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猪链球菌rpoE基因克隆及生物信息学分析
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作者 杜炎斌 张港琛 +4 位作者 王瑜欣 刘宝宝 宫胜龙 东笑 汪洋 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第7期1149-1154,共6页
本研究旨在克隆猪链球菌rpoE基因,并通过生物信息学软件预测分析猪链球菌rpoE基因编码蛋白功能及其调节机制。以猪链球菌基因组为模板扩增rpoE基因,成功测序后通过生物信息学软件预测该基因编码蛋白的理化性质、抗原表位等。结果表明,... 本研究旨在克隆猪链球菌rpoE基因,并通过生物信息学软件预测分析猪链球菌rpoE基因编码蛋白功能及其调节机制。以猪链球菌基因组为模板扩增rpoE基因,成功测序后通过生物信息学软件预测该基因编码蛋白的理化性质、抗原表位等。结果表明,成功克隆的猪链球菌rpoE基因全长582 bp,编码一种富含谷氨酸、天冬氨酸及丝氨酸的亲水性胞质蛋白;二级结构分析显示,RpoE蛋白主要结构元件为α-螺旋和无规则卷曲,分别占52.3%和36.3%。综合分析认为,RpoE蛋白上存在5个优势抗原表位。 展开更多
关键词 猪链球菌 RpoE 克隆 生物信息学
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疏肝益阳胶囊对炔雌醚诱导大鼠生精紊乱和氧化应激的缓解作用 被引量:2
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作者 李健 陈耀星 +6 位作者 陈福宁 王子旭 曹静 董玉兰 刘洋 王兴德 汪洋 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期422-430,共9页
笔者拟探讨疏肝益阳胶囊(SGYY)对炔雌醚(QES)诱导大鼠生精紊乱和氧化应激的缓解作用及机制。将20只8周龄雄性SD大鼠随机分为4组,适应饲养1周后,进行药物灌胃处理,对照组:0.1mL生理盐水+0.1mL橄榄油;SGYY组:100 mg·kg-1 SGYY;QES组:... 笔者拟探讨疏肝益阳胶囊(SGYY)对炔雌醚(QES)诱导大鼠生精紊乱和氧化应激的缓解作用及机制。将20只8周龄雄性SD大鼠随机分为4组,适应饲养1周后,进行药物灌胃处理,对照组:0.1mL生理盐水+0.1mL橄榄油;SGYY组:100 mg·kg-1 SGYY;QES组:0.1 mg·kg-1 QES;QES+SGYY组:0.1 mg·kg-1 QES+100mg·kg-1 SGYY。QES溶于橄榄油;SGYY溶于生理盐水;每天1次,连续2周。处理结束后,取睾丸、附睾、精囊腺和前列腺称重、测量长径与短径,并制备睾丸组织切片,通过HE染色,观察睾丸生精小管组织结构、生精细胞比例的变化;通过免疫组织化学方法检测睾丸生精细胞PCNA表达,Tunel法检测细胞凋亡;分离血浆,检测睾酮含量变化。取睾丸匀浆检测抗氧化酶活性。结果显示,QES处理后大鼠生殖器官的质量显著下降,附睾的精子数量显著减少;生精小管的面积、直径、生精上皮的高度和生精细胞数量均显著减少。而且,生精细胞的PCNA表达和血浆睾酮含量明显下降,Tunel阳性细胞数明显增加。睾丸SOD、GSH-Px和T-AOC活性显著下降,MDA含量显著升高。SGYY增加生殖器官质量、精子数量、睾丸睾酮含量、增殖的生精细胞数量和抗氧化酶活性,降低了MDA含量和Tunel的表达。结果表明,SGYY通过改善抗氧化功能、抑制氧化应激及促进睾酮分泌等途径增加了生精细胞数量并提高睾丸的生精功能。 展开更多
关键词 疏肝益阳胶囊 炔雌醚 生精细胞 氧化应激 精子畸形
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猪链球菌和副猪嗜血杆菌双重Taq Man荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量:7
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作者 靳曼玉 高树基 +4 位作者 李金朋 张小玲 丁轲 董发明 汪洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1052-1058,共7页
为建立一种能够同时检测猪链球菌(SS)和副猪嗜血杆菌(HPS)的方法,本实验根据GenBank中登录的SS gdh和HPS 16S rRNA基因保守序列分别设计并合成引物和探针,经优化反应体系和条件,初步建立了一种可以同时鉴别检测SS和HPS的双重Taq Man荧... 为建立一种能够同时检测猪链球菌(SS)和副猪嗜血杆菌(HPS)的方法,本实验根据GenBank中登录的SS gdh和HPS 16S rRNA基因保守序列分别设计并合成引物和探针,经优化反应体系和条件,初步建立了一种可以同时鉴别检测SS和HPS的双重Taq Man荧光定量PCR方法。分别以SS、HPS、支气管败血波氏杆菌(Bb)、金黄色葡萄球菌(SA)、猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)、无乳链球菌(GBS)基因为模板,利用该方法检测,结果显示,除SS、HPS外,与其他猪临床常见病原菌均无交叉反应,特异性强;利用建立的该双重Taq Man荧光定量PCR方法分别对10倍倍比稀释后的SS和HPS质粒标准品以及二者混合菌液检测,结果显示,该方法对SS和HPS质粒标准品的最低检测限分别为7.534×10^(1)拷贝/μL、6.350×10^(1)拷贝/μL,对细菌的最低检测限均为10~2cfu/μL,敏感性较高;组内和组间重复性试验的变异系数均小于3%,表明该方法重复性较好。利用建立的该双重Taq Man荧光定量PCR、常规PCR和国标法对在河南地区不同养猪场收集的54份疑似SS和/或HPS感染的病料样品进行检测,结果显示,双重Taq Man荧光定量PCR和常规PCR检测的阳性率分别为38.89%(21/54)和31.48%(17/54),二者的总符合率为92.59%;国标法与建立的方法检测结果一致。本研究建立的双重Taq Man荧光定量PCR方法为临床SS和HPS的鉴别检测和流行病学调查提供了有力的技术手段。 展开更多
