2011—2013年河南省犬细小病毒分子流行病学调查与分析 被引量：8

1

作者 丁轲 余祖华 +6 位作者 彭春平 赵战勤 何雷 贾艳艳 张春杰 程相朝 夏咸柱 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1671-1678,共8页

为了解近年来河南省犬细小病毒病的流行情况及毒株的分子变异特征,于2011—2013年从郑州、洛阳、开封、信阳等10个不同的地区采集了573份疑似犬细小病毒病病例样品,首先采用国标法检测犬细小病毒(CPV)VP2基因462—1 023bp片段,对扩增的... 为了解近年来河南省犬细小病毒病的流行情况及毒株的分子变异特征,于2011—2013年从郑州、洛阳、开封、信阳等10个不同的地区采集了573份疑似犬细小病毒病病例样品,首先采用国标法检测犬细小病毒(CPV)VP2基因462—1 023bp片段,对扩增的序列进行测序和进化树分析。在分类的基础上分别挑选出代表性毒株,克隆VP2全基因,测序后进行比较分析。结果表明,国标法检测样品的阳性率为88.48%,阳性毒株分为7个分支,通过对7个代表毒株VP2基因426AA的碱基组成分析,发现6株属于CPV-2a型,1株属于CPV-2b型。与国内外的代表毒株的核苷酸相似性为98.4%~99.9%,氨基酸相似性为97.6%~100.0%。遗传进化树分析表明,7个CPV分离株分属于2个分支,其中KJ438801株与其它分离株亲缘关系较远。氨基酸序列比较发现共有12个位点发生变异,其中突变率较高的位点是267、297、324、440、555位氨基酸,每个毒株均有2~3个氨基酸发生突变。以上结果表明,河南省流行的CPV以CPV-2a型和CPV-2b型并存,但以CPV-2a型为主,且基因呈多变异现象,从而为河南省犬细小病毒病的疫苗研发和防治提供了科学的参考依据。 展开更多

关键词 河南省 犬细小病毒 分子流行病学调查 VP2基因

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2014—2017年河南省副猪嗜血杆菌分离菌株的PCR鉴定及分型 被引量：6

2

作者 邱静静 丁轲 +4 位作者 余祖华 贾艳艳 张春杰 汪洋 赵战勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第8期1649-1657,共9页

为了解河南省猪场副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)病的血清型流行情况,本研究于2014-2017年从河南省不同县市采集813份发病猪的肺、关节液等病料样品进行流行病学调查。首先通过TSA培养基分离病原,然后采用PCR法进行分子鉴定及... 为了解河南省猪场副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)病的血清型流行情况,本研究于2014-2017年从河南省不同县市采集813份发病猪的肺、关节液等病料样品进行流行病学调查。首先通过TSA培养基分离病原,然后采用PCR法进行分子鉴定及分型鉴定。选取3个不同血清型分离株作为代表毒株进行外膜蛋白OMP基因的扩增及序列分析。结果显示HPS总分离率为7.75%(63/813),不同年份的分离率为5.49%(13/237)~11.31%(19/168),血清4型、5型、14型、不可分型(NT)的分离率分别为38.10%(24/63)、33.33%(21/63)、7.94%(5/63)、20.63%(13/63),血清4型、5型为优势血清型,其次是14型和不可分型的菌株。三个代表毒株与国内外毒株核苷酸相似性为98.6%~99.9%,氨基酸相似性为99.0%~100.0%。遗传进化树分析表明,Henan-HPS-ZK5和Henan-HPS-KF4、Henan-HPS-LY14分别处于两个分支,其中代表血清4型和14型的毒株Henan-HPS-KF4和Henan-HPS-LY14位于同一亚支,而血清5型的毒株Henan-HPS-ZK5与前两者距离较远。OMP氨基酸序列分析显示,Henan-HPS-ZK5第57位发生了T57(Thr)→A57(Ala)的突变;血清4型、9型和14型HPS第89位、115位、233位和239位氨基酸分别为Gln(Q)、Glu(E)、Arg(R)和Gly(G),而其他血清型均为Arg(R)、Lys(K)、Gly(G)和Arg(R)(未定型菌株除外)。本研究数据在一定程度上反映了河南省HPS病发病情况及血清型流行情况,从而为河南地区HPS病的疫苗研发、控制提供了科学客观的参考依据。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 PCR分型 序列分析 外膜蛋白

