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海洋细菌Alteromonas sp.A1-6中褐藻胶裂解酶Alg1264的酶学性质研究
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作者 肖长生 梁潼 +6 位作者 李静 董明俐 单凤娟 晁红军 李鑫 陈静 闫达中 《食品与发酵工业》 北大核心 2025年第21期95-104,共10页
以Alteromonas sp.A1-6的基因组为模板,PCR扩增目的基因alg1264,成功构建重组表达载体pET28a-alg 1264,实现了alg 1264的克隆表达,并对其编码的褐藻胶裂解酶Alg1264的酶学性质和水解产物开展了系统研究。Alg1264的最适pH值为7.0,在pH 5.... 以Alteromonas sp.A1-6的基因组为模板,PCR扩增目的基因alg1264,成功构建重组表达载体pET28a-alg 1264,实现了alg 1264的克隆表达,并对其编码的褐藻胶裂解酶Alg1264的酶学性质和水解产物开展了系统研究。Alg1264的最适pH值为7.0,在pH 5.0~11.0条件下保温1 h后相对酶活力仍能保持在77%以上;最适温度为35℃,在5~35℃保温30 min后相对酶活力仍能保持在86%以上;Mg^(2+)、Ni^(2+)对Alg1264的影响比较小,在5 mmol/L的浓度影响下,其活力维持在85%以上,Cu^(2+)对Alg1264活力基本没影响。Alg1264对有机试剂有良好的耐受性,在5 mmol/Lβ-巯基乙醇或者体积分数20%的二甲基亚砜的处理下,Alg1264的相对酶活力可以维持在80%以上;在5 mmol/L盐酸胍、TritonX-100或者体积分数20%的甲醇、乙醇以及异丙醇存在下,Alg1264的相对酶活力也能维持在60%以上。Alg1264对底物褐藻胶的最大反应速率V max为0.130μmol/min,米氏常数K m为4.034 mg/mL,k cat为52.653 s^(-1),k cat/K m为13.052 mL/(mg·s)。Alg1264对聚β-D-古罗糖醛酸(polyG)具有底物偏好性;液质分析结果显示该酶降解褐藻胶,聚甘露糖醛酸(polyM),polyG生成的终产物主要为单糖、二糖、三糖和少量其他寡糖,故Alg1264是一种同时具有内切和外切酶活力的聚古罗糖醛酸裂解酶。Alg1264具有较好的有机溶剂耐受性、pH稳定性,同时具有明显的聚古罗糖醛酸偏好性,该酶具备的独特性质可能使其在褐藻寡糖制备方面具有巨大的应用潜力。 展开更多
关键词 褐藻胶裂解酶 异源表达 酶学性质 聚古罗糖醛酸偏好性 耐有机试剂
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基于UPLC-MS/MS技术对蓝莓中花青苷类物质的定性定量分析 被引量:2
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作者 魏海蓉 易锡斌 +6 位作者 谭钺 徐丽 宗晓娟 朱东姿 刘庆忠 王甲威 张力思 《山东农业科学》 北大核心 2021年第3期122-126,共5页
采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS)技术在电喷雾离子源(ESI)、正离子多反应监测(MRM)模式下建立蓝莓果实中花青苷类物质的定性和定量检测方法。结果表明,11种花青苷类物质的定量限为0.26~1.50μg/kg,在0~100μg/L范围... 采用超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS)技术在电喷雾离子源(ESI)、正离子多反应监测(MRM)模式下建立蓝莓果实中花青苷类物质的定性和定量检测方法。结果表明,11种花青苷类物质的定量限为0.26~1.50μg/kg,在0~100μg/L范围内呈现很好的线性关系,相关系数(r)为0.9950~0.9996,方法检测性良好。采用本方法对3个蓝莓栽培品种的成熟果实进行测定,分别从‘喜来’和‘蓝冠’中鉴定出11种花青苷,从‘蓝丰’中鉴定出10种花青苷,各种花青苷物质含量在3个蓝莓品种中存在明显差异,‘蓝冠’的总花青苷类物质含量明显高于‘蓝丰’和‘喜来’,‘喜来’中最低。本研究结果可为蓝莓优异种质挖掘和蓝莓花青苷产品开发奠定理论基础。 展开更多
关键词 蓝莓 花青苷 超高效液相色谱-三重四级杆串联质谱(UPLC-MS/MS) 定性定量分析
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胚胎营养环境对动物出生后营养代谢的调控研究 被引量:7
