【目的】建立适合于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系,为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质组学研究提供参考。【方法】以茭白为试验材料,比较不同线粒体提取纯化方法、IPG胶条p H范围及蛋白上样量等条件对双向电泳图谱的影响。...【目的】建立适合于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系,为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质组学研究提供参考。【方法】以茭白为试验材料,比较不同线粒体提取纯化方法、IPG胶条p H范围及蛋白上样量等条件对双向电泳图谱的影响。【结果】差速离心（3000~14000×g）联合Percoll不连续密度梯度离心（20%∶24%∶40%=2∶4∶2）对茭白线粒体的提取纯化效果优于仅采用差速离心。采用改良酚抽法提取茭白线粒体蛋白,17 cm、p H 3~10的IPG胶条,1.0 mg上样量,12%SDS-PAGE进行双向电泳,0.12%考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,茭白线粒体蛋白主要分布在p H 4~8范围内,p H 3~4和p H 8~10范围内蛋白点较少;进一步选用p H 4~7和p H 5~8的IPG胶条对茭白线粒体蛋白进行双向电泳,分离效果均明显提高,且p H 4~7范围内IPG胶条的双向电泳图谱清晰,蛋白点分辨率较高。分别采用0.8、1.0和1.2 mg 3个不同的上样量进行双向电泳,结果表明上样量为1.0 mg时,电泳图谱质量最好。【结论】通过差速离心联合Percoll不连续密度梯度离心提取纯化茭白线粒体,并控制好双向电泳体系的p H范围、上样量等因素,可获得蛋白质点清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。展开更多
文摘【目的】建立适合于茭白线粒体蛋白质组分析的双向电泳技术体系,为进一步开展茭白线粒体差异蛋白质组学研究提供参考。【方法】以茭白为试验材料,比较不同线粒体提取纯化方法、IPG胶条p H范围及蛋白上样量等条件对双向电泳图谱的影响。【结果】差速离心（3000~14000×g）联合Percoll不连续密度梯度离心（20%∶24%∶40%=2∶4∶2）对茭白线粒体的提取纯化效果优于仅采用差速离心。采用改良酚抽法提取茭白线粒体蛋白,17 cm、p H 3~10的IPG胶条,1.0 mg上样量,12%SDS-PAGE进行双向电泳,0.12%考马斯亮蓝G-250胶体考染法染色,茭白线粒体蛋白主要分布在p H 4~8范围内,p H 3~4和p H 8~10范围内蛋白点较少;进一步选用p H 4~7和p H 5~8的IPG胶条对茭白线粒体蛋白进行双向电泳,分离效果均明显提高,且p H 4~7范围内IPG胶条的双向电泳图谱清晰,蛋白点分辨率较高。分别采用0.8、1.0和1.2 mg 3个不同的上样量进行双向电泳,结果表明上样量为1.0 mg时,电泳图谱质量最好。【结论】通过差速离心联合Percoll不连续密度梯度离心提取纯化茭白线粒体,并控制好双向电泳体系的p H范围、上样量等因素,可获得蛋白质点清晰、分辨率高、重复性好的双向电泳图谱。
