茯苓等4种中药扶植实验小鼠肠道正常菌群生长及其机理的初步研究 被引量：58

1

作者 曹俊敏 杨雪静 张伟珍 《中华中医药学刊》 CAS 2012年第2期393-395,共3页

目的:观察茯苓、当归、白术、三补4种中药对小鼠肠道正常菌群生长的影响,并探讨其机理。方法:用林可霉素制造小鼠菌群失调模型,以中药灌胃,取小鼠粪便进行肠道菌群检测,pH值测定。同时刮取盲肠上皮细胞进行细菌黏附试验。采用琼脂稀释... 目的:观察茯苓、当归、白术、三补4种中药对小鼠肠道正常菌群生长的影响,并探讨其机理。方法:用林可霉素制造小鼠菌群失调模型,以中药灌胃,取小鼠粪便进行肠道菌群检测,pH值测定。同时刮取盲肠上皮细胞进行细菌黏附试验。采用琼脂稀释法进行中药体外药敏试验。结果:菌群失调模型与正常对照相比,大肠埃希菌的菌量明显增多,乳酸杆菌、双歧杆菌的菌量在下降。各中药治疗组可降低菌群失调小鼠的pH值,中药白术、三补治疗组吸附的大肠埃希菌、双歧杆菌数与自然恢复组相比有显著性差异。4种中药体外对大肠埃希菌、粪肠球菌均有较好的抑菌作用。结论:所选4种中药对肠道正常菌群均有扶植作用,可降低肠道的pH值,提高双歧杆菌的黏附性,其中尤以白术、三补的效果为佳。 展开更多

关键词 中药 小鼠 肠道正常菌群

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白假丝酵母菌临床菌株对氟康唑耐药性及其与CAP1基因相关性研究 被引量：10

2

作者 谈潘莉 汪浙炯 赵金方 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第4期325-329,共5页

目的了解白假丝酵母菌临床菌株对氟康唑的耐药率以及氟康唑耐药与白假丝酵母菌CAP1基因相关性。方法采用微量稀释法检测了245株白假丝酵母菌临床菌株对氟康唑的敏感性。采用实时荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）和流式细胞术分别检测白假丝酵... 目的了解白假丝酵母菌临床菌株对氟康唑的耐药率以及氟康唑耐药与白假丝酵母菌CAP1基因相关性。方法采用微量稀释法检测了245株白假丝酵母菌临床菌株对氟康唑的敏感性。采用实时荧光定量RT-PCR（qRT-PCR）和流式细胞术分别检测白假丝酵母菌CAP1基因mRNA（CAP1-mRNA）及其表达产物Cap1p。采用氟康唑浓度递增（4～64μg/mL）的YPD培养液连续培养法了解氟康唑诱导白假丝酵母菌耐药性的作用,qRT-PCR和流式细胞术确定CAP1基因与氟康唑耐药性形成的关系。结果 134株白假丝酵母菌对氟康唑敏感（MIC≤8μg/mL）、36株剂量依赖敏感（16～32μg/mL）、75株耐药（≥64μg/mL）,耐药率为30.6%（75/245）。氟康唑耐药白假丝酵母菌株CAP1-mRNA和Cap1p表达水平均明显高于氟康唑敏感菌株（P〈0.05）。氟康唑能诱导氟康唑敏感菌株产生耐药性（MIC≥64μg/mL）,其CAP1-mRNA和Cap1p表达水平也显著升高（P〈0.05）。结论白假丝酵母菌临床菌株对氟康唑有较高的耐药率。氟康唑能诱导氟康唑敏感白假丝酵母菌株产生耐药性。白假丝酵母菌对氟康唑耐药性与CAP1基因表达上调密切相关。 展开更多

关键词 白假丝酵母菌 氟康唑 耐药性 CAP1基因 表达

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细菌药物钝化酶基因分布及其表达诱导与抑制机制的研究 被引量：6