关键词 猪链球菌 副猪嗜血杆菌 双重Taq Man荧光定量PCR 检测
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亚抑菌浓度强力霉素或庆大霉素影响猪链球菌生物被膜形成和毒力因子表达的研究 被引量:4
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作者 王嘉怡 刘宝宝 +4 位作者 张港琛 李金朋 毛晨龙 樊擎莹 汪洋 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期494-499,共6页
为探究亚抑菌浓度(Sub-MIC)强力霉素或庆大霉素对猪链球菌(SS)生物被膜形成能力和毒力因子表达的影响,本研究采用96孔板法测定强力霉素或庆大霉素对SS的最小抑菌浓度(MIC)。利用结晶紫染色和活细胞计数法分别测定亚抑菌浓度(1/2 MIC、1/... 为探究亚抑菌浓度(Sub-MIC)强力霉素或庆大霉素对猪链球菌(SS)生物被膜形成能力和毒力因子表达的影响,本研究采用96孔板法测定强力霉素或庆大霉素对SS的最小抑菌浓度(MIC)。利用结晶紫染色和活细胞计数法分别测定亚抑菌浓度(1/2 MIC、1/4 MIC、1/8 MIC和1/16 MIC)的强力霉素或庆大霉素作用下SS生物被膜形成能力、SS生长能力及其被膜内SS活菌数量;采用革兰染色观察亚抑菌浓度强力霉素(1/4 MIC和1/8 MIC)或(1/2 MIC和1/4 MIC)庆大霉素作用下SS分布情况;采用qRT-PCR检测亚抑菌浓度(1/4 MIC和1/8 MIC)作用下的SS毒力因子转录水平。结果显示:亚抑菌浓度强力霉素(1/2 MIC^1/16 MIC)或庆大霉素(1/2 MIC和1/4 MIC)均能够增强SS生物被膜形成能力(p<0.001)和增加被膜内SS活菌数量(p<0.001),且SS具有明显集聚成团现象;不同亚抑菌浓度强力霉素和庆大霉素均减缓了SS的早期生长速率,但随着培养时间延长,其生长特性恢复;1/4 MIC和1/8 MIC的强力霉素或庆大霉素均能够显著降低SS毒力因子cps、ef、sly、fbps、gdh和gapdh mRNA的转录水平(p<0.01)。结果表明:亚抑菌浓度的强力霉素和庆大霉素均可以增强SS生物被膜形成能力并降低其毒力因子的转录水平从而形成持续性感染,本研究为抗生素在治疗或预防相关疾病中的正确应用提供参考依据。 展开更多
关键词 猪链球菌 亚抑菌浓度 生物被膜 毒力因子
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猪源艰难梭菌的分离鉴定及特性分析 被引量:2
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作者 樊擎莹 钱满 +4 位作者 薛冰倩 魏世豪 王嘉怡 张艺 汪洋 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第3期39-43,共5页
为了解河南省规模化猪场猪源艰难梭菌的流行、耐药以及毒素基因携带情况,收集来自豫西地区5个养殖场中疑似艰难梭菌感染(clostridium difficile infection,CDI)猪的粪便标本(n=41)。采用厌氧培养法,用艰难梭菌选择性培养基环丝氨酸-头... 为了解河南省规模化猪场猪源艰难梭菌的流行、耐药以及毒素基因携带情况,收集来自豫西地区5个养殖场中疑似艰难梭菌感染(clostridium difficile infection,CDI)猪的粪便标本(n=41)。采用厌氧培养法,用艰难梭菌选择性培养基环丝氨酸-头孢西丁-果糖琼脂(cycloserine-cefoxitin-fructose agar,CCFA)完成分离培养。采用表型培养法进行菌株分离和鉴定,以多重PCR同时鉴定菌株并检测tcdA和tcdB毒素基因及二元毒素编码基因cdtA和cdtB。采用E-test法检测艰难梭菌对常用抗生素的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)值并判定菌株对药物的敏感性。结果从分离的41份样本中,经染色镜检及PCR鉴定,分离出符合艰难梭菌生长特性的菌株1株。药敏结果显示分离菌株对万古霉素和甲硝唑呈现高度敏感,对氟喹诺酮类药物以及四环素等表现出不同程度的耐药。艰难梭菌的研究大多集中在人源方面,本研究首次在河南省规模化养猪场中分离出艰难梭菌,对所分离菌株进行毒素基因检测,毒素A、B呈阳性,而无二元毒素基因。分离的猪源艰难梭菌对红霉素、万古霉素、甲硝唑、利福平均呈现高度敏感,对克林霉素、阿莫西林、左氧氟沙星、利奈唑酮和青霉素呈现不同程度的耐药。 展开更多
关键词 艰难梭菌 耐药 毒素基因 最小抑菌浓度
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