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牛溶血性曼氏杆菌和多杀性巴氏杆菌的PCR检测及分离鉴定
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作者 耿玉静 龚玲朵 +5 位作者 李玉婉 张斐洋 王留幸 韩妙层 郎洪武 汤承 《现代畜牧兽医》 2025年第2期31-35,共5页
为了解溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在我国牛群中的流行情况,研究对来自四川、宁夏和内蒙古等7个省(自治区)21个牛呼吸道疾病综合征(BRDC)发病牛场的344份鼻腔棉拭子进行分型... 为了解溶血性曼氏杆菌(Mannheimia haemolytica,Mh)和多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)在我国牛群中的流行情况,研究对来自四川、宁夏和内蒙古等7个省(自治区)21个牛呼吸道疾病综合征(BRDC)发病牛场的344份鼻腔棉拭子进行分型检测、细菌分离鉴定及毒力测定。结果显示,344份被检样本Mh和Pm的检出率分别为27.3%和14.8%,混合感染率为28.6%;Mh A1型和Mh A6型占比分别为55.9%(38/68)和44.1%(30/68),Pm荚膜A型和荚膜B型占比分别为66.7%(23/34)和33.3%(11/34);分离获得Mh A1型6株和Mh A6型4株,Pm荚膜A型11株和荚膜B型6株。毒力测定结果显示,4株Mh A6型和1株Mh A1型可部分致死小鼠,最高和最低致死剂量分别为10^(10)、10^(5) CFU/mL;17株Pm分离株均能够100%致死小鼠,最高和最低致死剂量分别为10^(6)、10 CFU/mL。研究表明,Mh和Pm是引起当地牛BRDC的重要病原菌,混合感染较为普遍,Mh A1型的流行率高于Mh A6型,但Mh A6型的毒力高于Mh A1型。Pm荚膜A型的检出率高于Pm荚膜B型。 展开更多
关键词 多杀性巴氏杆菌 溶血性曼氏杆菌 细菌分离鉴定 血清型 致病性
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O型口蹄疫病毒磁微粒化学发光抗体检测方法的建立
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作者 耿玉静 白晶晶 +5 位作者 刘慧芳 李长印 张鹏翼 原小燕 吴彬 李玉婉 《中国动物检疫》 2025年第6期87-91,共5页
为建立一种高通量全自动磁微粒化学发光O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)免疫抗体检测方法,利用O型FMDV-VP1结构蛋白和酶标单抗,通过各反应条件优化,建立O型FMDV免疫抗体磁微粒化学发光检测方法。结果显示:当所建方法... 为建立一种高通量全自动磁微粒化学发光O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)免疫抗体检测方法,利用O型FMDV-VP1结构蛋白和酶标单抗,通过各反应条件优化,建立O型FMDV免疫抗体磁微粒化学发光检测方法。结果显示:当所建方法检测临界值(S/N)≤0.8时,O型FMDV抗体阳性;当S/N>0.8时,O型FMDV抗体阴性。与5种常见病原的免疫血清不存在交叉反应,特异性良好;对敏感性质控血清的最低检出量为1:1 024,批间批内变异系数均在10%以内,与标准方法的符合率达到95.9%。结果表明该方法具有较高的敏感性和特异性、重复性。本研究为O型FMDV免疫抗体检测提供一种高效的检测方法。 展开更多
关键词 O型FMDV 磁微粒化学发光 酶标抗体 敏感性 特异性
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猪繁殖与呼吸综合征病毒荧光层析抗体检测方法的建立 被引量:1
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作者 张皓淳 赵刚 +6 位作者 白雪 杨作丰 张小辉 原小燕 元娜 姜斌 李松励 《养猪》 2024年第5期68-73,共6页
为了给临床诊断提供准确便捷的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测方法,本试验以镧系快速高敏荧光定量检测系统为基础,通过研制PRRSV(美洲型)抗体荧光微球检测卡,建立具备简便、快速、定量等优势的荧光层析抗体检测方法。试验结果:特异... 为了给临床诊断提供准确便捷的猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)检测方法,本试验以镧系快速高敏荧光定量检测系统为基础,通过研制PRRSV(美洲型)抗体荧光微球检测卡,建立具备简便、快速、定量等优势的荧光层析抗体检测方法。试验结果:特异性试验中5份特异性质控血清的检测结果均为阴性;敏感性试验中同一批次试纸的阳性检出率均为100%(20/20),阴性检出率均为100%(20/20);临床试验中共检测482份血清,与市售试剂盒的阴性符合率为84.7%,阳性符合率为91.3%,符合率为91.07%。结论:本试验建立的荧光层析抗体检测方法在PRRSV(美洲型)的检测中表现出较好的特异性和敏感性,对PRRSV(美洲型)的快速诊断和检测具有重要临床意义。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS) 荧光定量检测 荧光层析抗体检测