3

作者 吴亦斐 孙爱华 +2 位作者 赵金方 葛玉梅 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期131-140,共10页

目的:了解临床常见病原菌药物钝化酶基因及其优势基因携带模式,抗生素诱导药物钝化酶基因表达上调的作用及其与细菌组氨酸激酶的关系。方法:采用PCR和测序法,了解金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌... 目的:了解临床常见病原菌药物钝化酶基因及其优势基因携带模式,抗生素诱导药物钝化酶基因表达上调的作用及其与细菌组氨酸激酶的关系。方法:采用PCR和测序法,了解金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、阴沟肠杆菌临床菌株携带的β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类钝化酶基因。采用实时荧光定量RT-PCR,了解抗生素诱导及组氨酸激酶阻断剂氯氰碘柳胺抑制药物钝化酶基因表达的作用。结果:63株大肠埃希菌中检出4种β-内酰胺类、2种氨基糖苷类和1种大环内酯类钝化酶基因,优势基因携带模式为[TEM+CTX-M]+aac(3)-Ⅱ+mphA 16株(25.4%)和[TEM+CTX-M]+aac(6')-Ⅰb 13株(20.6%)。24株金黄色葡萄球菌中检出2种β-内酰胺类、3种氨基糖苷类钝化酶基因,优势基因携带模式为aph(3')(41.7%)或aac(6)-Ⅰe-aph(2)-Ⅰa(25.0%)。28株肺炎克雷伯菌中检出4种β-内酰胺酶、2种氨基糖苷类钝化酶基因,优势基因携带模式为[TEM+SHV]+[aac(6')-Ⅰb+aac(3)-Ⅱ](28.6%)和[TEM+SHV]+[aac(6')-Ⅰb+aac(3)-Ⅱ]+mphA(17.8%)。鲍曼不动杆菌和阴沟肠杆菌也以携带两类或三类药物钝化酶基因为优势模式。1/4 MIC青霉素、头胞噻肟和链霉素,能诱导3种β-内酰胺类和4种氨基糖苷类钝化酶基因表达显著上调(P<0.05),该诱导作用可被氯氰碘柳胺所抑制(P<0.05)。结论:上述临床常见病原菌多携带多类药物钝化酶基因并存在不同的优势基因携带模式。低浓度抗生素可能诱导药物钝化酶基因表达上调,但可被组氨酸激酶阻断剂所抑制。 展开更多

关键词 抗药性 细菌 遗传学 药物耐受性 基因型 基因表达 聚合酶链反应 细菌 耐药基因 检测 药物钝化酶 表达 调控机制

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丹皮酚对FSL-1与IL-4共刺激诱导树突状细胞成熟及细胞因子表达的影响 被引量：4

