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siRNA干扰MACC1基因对食管癌细胞TE-1的生物学影响 被引量:6
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作者 吴剑 张敏 +1 位作者 戴天阳 任德莲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期442-445,共4页
目的通过siRNA干扰沉默结肠癌转移相关基因1(metastasis.associatedincoloncanceY1,MACCI),观察其对食管癌细胞株TE-1增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法通过化学合成的特异性siRNA与阳离子脂质体Lipofectamine TM 2000形成复合体... 目的通过siRNA干扰沉默结肠癌转移相关基因1(metastasis.associatedincoloncanceY1,MACCI),观察其对食管癌细胞株TE-1增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法通过化学合成的特异性siRNA与阳离子脂质体Lipofectamine TM 2000形成复合体,转染食管癌细胞株TE-1,应用qRT-PCR、Westernblot检测转染后MACCl基因和蛋白表达水平;MTT法检测细胞生长增殖水平;划痕实验、Transwell实验检测细胞株干扰前后迁移侵袭能力的改变。结果siRNA.MACCl转染TE一1细胞后,与空白组比较,干扰组MACCl基因和蛋白的表达水平明显降低,分别降低71%和87%;MTT实验观察1—7d,干扰组较空白组、阴性对照组增殖速度明显降低(P〈0.05),第4天后效果更明显;划痕实验结果显示干扰组迁移划痕处的细胞(10.6±2.2)明显少于空白组(68.2±2.5),差异具有统计学意义(P〈0.05),各对照组间无统计学差异(P〉0.05);Transwell实验结果显示干扰组穿过膜的TE-1细胞数目(4.2±1.9)较空白组(58.4±7.4)明显减少(P〈0.05),各对照组间无统计学差异(P〉0.05),表明干扰后TE-1细胞的迁移侵袭能力显著降低。结论siRNA.MACCl干扰导致TE-1细胞MACCl基因及蛋白表达水平明显下调;MACCl基因下调后,食管癌TE-1细胞的增殖、迁移、侵袭能力均明显降低,说明MACCl基因具有促进食管癌细胞增殖、迁移、侵袭的能力。 展开更多
关键词 食管鳞癌 结肠癌转移相关基因1 RNA 小分子干扰 细胞增殖 细胞迁移 肿瘤侵袭
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C-erbB-2 shRNA对小鼠肺腺癌细胞化疗敏感性的影响及其机制 被引量:1
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作者 曹新梅 张岱权 +3 位作者 王栩 夏纪毅 黄黎 高燕 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期777-781,共5页
目的:探讨人表皮生长因子受体2短发夹RNA(C-erbB-2shRNA)对小鼠肺腺癌Lewis细胞化疗敏感性的影响及其机制,为非小细胞肺癌尤其是腺癌的治疗提供新的思路。方法:常规培养小鼠肺腺癌Lewis细胞,分为未转染组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组和pGPU6/... 目的:探讨人表皮生长因子受体2短发夹RNA(C-erbB-2shRNA)对小鼠肺腺癌Lewis细胞化疗敏感性的影响及其机制,为非小细胞肺癌尤其是腺癌的治疗提供新的思路。方法:常规培养小鼠肺腺癌Lewis细胞,分为未转染组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组和pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组;应用Lipofectamine 2000将质粒快速转染各组Lewis细胞;应用RT-PCR法检测各组细胞C-erbB-2mRNA表达水平;应用Western blottting法检测各组细胞C-erbB-2蛋白表达水平。将Lewis细胞分为未转染对照组、pGPU6/RFP/Neo-shNC组、卡铂组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组、pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组和pGPU6/RFP/Neo-shNC+卡铂组;应用流式细胞术检测各组细胞凋亡率;应用Western blotting法检测各组细胞Bcl-2和Bax蛋白表达水平。结果:pGPU6/RFP/Neo-erbB-2组C-erbB-2mRNA和蛋白表达水平均低于未转染组和pGPU6/RFP/Neo-shNC组;pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组细胞凋亡率高于其他各组(P<0.01);与其他各组比较,pGPU6/RFP/Neo-erbB-2+卡铂组Bcl-2蛋白表达水平下降、Bax蛋白表达水平增加。结论:C-erbB-2shRNA能增强小鼠肺腺癌Lewis细胞对卡铂的敏感性,其机制可能是通过上调Bax蛋白、下调Bcl-2蛋白表达,进而增强卡铂诱导的细胞凋亡。 展开更多
关键词 人表皮生长因子受体2 短发夹RNA 肺腺癌细胞 化学疗法
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靶向C-erbB-2基因小干扰RNA对肺腺癌Calu-3细胞株放疗敏感性的影响
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作者 石华山 任德莲 +2 位作者 曹新梅 黄黎 姜尧 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1977-1980,共4页