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猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测试剂盒的应用研究 被引量:6
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作者 徐璐 张乾义 +7 位作者 夏应菊 任雪健 李翠 邹兴启 徐嫄 王兆 赵启祖 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第11期31-33,I0006,共4页
为了验证猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测试剂盒的临床应用效果,对6个地区的2200份血清样本进行检测,并采用进口试剂同步检测,比较2种试剂盒的一致性;田间筛选了391份猪瘟抗体阴性和阳性血清,采用该试剂盒与荧光抗体病毒中和试验同... 为了验证猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测试剂盒的临床应用效果,对6个地区的2200份血清样本进行检测,并采用进口试剂同步检测,比较2种试剂盒的一致性;田间筛选了391份猪瘟抗体阴性和阳性血清,采用该试剂盒与荧光抗体病毒中和试验同时进行检测,比较试剂盒的一致性;为了进一步验证对免疫抗体的检出情况,采用本试剂盒定期对猪瘟疫苗免疫后抗体消长情况进行检测。结果显示:本试剂盒与进口试剂盒具有高度的一致性(Kappa值为0.78);与荧光抗体病毒中和试验的结果几乎完全一致(Kappa值为0.908);免疫后18 d,所有免疫猪的抗体全部转阳。 展开更多
关键词 猪瘟 化学发光免疫分析 抗体
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猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测方法的建立 被引量:2
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作者 徐璐 张乾义 +7 位作者 夏应菊 任雪健 李翠 邹兴启 徐嫄 王兆 赵启祖 王琴 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2020年第10期25-30,37,共7页
为开发一种操作简便、省时省力、特异性强、敏感度高的猪瘟抗体检测方法,使其更适合于我国猪瘟防控需要,本研究采用真核系统表达纯化的猪瘟病毒E2蛋白作为包被物,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白单克隆抗体作为竞争抗体,化学发光底物作为显... 为开发一种操作简便、省时省力、特异性强、敏感度高的猪瘟抗体检测方法,使其更适合于我国猪瘟防控需要,本研究采用真核系统表达纯化的猪瘟病毒E2蛋白作为包被物,辣根过氧化物酶标记的E2蛋白单克隆抗体作为竞争抗体,化学发光底物作为显色体系,同时将猪瘟血清国家参考品作为溯源血清,绘制标准曲线,建立了猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测方法。结果表明,该方法的敏感性为96.67%,特异性为96.68%;通过标准曲线的绘制,能够实现检测结果的相对定量;简化了操作步骤,检测时间大大缩短(<1 h/96样本)。猪瘟病毒化学发光竞争ELISA抗体检测方法适合于猪瘟的田间大规模普查,能够提供更高的准确度,缩短检测时间,降低工作强度,减少人工成本,具有较好的应用前景。 展开更多
关键词 猪瘟 抗体 化学发光免疫分析
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重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白对新城疫(LaSota株)活疫苗免疫增强作用研究 被引量:5
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作者 刘梅芬 李勤楠 +4 位作者 马震原 吴志明 班付国 闫若潜 王华俊 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期590-599,共10页