4

作者 胡玉平 周海云 +1 位作者 黄巧玲 姚轶敏 《中国临床药理学与治疗学》 CAS CSCD 2019年第1期14-19,共6页

目的:研究牡丹皮提取物丹皮酚对TLR2配体FSL-1刺激诱导慢性前炎因子释放的分子机制,为天然药物治疗慢性皮炎提供新的思路。方法:将小鼠髓源性树突状细胞(DCs)分成5组,对照组、FSL-1刺激组、丹皮酚低、中、高剂量干预组(25、50、100μg/m... 目的:研究牡丹皮提取物丹皮酚对TLR2配体FSL-1刺激诱导慢性前炎因子释放的分子机制,为天然药物治疗慢性皮炎提供新的思路。方法:将小鼠髓源性树突状细胞(DCs)分成5组,对照组、FSL-1刺激组、丹皮酚低、中、高剂量干预组(25、50、100μg/m L),所有组均给予10 ng/m L rm IL-4环境培养,ELISA法检测树突状细胞培养上清液中IL-10、IL-12的含量,流式细胞术检测树突状细胞表面MHC-II、CD40和CD86分子表达的水平。结果:各组树突状细胞表面分子表达水平:刺激组与对照组相比,树突状细胞表面MHCII、CD40和CD86表达量明显增加(P <0. 05)。丹皮酚干预组与刺激组相比,DCs表面MHC-II、CD40和CD86表达量均降低,且高、中剂量组具有统计学差异(P <0. 05)。细胞因子分泌水平:刺激组与对照组相比,抗炎性细胞因子IL-10的水平明显降低(P <0. 05),而前炎细胞因子IL-12的水平明显升高(P <0. 05);丹皮酚干预组与FSL-1刺激组相比,各个干预组的IL-10的分泌水平显著上升(P <0. 05),丹皮酚干预组中IL-12的分泌水平均有下降,但仅高、中剂量组具有统计学差异(P <0. 05)。结论:TLR2配体FSL-1可以和IL-4共刺激DCs,促进DCs活化并成熟,促进前炎性因子IL-12释放,抑制IL-10等抗炎细胞因子分泌,诱导CD4+T细胞向Th1分化,导致了Th1极化状态,诱导慢性皮肤炎症;而天然药物丹皮酚可抑制TLR2配体介导TLR2通路活化DCs这一过程,具有抑制皮肤慢性炎症的潜力。 展开更多

关键词 丹皮酚 慢性皮炎 树突状细胞 细胞因子 Th1/Th2

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肠道杆菌耐药性及其耐药相关Ⅰ类整合子可变区结构与进化 被引量：2

5

作者 王欢 包其郁 +3 位作者 孙爱华 赵金方 葛玉梅 严杰 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期149-155,共7页

目的:了解大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌临床菌株耐药性,及其Ⅰ类整合子分布、可变区耐药基因盒与分子进化关系。方法:采用K-B法检测大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌对12种药物的敏感性。采用PCR及其产物测序检测上述菌... 目的:了解大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌临床菌株耐药性,及其Ⅰ类整合子分布、可变区耐药基因盒与分子进化关系。方法:采用K-B法检测大肠埃希菌、阴沟肠杆菌和鲍曼不动杆菌对12种药物的敏感性。采用PCR及其产物测序检测上述菌株中Ⅰ类整合子携带率及可变区耐药基因盒。采用Clustal X和MEGA软件分析Ⅰ类整合子基因盒中耐药基因分子进化关系。结果:鲍曼不动杆菌对临床常用青霉素类和头孢菌素类抗生素耐药率为54.2%～100%,大肠埃希菌和阴沟肠杆菌对菌素类抗生素耐药率也高达41.6%～62.5%。62.5%(15/24)大肠埃希菌、67.9%(19/28)阴沟肠杆菌、83.3%(20/24)鲍曼不动杆菌检出Ⅰ类整合子,81.5%(44/54)Ⅰ类整合子呈现为4种单条带谱型,其余为3种双条带谱型。Ⅰ类整合子可变区耐药基因盒中存在aac(6')、sad(3″)、aad(2″)、cat(4')和dfr(7、A13和15)耐药基因,可分别介导细菌对氨基糖苷类、氯霉素和磺胺类抗生素耐药。根据二氢叶酸还原酶基因序列差异,上述菌株携带的Ⅰ类整合子可分成4个分子进化组。结论:上述肠道杆菌耐药情况严重并携带高含多种耐药基因盒的Ⅰ类整合子,Ⅰ类整合子有4条不同的进化途径。 展开更多

关键词 肠杆菌属 药物作用 鲍氏不动杆菌 药物作用 埃希氏菌属 药物作用 抗药性 细菌 肠道杆菌 耐药 整合子 耐药基因盒 进化

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两种抗生素对慢性阻塞性肺疾病急性加重并发呼吸衰竭机械通气患者的疗效比较 被引量：2

