目的：应用大鼠血清建立大鼠体外软骨细胞退变模型。方法：取出生24 h SD大鼠关节处软骨，Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞，取原代细胞进行实验。软骨细胞分别用含10％胎牛血清的DMEM （对照组）、含50 ng／mL 白细胞介素（ IL ...目的：应用大鼠血清建立大鼠体外软骨细胞退变模型。方法：取出生24 h SD大鼠关节处软骨，Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞，取原代细胞进行实验。软骨细胞分别用含10％胎牛血清的DMEM （对照组）、含50 ng／mL 白细胞介素（ IL ）－1β＋10％胎牛血清的 DMEM （ IL－1β组）、含2．5％大鼠血清的DMEM（2．5％血清组）及含5．0％大鼠血清的DMEM（5．0％血清组）中培养。培养24 h后，观察细胞形态变化，MTT法检测各组细胞的增殖情况，蛋白质印迹法检测增殖细胞核抗原的表达和Ⅱ型胶原及MMP－13的表达，实时定量PCR检测退变相关基因ADAMTS5、MMP－9、Aggrecan和SOX－9的表达。结果：两血清组和IL－1β组的软骨形态均由原来的多角形变成长梭形，且两血清组和IL－1β组均促进软骨细胞的增殖，下调转录因子SOX－9和上调基质降解酶MMP－13、MMP－9、ADAMTS5的表达。结论：大鼠血清具有促进软骨退变的作用，可用于建立体外软骨退变模型。展开更多
目的在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。方法取出生24 h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。扩增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上,转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b...目的在真核细胞中表达人Wnt7b基因并且观察对大鼠原代软骨细胞的退变作用。方法取出生24 h SD大鼠关节处软骨,Ⅱ型胶原酶多次消化后获得原代软骨细胞,取P1代细胞进行实验。扩增人Wnt7b基因及克隆至PCDH-GFP上,转染PCDH-GFP和PCDH-Wnt7b至293ft细胞中,48 h后收集细胞上清及转染细胞,Western blot鉴定Wnt7b在293ft细胞中的表达。收集的上清分别稀释10倍和50倍培养大鼠软骨细胞,24 h后观察细胞形态并收集细胞蛋白和抽提RNA,Western blot和定量PCR检测软骨退变指标MMP13、MMP3、Ⅱ型胶原、A-can、ADAMTS5、ColⅩ和SOX9的表达。结果成功克隆人Wnt7b基因至PCDH-GFP载体上且在293ft细胞中得到有效表达。含Wnt7b培养基干预软骨细胞24 h后,软骨细胞形态由原来的多角形变成长梭形,Wnt7b处理组软骨细胞MMP13和MMP3表达显著上调,Ⅱ型胶原的表达下调。PCR结果表明A-can和Sox9表达下降,ColⅩ和ADAMTS5表达增强。结论有效在真核细胞中表达Wnt7b基因并且促进大鼠软骨细胞退变,建立软骨细胞退变的体外模型。展开更多
目的：制定止咳片的质量标准。方法对止咳片中苦杏仁进行薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法同时测定白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量。色谱柱为 C18柱（4.6 mmx250 mm,5μm）；以甲醇-水（75：25）系统为流动相；检测波长为321 nm,流...目的：制定止咳片的质量标准。方法对止咳片中苦杏仁进行薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法同时测定白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量。色谱柱为 C18柱（4.6 mmx250 mm,5μm）；以甲醇-水（75：25）系统为流动相；检测波长为321 nm,流速1 mL·min-1。结果薄层色谱鉴别中,供试品在与对照品色谱相应的位置上,显示相同颜色的斑点,斑点清晰,分离度好,阴性未见干扰。白花前胡甲素在61.98-619.84 ng 范围内线性关系良好,线性方程 Y =1.1565X＋13.4527,r=0.9998；白花前胡乙素在32.11-321.13 ng 范围内线性关系良好,线性方程 Y =1.4386X-0.3054,r=0.9998。白花前胡甲素低、中、高加样回收率分别为96.19%,98.87%,97.60%,RSD 分别为2.13%,1.52%,0.73%（n=3）；白花前胡乙素低、中、高加样回收率分别为96.97%,99.60%,96.74%,RSD 分别为1.55%,2.28%,0.47%（n=3）。结论该方法结果准确、专属性强,重复性好,能有效控制止咳片的质量。展开更多
文摘目的：制定止咳片的质量标准。方法对止咳片中苦杏仁进行薄层色谱鉴别；采用高效液相色谱法同时测定白花前胡甲素和白花前胡乙素的含量。色谱柱为 C18柱（4.6 mmx250 mm,5μm）；以甲醇-水（75：25）系统为流动相；检测波长为321 nm,流速1 mL·min-1。结果薄层色谱鉴别中,供试品在与对照品色谱相应的位置上,显示相同颜色的斑点,斑点清晰,分离度好,阴性未见干扰。白花前胡甲素在61.98-619.84 ng 范围内线性关系良好,线性方程 Y =1.1565X＋13.4527,r=0.9998；白花前胡乙素在32.11-321.13 ng 范围内线性关系良好,线性方程 Y =1.4386X-0.3054,r=0.9998。白花前胡甲素低、中、高加样回收率分别为96.19%,98.87%,97.60%,RSD 分别为2.13%,1.52%,0.73%（n=3）；白花前胡乙素低、中、高加样回收率分别为96.97%,99.60%,96.74%,RSD 分别为1.55%,2.28%,0.47%（n=3）。结论该方法结果准确、专属性强,重复性好,能有效控制止咳片的质量。