为探究重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对新城疫病毒(NDV)活疫苗(LaSota株)的免疫增强作用,本研究将90只SPF鸡随机分为6组,分别为PBS对照组、NDV弱毒苗对照组、rChIL-6-Linker-ChIL-2免疫增强组、rCh... 为探究重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对新城疫病毒(NDV)活疫苗(LaSota株)的免疫增强作用,本研究将90只SPF鸡随机分为6组,分别为PBS对照组、NDV弱毒苗对照组、rChIL-6-Linker-ChIL-2免疫增强组、rChIL-6蛋白免疫增强组、rChIL-2蛋白免疫增强组及rChIL-6+rChIL-2混合蛋白免疫增强组,将鸡白细胞介素重组融合蛋白水剂与LaSota株联合接种于SPF鸡,分别采用MTS法、流式细胞术、ELISA和HA/HI法检测接种前后不同时间各组鸡外周血及脾淋巴细胞增殖活性、鸡外周血中CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量、血清中Th1/Th2型细胞因子表达水平及免疫抗体水平等指标。结果显示,接种后7~21d时,与NDV弱毒苗对照组相比,同时接种重组融合蛋白组鸡淋巴细胞增殖活性、外周血CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量比值及血清中重组鸡IL-4蛋白(rChIL-4)、ChIL-6、ChIL-2、重组鸡IFN-α蛋白(ChIFN-α)、ChIFN-γTh1/Th2型细胞因子表达水平明显提升;HI免疫抗体较NDV弱毒苗对照组提高了1.0~1.9个滴度,较单一rChIL-6、rChIL-2对照组分别提高了0.2~0.7、0.2~1.1个抗体滴度。综上所述,rChIL-6-Lin-ker-ChIL-2融合蛋白对NDV(LaSota株)活疫苗在鸡体内具有明显的免疫增强效果。 展开更多
关键词 rChIL-6-Linker-ChIL-2 免疫增强作用 淋巴细胞增殖活性 TH1/TH2型细胞因子 抗体滴度
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牛奶中AFM_1人工抗原的合成及多克隆抗体血清的制备
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作者 李秀梅 蔡齐超 +1 位作者 刘玉宝 谢彩华 《中国奶牛》 2015年第3期1-5,共5页
本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联... 本研究合成并鉴定了黄曲霉毒素M1人工抗原,通过动物免疫制备出敏感性高、特异性好的鼠源黄曲霉毒素M1多克隆抗血清。采用琥珀酸酐改造黄曲霉毒素M1,并将其改造物按两种方法(DCC和EDC)分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)进行偶联,合成免疫抗原AFM1-BSA和检测抗原AFM1-OVA,经过薄层色谱、紫外扫描和凝胶电泳鉴定后,免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。经过测定,免疫的3只小鼠效价均达到了1:104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度IC50(50%inhibitive concentration,IC50)为37.61ng/m L,且具有良好的特异性。本研究成功合成了黄曲霉毒素M1人工抗原和多克隆抗体血清,为黄曲霉毒素M1单克隆抗体制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 AFM1 人工抗原 鉴定 多抗血清
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口蹄疫O型病毒AnSA多肽单克隆抗体的制备及竞争ELISA抗体检测方法的建立
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作者 李秀梅 王庆云 杨志 《中国奶牛》 2016年第9期32-35,共4页
本研究用已知纯化的An SA合成多肽偶联物免疫Balb/c小鼠,再将免疫小鼠的脾细胞和生长对数期的SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用i ELISA方法和有限稀释法筛选纯化阳性杂交瘤细胞,最后采用ELISA方法评价免疫小鼠腹水的效价,筛得4株杂交瘤细... 本研究用已知纯化的An SA合成多肽偶联物免疫Balb/c小鼠,再将免疫小鼠的脾细胞和生长对数期的SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,采用i ELISA方法和有限稀释法筛选纯化阳性杂交瘤细胞,最后采用ELISA方法评价免疫小鼠腹水的效价,筛得4株杂交瘤细胞腹水效价在1:51200以上;采用改良的过碘酸钠法制备酶标单抗。用已知纯化的口蹄疫O型病毒An SA合成多肽偶联物作为抗原和其对应的酶标单抗建立竞争ELISA方法来检测口蹄疫O型病毒抗体,并对其特异性、敏感性和重复性进行验证。试验数据显示,该方法特异性为100%,敏感性为95%,批间变异系数<10%,具有应用前景。通过大量样本进行临床测试,得出该方法检测样本阳性符合率达到87.65%,可用于评价疫苗免疫后整个动物群中保护性抗体的水平。 展开更多
关键词 口蹄疫O型病毒 AnSA多肽 竞争ELISA 单克隆抗体
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