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一种基于菌丝悬浮液的核盘菌(Sclerotinia sclerotiorum)接种方法的建立 被引量：16
1
作者 臧宪朋 徐幼平 蔡新忠 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期381-386,共6页
通过分析核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)菌丝培养时间、菌丝体浓度以及接种后的保湿时间等因子对接种后油菜植株发病的影响,建立了一套有效的基于菌丝悬浮液的核盘菌喷雾接种方法体系.主要步骤包括:从在平板活化3 d后核盘菌菌落边缘... 通过分析核盘菌(Sclerotiniasclerotiorum)菌丝培养时间、菌丝体浓度以及接种后的保湿时间等因子对接种后油菜植株发病的影响,建立了一套有效的基于菌丝悬浮液的核盘菌喷雾接种方法体系.主要步骤包括:从在平板活化3 d后核盘菌菌落边缘打取菌碟(Φ6 mm),按10块?100 mL-1加入液体培养基中,25℃、200 r?min-1下振荡培养4 d,用匀浆机匀浆30 s制成菌丝悬浮液,终浓度调至600 nm波长下吸光度值为1.0～2.0,用空压机喷雾接种油菜植株,保湿48 h.该方法适用于油菜苗期对菌核病的抗病性评价,还可用于立枯丝核菌(Rhizoctoniasolani)的接种研究. 展开更多
关键词 核盘菌 菌丝悬浮液 接种方法 立枯丝核菌 抗病性评价
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适于烟草脆裂病毒诱导的本氏烟基因沉默分析的对照载体构建(英文) 被引量：6
2
作者 程维舜 徐秋芳 +2 位作者 黎飞 徐幼平 蔡新忠 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期10-20,共11页
对烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默分析体系中目前最常用的对照载体——空pYL156载体(pYL156∷00)对沉默处理后番茄和本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株的病毒症状和生长影响进行分析.结果表明:pYL156∷00沉默... 对烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)诱导的基因沉默分析体系中目前最常用的对照载体——空pYL156载体(pYL156∷00)对沉默处理后番茄和本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株的病毒症状和生长影响进行分析.结果表明:pYL156∷00沉默处理后的番茄和本氏烟植株均表现出严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,因此,pYL156∷00并不是一个用于TRV诱导的番茄和本氏烟基因沉默分析的好的对照载体;为获得更好的对照载体,试验构建了2个新的对照载体pYL156∷NIRi和pYL156∷eGFP,它们分别通过在pYL156∷00载体多克隆位点插入253bp菜豆亚硝酸还原酶基因内含子序列和400bp eGFP基因片段而获得,对这2个对照载体对沉默处理后本氏烟植株的病毒症状和生长情况的影响与pYL156∷00进行比较分析.结果表明:pYL156∷00沉默处理后的植株表现出较严重的系统性病毒症状,生长受到显著抑制,其中26.7%植株死亡;pYL156∷NIRi沉默处理后的植株也表现出明显的病毒症状以及生长受抑制现象,但与pYL156∷00相比,所受影响较小,只有13.3%植株死亡;而pYL156∷eGFP沉默处理后的植株不表现明显的病毒症状,植株生长也不受显著影响;病毒积累量检测结果显示,3个对照载体沉默处理的植株病毒症状和生长受抑制情况与植株体内TRV病毒的积累水平密切相关.这些结果表明,新构建的pYL156∷eGFP可以作为一个优越的对照载体应用于TRV诱导的基因沉默分析. 展开更多
关键词 烟草脆裂病毒 基因沉默 对照载体 pYL156∷eGFP pYL156∷NIRi
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泛素融合降解蛋白基因UFD1对植物抗病和抗逆性的调控功能分析
3
作者 赖亿玉 黎飞 +1 位作者 徐幼平 蔡新忠 《浙江大学学报（农业与生命科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期21-27,共7页
采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)克隆获得1个番茄泛素融合降解蛋白(ubiquitin fusion degradation protein,UFD)基因片段UFD1,并应用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencin... 采用反转录-聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RT-PCR)克隆获得1个番茄泛素融合降解蛋白(ubiquitin fusion degradation protein,UFD)基因片段UFD1,并应用病毒诱导的基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术分析该基因对植物抗病性和抗逆性的调控功能.结果表明:在本氏烟(Nicotiana benthamiana)植株中UFD1基因的沉默导致Cf-4/Avr4和Cf-9/Avr9介导的过敏性反应(hypersensitive response,HR)以及水稻白叶枯病菌(Xanthomonas oryzae pv.oryzae,Xoo)诱导的HR显著减弱,烟草野火病坏死症状明显减轻,在高盐胁迫下叶片叶绿素含量显著降低,但对菌核病病害症状以及抗干旱能力的影响不明显.表明UFD1基因是植物抗病和抗逆性的重要调控因子,它可能对Cf-4/Cf-9介导的基因对基因抗性、对Xoo的非寄主抗性和耐盐性起正向调控作用,而对烟草野火病抗性起负调控作用. 展开更多
关键词 泛素融合降解蛋白 病毒诱导的基因沉默 抗病性 抗逆性 本氏烟
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