6

作者 马伟斌 江荣林 +3 位作者 雷澍 陈益民 肖嵬 黄立权 《医药导报》 CAS 2008年第2期181-184,共4页

目的比较复合抗生素哌拉西林钠三唑巴坦与头孢哌酮/舒巴坦钠在治疗慢性阻塞性肺病急性加重(AECOPD)并发呼吸衰竭机械通气患者中的疗效和安全性。方法采用随机、开放、对照研究,共入选113例患者,其中试验组58例,接受哌拉西林钠三唑巴坦治... 目的比较复合抗生素哌拉西林钠三唑巴坦与头孢哌酮/舒巴坦钠在治疗慢性阻塞性肺病急性加重(AECOPD)并发呼吸衰竭机械通气患者中的疗效和安全性。方法采用随机、开放、对照研究,共入选113例患者,其中试验组58例,接受哌拉西林钠三唑巴坦治疗,4.5 g,q8 h静脉注射;对照组55例,接受头孢哌酮+舒巴坦钠治疗,2.0 g,q8 h静脉注射。治疗5 d后评价临床和细菌学疗效。结果试验组总有效率81.0%,对照组总有效率78.2%;试验组细菌清除率80.4%,对照组79.6%,均差异无显著性(均P>0.05)。病原菌对哌拉西林钠三唑巴坦的敏感率为73.7%,耐药率为12.6%;对头孢哌酮+舒巴坦钠的敏感率为75.8%,耐药率为9.5%。患者对两组药物均有良好的耐受性。结论哌拉西林钠三唑巴坦和头孢哌酮+舒巴坦钠都可以作为AECOPD呼吸衰竭机械通气患者抗菌治疗的有效、安全的药物。 展开更多

关键词 哌拉西林钠三唑巴坦 头孢哌酮/舒巴坦钠 慢性阻塞性肺疾病急性加重 细菌感染 随机对照试验

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fliY基因在空肠弯曲菌致病性相关趋化和定植中的作用 被引量：1

7

作者 楼宏强 葛玉梅 +2 位作者 张金良 严杰 赵金方 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期141-148,共8页

目的:构建空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)鞭毛马达开关蛋白FliY编码基因(fliY)敲除突变株,了解FliY蛋白控制细菌鞭毛运动的作用及其与细菌趋化和定植的关系。方法:采用pBluescript-Ⅱ-SK质粒构建用于敲除空肠弯曲菌NCTC11168株fliY... 目的:构建空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni)鞭毛马达开关蛋白FliY编码基因(fliY)敲除突变株,了解FliY蛋白控制细菌鞭毛运动的作用及其与细菌趋化和定植的关系。方法:采用pBluescript-Ⅱ-SK质粒构建用于敲除空肠弯曲菌NCTC11168株fliY基因的自杀质粒。根据同源交换原理,利用自杀质粒构建空肠弯曲菌fliY基因敲除突变株(fliY-)。采用PCR、PCR产物测序与Western Blot,对fliY-突变株进行鉴定。采用体外菌落迁徙试验、细菌趋化试验以及小鼠空肠定植试验,检测fliY-突变株趋化和定植能力。结果:fliY-突变株生长曲线与野生株相似,但PCR与测序及Western Blot结果显示,fliY-突变株中fliY基因已被敲除。与野生株比较,fliY-突变株半固体平板上菌落明显较小(P<0.05),对脱氧胆酸钠和牛胆汁趋化能力显著下降(P<0.05),在感染小鼠空肠组织标本中的细菌数(CFU)也明显减少(P<0.05)。结论:空肠弯曲菌fliY基因功能与调控鞭毛运动作用有关,从而对细菌趋化和定植过程产生重大影响。 展开更多

关键词 弯曲杆菌 空肠 致病力 小鼠 基因敲除 鞭毛 聚合酶链反应 印迹法 蛋白质 鞭毛马达开关蛋白 运动力 趋化 定植

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HRM技术在瘦素基因启动子多态性与肝硬化发生相互关系研究中的应用 被引量：1