目的探讨转染靶向C-erbb-2基因小干扰RNA(siRNA)对肺腺癌Calu-3细胞株放疗敏感性的影响。方法合成四对C-erbb-2基因的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA的干扰效果,筛选出干扰效果最好的一对,用LipofectamineTM2000转染肺腺癌细胞Calu-3,... 目的探讨转染靶向C-erbb-2基因小干扰RNA(siRNA)对肺腺癌Calu-3细胞株放疗敏感性的影响。方法合成四对C-erbb-2基因的siRNA,实时荧光定量PCR检测siRNA的干扰效果,筛选出干扰效果最好的一对,用LipofectamineTM2000转染肺腺癌细胞Calu-3,实验分为6组:空白组、单纯干扰组、2 Gy照射组、干扰加2Gy照射组、5Gy照射组和干扰加5Gy照射组,每组设3个复孔,最后Annexin V-FITC Kit检测各组细胞的凋亡。结果从合成的shRNA中筛选出一对siRNA,其干扰效果较其他3种有统计学差异;用其干扰Calu-3细胞后,分别用2Gy和5Gy的剂量照射细胞,得到的凋亡率如下:空白组7.767±0.551、干扰组14.400±1.114、2Gy剂量组11.867±0.737、2Gy+干扰组23.000±1.664、5Gy剂量组16.100±0.624、5Gy+干扰组27.900±1.709。结论靶向转染C-erbB-2基因siRNA至Calu-3细胞可提高其凋亡率;靶向转染C-erbB-2基因siRNA至Calu-3细胞可提高其对γ射线的敏感性。 展开更多
关键词 肺肿瘤 RNA干扰 C-ERBB-2基因 放疗敏感性
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MACC1在人食管鳞癌中的表达及对侵袭的影响 被引量:2
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作者 吴剑 戴天阳 +1 位作者 张敏 任德莲 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第21期2196-2200,共5页
目的分析结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)在人食管鳞癌组织中的表达及其与临床病例特征间的关系;研究MACC1基因在食管鳞癌侵袭转移中的生物学功能。方法采用免疫组化S-P法检测MACC1在食管鳞癌组织... 目的分析结肠癌转移相关基因1(metastasis-associated in colon cancer-1,MACC1)在人食管鳞癌组织中的表达及其与临床病例特征间的关系;研究MACC1基因在食管鳞癌侵袭转移中的生物学功能。方法采用免疫组化S-P法检测MACC1在食管鳞癌组织中的表达,结合临床病理特征分析MACC1表达与食管鳞癌侵袭、迁移之间的关系及其临床意义;采用脂质体法将质粒shRNA-MACC1转染食管鳞癌细胞株ECA109,采用G418压力培养筛选稳定转染ECA109阳性细胞,通过荧光定量PCR、Western blot检测ECA109阳性细胞MACC1基因和蛋白的表达,通过MTT、Transwell检测ECA109阳性细胞增殖能力、侵袭能力的变化。结果免疫组化结果显示食管鳞癌组织MACC1阳性率(94.1%)显著高于癌旁组织(37.3%),差异具有统计学意义(P<0.05);食管鳞癌上皮细胞中MACC1强阳性率(90.0%)显著高于非典型增生食管上皮细胞(15.0%),差异具有统计学意义(P<0.05),未明显增生食管上皮细胞中MACC1表达为阴性;在性别、年龄、肿瘤大小、病变部位、分化程度以及浸润深度分组比较中,MACC1蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。在体外实验中,随着MACC1表达下调,ECA109细胞增殖能力、侵袭迁移能力明显下降。结论 MACC1与食管鳞癌侵袭迁移密切相关;MACC1在非典型增生食管上皮和食管鳞癌组织中异常表达,在由异常增生到食管鳞癌的过程中,MACC1蛋白表达随之升高,提示MACC1基因与食管鳞癌发生、发展密切相关。 展开更多
关键词 食管鳞状细胞癌 结肠癌转移相关基因1 侵袭转移
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ASC在ONO-AE-248诱导的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的表达 被引量:1
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作者 胡艳玲 李国利 刘佳佳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期202-205,共4页
目的:探讨凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein,ASC)在ONO-AE-248所诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的作用及意义。方法:TUNEL法标记凋亡细胞,结合激光共聚焦扫描显微镜观察细胞核形态以及DNA片段化发... 目的:探讨凋亡相关斑点样蛋白(Apoptosis-associated speck-like protein,ASC)在ONO-AE-248所诱发的中性粒细胞非凋亡、非坏死性死亡中的作用及意义。方法:TUNEL法标记凋亡细胞,结合激光共聚焦扫描显微镜观察细胞核形态以及DNA片段化发生的情况;Western blot法检测不同药物刺激组(LPS延迟凋亡组、TNF-α促进凋亡组、ONO-AE-248刺激组以及自发性凋亡组)的ASC蛋白的表达差异性。结果:TUNEL法检测ONO-AE-248培养12小时后的中性粒细胞,未见TUNEL阳性细胞。Western blot结果显示ONO-AE-248刺激后中性粒细胞ASC蛋白的表达一直处于下调状态。结论:ONO-AE-248诱导人中性粒细胞死亡过程中细胞核DNA断裂方式明显不同于自发性凋亡组,核内染色体可能只发生DNA较大片段的断裂,而没有发生小片段化。ONO-AE-248引起的ASC表达的下调可能是这种新型细胞死亡方式区别于自发性凋亡的重要差异点。 展开更多
关键词 凋亡相关斑点样蛋白 ONO-AE-248 中性粒细胞 非凋亡、非坏死性程序化死亡 凋亡
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