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作者 吕佳琪 华雯妤 王恬 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期335-344,共10页
动物胚胎营养环境受母体营养供应与胎盘营养转运2个方面的影响。充足、合理的母体营养供应是胚胎健康发育的保障。胎盘负责转运来自母体的营养,转运的效率决定了胚胎的营养供给。胚胎的发育与所处的营养环境密不可分,不利的胚胎营养环... 动物胚胎营养环境受母体营养供应与胎盘营养转运2个方面的影响。充足、合理的母体营养供应是胚胎健康发育的保障。胎盘负责转运来自母体的营养,转运的效率决定了胚胎的营养供给。胚胎的发育与所处的营养环境密不可分,不利的胚胎营养环境可以程序化胚胎发育,并持续影响代谢,导致动物成年发生慢性疾病。因此,深入研究母体营养供应对后代代谢的长期影响,有助于后代的健康生长,还可有效降低动物出生后代谢疾病的发生率。本文梳理了母体营养供应不足对动物出生后营养代谢的影响,初步综述了营养程序化的发生机制。 展开更多
关键词 母体营养 胚胎发育 代谢程序化 营养代谢
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一种分离人表皮角质形成细胞的新方法 被引量:2
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作者 邹德波 潘婧 +1 位作者 张平 吴训伟 《临床皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期424-429,共6页
目的:探索一种简单快速无需分开表皮和真皮即可分离得到人表皮角质形成细胞(KC)并进行体外培养的方法。方法:取皮肤组织切碎后,先用含分散酶和Ⅰ型胶原酶的消化液37℃浸泡60 min,然后加入胰酶消化30 min,再加入DNA酶继续消化5 min以获... 目的:探索一种简单快速无需分开表皮和真皮即可分离得到人表皮角质形成细胞(KC)并进行体外培养的方法。方法:取皮肤组织切碎后,先用含分散酶和Ⅰ型胶原酶的消化液37℃浸泡60 min,然后加入胰酶消化30 min,再加入DNA酶继续消化5 min以获得单个细胞;加入含10%胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中和消化,用100μm细胞过滤器过滤,离心后,用含10 mmol/L Rock蛋白激酶抑制剂的DMEM培养基(含10%FBS)培养,3 d后换成Cn T07培养基。每2 d换液1次,培养过程中,观察细胞生长状态。结果:与传统分散酶分离表皮KC方法相比,用该方法分离得到的表皮KC数量较多,第1代以克隆形式生长并且生长较快;传代后细胞呈角质细胞形态,主要表达未分化的角质蛋白K5,生长曲线和形成单细胞克隆能力和传统分离的表皮KC相近,并稍优于传统方法。采用新方法成功地从带毛发的头皮组织分离出大量的表皮KC并表达正常的角质蛋白。结论:该法得到的表皮KC形态、生长状态及形成单克隆的能力都接近或优于传统方法。该方法简单高效,具有较高的实用价值,尤其为以后临床上大量分离患者的表皮KC用于细胞治疗奠定基础。 展开更多
关键词 皮肤 角蛋白细胞 细胞分离 平板形成克隆实验
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成年代谢病的先天因素
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作者 吕佳琪 华雯妤 王恬 《动物医学进展》 北大核心 2016年第3期113-119,共7页
动物胚胎营养环境受母体营养供应与胎盘营养转运两方面影响。充足、合理的母体营养供应是胚胎健康发育的保障。不利的胚胎环境可以程序化胚胎发育,并持续影响代谢,导致成年后发生慢性疾病。论文探讨了胚胎期能量、蛋白质、微量元素、维... 动物胚胎营养环境受母体营养供应与胎盘营养转运两方面影响。充足、合理的母体营养供应是胚胎健康发育的保障。不利的胚胎环境可以程序化胚胎发育,并持续影响代谢,导致成年后发生慢性疾病。论文探讨了胚胎期能量、蛋白质、微量元素、维生素和常量元素营养异常对胚胎发育和出生后代谢的影响;结合胎盘的结构,介绍了转运蛋白表达对胚胎葡萄糖、脂肪酸、氨基酸、胆固醇供应的影响;总结了胚胎发育程序化的形成机制。深入研究母体营养对后代代谢的长期影响,可以有效降低动物出生后代谢疾病的发生几率,有助于后代的健康生长,也为人类医学研究提供宝贵的借鉴和启发。 展开更多
关键词 母体营养 胚胎发育 代谢程序化 慢性代谢病
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