代方法从AIV疫苗免疫鸡群中表现典型呼吸症状的产蛋鸡体内分离1株H9N2亚型AIV A/Chicken/Jiande/01/2009(H9N2)。氨基酸序列分析显示,HA受体结合位点出现了人流感病毒结合位... 为研究浙江省禽流感病毒(AIV)的流行病学情况,本实验应用鸡胚传代方法从AIV疫苗免疫鸡群中表现典型呼吸症状的产蛋鸡体内分离1株H9N2亚型AIV A/Chicken/Jiande/01/2009(H9N2)。氨基酸序列分析显示,HA受体结合位点出现了人流感病毒结合位点226L,M基因出现S31N的突变。遗传进化分析显示,A/Chicken/Jiande/01/2009的M基因和PB2基因属于G1-Like谱系,HA基因、NA基因和NS基因属于Ck/BJ/1/94-Like分支,而NP基因、PA基因和PB1基因属于Ck/SH/F/98-Like谱系。这些资料表明,A/Chicken/Jiande/01/2009(H9N2)为一株重排病毒。 展开更多

关键词 禽流感病毒 H9N2 遗传进化

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传染性法氏囊病病毒蛋白功能的研究进展 被引量：3

9

作者 孙晓媛 王三应 +1 位作者 周继勇 廖敏 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第3期81-86,共6页

传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)是引起急性、高度接触性鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)的病原体。该病毒感染引起的高传染性和免疫抑制给养禽业带来巨大的经济损失,3周龄以下鸡群感染是... 传染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus,IBDV)是引起急性、高度接触性鸡传染性法氏囊病(infectious bursal disease,IBD)的病原体。该病毒感染引起的高传染性和免疫抑制给养禽业带来巨大的经济损失,3周龄以下鸡群感染是导致免疫抑制和免疫缺陷时诱发二次感染和对其他病原免疫失败的重要原因。IBDV的研究得到越来越多的重视,对IBDV编码蛋白功能的认识有助于深入了解IBDV的致病机制,也为IBD的防控提供了重要依据。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 蛋白 研究进展

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微生物蛋白质组学研究现状 被引量：1

10

作者 金玉兰 邢刚 阮系真 《浙江畜牧兽医》 2014年第1期18-20,共3页

随着人类基因组的绘制成功,标志着后基因组时代的到来.由于基因的功能主要是通过其表达的蛋白质来实现,要了解该基因的全部信息,必须对其编码的蛋白质进行深入研究.蛋白质组学分析为研究微生物的生命活动和细胞功能提供了广阔的视野.因... 随着人类基因组的绘制成功,标志着后基因组时代的到来.由于基因的功能主要是通过其表达的蛋白质来实现,要了解该基因的全部信息,必须对其编码的蛋白质进行深入研究.蛋白质组学分析为研究微生物的生命活动和细胞功能提供了广阔的视野.因此,蛋白质组学在生命科学研究中具有十分重要的位置,随着研究的不断深入,蛋白质组学必将对人类的生活和生产带来十分重大的影响.本文主要就目前微生物蛋白质组学的研究现状进行简要阐述. 展开更多

关键词 蛋白质组学 微生物 人类基因组 后基因组时代 细胞功能 生命活动 科学研究

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两种PCV2抗体ELISA检测试剂盒检测效果比较 被引量：1

11

作者 邢刚 邱小伙 +1 位作者 阮系真 金玉兰 《浙江畜牧兽医》 2014年第1期1-3,共3页

为研究比较国内市售两种PCV2抗体ELISA检测试剂盒(ZJ-ELISA、HB-ELISA)的检测效果,以期为猪群PCV2抗体监测选择试剂盒提供参考。首先通过间接免疫荧光方法(IFA)测定44份猪血清的PCV2抗体滴度,并以此为标准,判定猪血清中PCV2抗体的阴阳性... 为研究比较国内市售两种PCV2抗体ELISA检测试剂盒(ZJ-ELISA、HB-ELISA)的检测效果,以期为猪群PCV2抗体监测选择试剂盒提供参考。首先通过间接免疫荧光方法(IFA)测定44份猪血清的PCV2抗体滴度,并以此为标准,判定猪血清中PCV2抗体的阴阳性,然后利用两种PCV2抗体ELISA检测试剂盒分别测定上述血清的OD值,并判定PCV2抗体阴阳性。通过计算各种试剂盒检测结果与IFA检测结果的符合率以及配对卡方检验及Kappa检验,判定最优检测试剂盒。结果表明,国内市售两种PCV2抗体检测试剂盒与IFA检测结果的总符合率均为86.36%(38/44),配对卡方检验及Kappa检验表明国产试剂盒与IFA检测结果差异不显著。 展开更多

关键词 PCV2抗体检测试剂盒 间接免疫荧光方法(IFA) 配对卡方检验及Kappa检验

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细胞质膜蛋白质组学技术研究进展

12

作者 高艳 吴永平 周继勇 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第1期75-80,共6页

质膜蛋白在细胞生命活动中执行着重要功能。高通量蛋白质组学技术结合生物信息学研究策略的迅速发展,为质膜蛋白的研究提供了新的手段和方法。本文从质膜蛋白的分离和富集、质膜蛋白复合物的分离、质膜蛋白的增溶及质膜蛋白质的生物信... 质膜蛋白在细胞生命活动中执行着重要功能。高通量蛋白质组学技术结合生物信息学研究策略的迅速发展,为质膜蛋白的研究提供了新的手段和方法。本文从质膜蛋白的分离和富集、质膜蛋白复合物的分离、质膜蛋白的增溶及质膜蛋白质的生物信息学研究四方面对质膜蛋白质组学研究技术进行了综述。 展开更多

关键词 质膜 蛋白质组学 蛋白增溶

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