8

作者 李善高 曹海军 +5 位作者 刘军 徐国萍 孙明洪 朱孝鸿 吕宾 孟立娜 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1308-1313,共6页

目的:探讨PCR-高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术筛选和分析肝硬化患者瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变的可能性,同时研究突变基因型与肝硬化患者生理生化指标之间的关系。方法:采用PCR-HRM新型技术,同时对比传统方法 PCR-限制性片段... 目的:探讨PCR-高分辨率熔解曲线分析(HRM)技术筛选和分析肝硬化患者瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变的可能性,同时研究突变基因型与肝硬化患者生理生化指标之间的关系。方法:采用PCR-HRM新型技术,同时对比传统方法 PCR-限制性片段长度多态性分析(RFLP),对对照组(n=100)和肝硬化组(n=100)瘦素基因启动子C2549和G2548位点突变进行分析,同时检测生理生化指标。结果:(1)PCR-HRMA技术能够有效、高通量、准确地实现对瘦素基因启动子多态性的检测;(2)肝硬化患者瘦素基因启动子主要突变位点在C2549,而G2548位点没有发现突变;(3)肝硬化组中瘦素、游离瘦素指数(FLI)、空腹胰岛素(FINS)和胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)高于对照组,胰岛素敏感指数(ISI)及可溶性瘦素受体(sOB-R)低于对照组,除瘦素外,均有显著差异(P<0.05);FLI与FINS和HOMA-IR呈正相关(r=0.45、r=0.53,均P<0.05),与ISI呈负相关(r=-0.34,P<0.05);(4)肝硬化患者C2549杂合型占优势,肝硬化纯合型和杂合型突变个体中HOMI-IR、瘦素、sOB-R及FLI均高于野生型,除瘦素及sOB-R外均有显著差异(P<0.05)。结论:PCR-HRM能准确及高通量地实现对瘦素基因启动子多态性进行分析,并验证了A位点基因频率的增高可能和肝硬化发生有关;肝硬化患者存在高胰岛素血症及胰岛素抵抗,瘦素可能与肝硬化患者胰岛素抵抗发生有关。 展开更多

关键词 高分辨率熔解曲线分析 瘦素 基因启动子 基因多态性 肝硬化

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姜黄素对内毒素血症小鼠作用的实验研究及对细胞因子表达的影响 被引量：1

9

作者 杨雪静 侯佳惠 +1 位作者 彭来君 曹俊敏 《中华中医药学刊》 CAS 北大核心 2015年第5期1178-1180,I0012,I0013,共5页

目的:研究姜黄素在小鼠内毒素血症发病中起的作用及意义。方法:选用50只清洁级ICR小鼠随机均分为5组,每组10只。5组分别为:预防剂量组、治疗剂量组、药物对照组、空白对照组。于攻毒前和攻毒后6、12、18和24 h检测各组小鼠的直肠温度,给... 目的:研究姜黄素在小鼠内毒素血症发病中起的作用及意义。方法:选用50只清洁级ICR小鼠随机均分为5组,每组10只。5组分别为:预防剂量组、治疗剂量组、药物对照组、空白对照组。于攻毒前和攻毒后6、12、18和24 h检测各组小鼠的直肠温度,给药5天后分别观察小鼠的死亡率、病理解剖观察心、肝、肾和肠病变,眼球取血进行白细胞、红细胞、血小板、血红蛋白测定,分离血清,用固相夹心法酶联免疫吸附法测定血清TNF-α、IL-1、IL-6水平。结果:预防剂量组、治疗剂量组小鼠较LPS对照组小鼠死亡率下降,在6 h和12 h时,治疗剂量组和预防剂量组均显著或极显著高于LPS对照组(P<0.05或P<0.01),治疗组和预防组的白细胞、血小板数明显升高,差异显著(P<0.05)。治疗组、预防组与LPS组相比,差异显著(P<0.01)。治疗组、预防组的TNF-α、IL-1、IL-6水平较LPS组低,前者与正常组有显著性差异(P<0.05),后者与正常组没有显著性差异(P>0.05)。结论:姜黄素对内毒素血症小鼠有保护作用,预防、治疗均有效果,预防效应强于治疗。 展开更多

关键词 内毒素血症 姜黄素 小鼠

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问号钩端螺旋体colA基因产物胶原酶活性及其致病机制研究

10

作者 赵金方 谈潘莉 +3 位作者 汪浙炯 胡玮琳 严杰 Kokouvi Kassegne 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期7-12,共6页

目的了解不同问号钩端螺旋体(简称钩体)血清群colA基因分布和序列保守性、表达产物胶原酶活性以及感染细胞时colA基因表达水平变化和产物分泌情况。方法采用PCR及其产物测序法检测我国主要流行的7个问号钩体血清群代表株中colA基因并了... 目的了解不同问号钩端螺旋体(简称钩体)血清群colA基因分布和序列保守性、表达产物胶原酶活性以及感染细胞时colA基因表达水平变化和产物分泌情况。方法采用PCR及其产物测序法检测我国主要流行的7个问号钩体血清群代表株中colA基因并了解其序列保守性。构建问号钩体黄疸出血群赖型赖株colA基因原核表达系统,Ni-NTA亲和层析法提取表达的目的重组蛋白rColA。采用分光光度法检测rColA水解I^IV型天然胶原蛋白及Azocoll和Pz-肽合成底物能力并测定其Km和Kcat值。采用实时荧光定量RT-PCR和Western Blot分别检测问号钩体赖株感染HUVEC、BEAS-2B、L-02、HEK293细胞时colA-mRNA水平变化及ColA分泌情况。结果不同血清群问号钩体均能扩增出全长colA基因片段,其核苷酸和氨基酸序列相似性高达99.4%~100%。所构建的colA基因表达系统能有效表达rColA。rColA能不同程度地水解上述6种底物,但水解III型胶原蛋白能力最强(P<0.05),其Km和Kcat值分别为2.16mg/mL和35.6h-1。问号钩体赖株感染各靶细胞时colA-mRNA水平显著升高(P<0.01),问号钩体-细胞共培养物上清中可检出ColA。结论问号钩体colA基因为序列保守、分布广泛的胶原酶编码基因,感染细胞时该基因产物表达上调并外分泌,从而在问号钩体感染宿主过程中发挥实际作用。 展开更多

关键词 问号钩端螺旋体 colA基因 胶原酶 表达 分泌

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继发性磺脲类药物失效患者IA-2抗体与胰岛β细胞功能关系分析

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作者 俞颖 朱锋 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第4期662-664,共3页

目的:探讨IA-2抗体对继发性磺脲类药物失效的患者早期诊断和干预的作用。方法:测定173例继发性磺脲类药物失效的2型糖尿病患者的酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2抗体),测定空腹及餐后胰岛素和C肽水平,评估胰岛β细胞功能。结果:体质指数、谷氨酸... 目的:探讨IA-2抗体对继发性磺脲类药物失效的患者早期诊断和干预的作用。方法:测定173例继发性磺脲类药物失效的2型糖尿病患者的酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2抗体),测定空腹及餐后胰岛素和C肽水平,评估胰岛β细胞功能。结果:体质指数、谷氨酸脱羧酶抗体(GAD抗体)浓度,胰岛素抵抗指数及糖负荷后30min胰岛素曲线下面积等指标在IA-2抗体阳性组与阴性组之间差异有统计学意义。结论:在糖尿病患者中早期测定IA-2、GAD等相关抗体对诊断分型,早期采用保护残存胰岛β细胞功能的治疗方法和对其预后的判定有重要意义。 展开更多

关键词 糖尿病 继发性磺脲类药物失效 IA-2抗体

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