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产纤维素酶地衣芽孢杆菌的诱变选育及其产酶条件优化 被引量：11

3

作者 余祖华 丁轲 +6 位作者 侯奎 李元晓 李旺 刘一尘 曹平华 贾艳艳 程相朝 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期1006-1011,共6页

为提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌(Bacillus lincheniformis)的产酶能力,本试验以前期分离的产纤维素酶地衣芽孢杆菌LY02作为出发菌株,通过紫外线对该菌株进行了诱变选育,筛选高产纤维素酶的突变株,并分别对其接种量、培养温度、培养时间... 为提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌(Bacillus lincheniformis)的产酶能力,本试验以前期分离的产纤维素酶地衣芽孢杆菌LY02作为出发菌株,通过紫外线对该菌株进行了诱变选育,筛选高产纤维素酶的突变株,并分别对其接种量、培养温度、培养时间、培养基初始pH和金属离子等产酶条件进行了优化。结果显示,经诱变选育后突变菌株的纤维素酶活力较出发菌株提高了34.31%。其最佳产酶培养条件为:接种量1.5%,培养温度37℃,培养时间24h,培养基初始pH 5.0,K+和Ba2+对纤维素酶的产生有激活作用。本研究为进一步将高产纤维素酶的突变株开发为生产菌株提供了基础条件。 展开更多

关键词 地衣芽孢杆菌 纤维素酶 诱变 产酶条件 酶活力

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2个枯草芽孢杆菌源纤维素酶基因的克隆、融合表达及其酶学性质分析 被引量：8

4

作者 丁轲 邱静静 +7 位作者 罗伟光 李旺 李元晓 曹平华 何万领 赵龙妹 王玉琴 张春杰 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第8期2725-2733,共9页

本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,设计一段柔性接头(GSGGGS),通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开... 本试验旨在构建不同纤维素酶的融合表达系统及探讨融合纤维素酶的酶学性质。利用PCR技术从实验室前期分离的枯草芽孢杆菌中分别扩增2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,设计一段柔性接头(GSGGGS),通过酶切连接将2个纤维素酶基因构建在一个开放阅读框(ORF)内,插入到pET32a(+)中构建重组表达载体pET32a(+)-Cel42-Cel22,转化大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,并对其酶学性质进行研究。结果表明:本试验成功克隆了2个纤维素酶基因Cel42和Cel22,并构建了重组表达系统BL21(DE3)/pET32a(+)-Cel42-Cel22,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)估计其分子质量约为101 ku,粗酶液中葡聚糖内切酶活性为57.62 U/mL,葡聚糖外切酶活性为32.57 U/mL。试验所得融合纤维素酶Cel42-Cel22的最适反应温度为50℃,最适反应pH为6.0,温度在30~70℃范围内时可维持70%以上的纤维素酶活性,pH在4.0~9.0范围内时可保持75%以上的纤维素酶活性,除Mn^(2+)外的其他金属离子对纤维素酶的活性均具有一定的抑制作用,其中Hg^(2+)和Cu^(2+)对的抑制作用较明显。由此可见,本试验在大肠杆菌BL21(DE3)中成功表达出了融合纤维素酶Cel42-Cel22,且该酶具有一定的活性,可适应较宽广的温度和pH范围,对金属离子敏感。 展开更多

关键词 纤维素酶 枯草芽孢杆菌 克隆 融合表达 酶学性质

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产纤维素酶地衣芽孢杆菌B.LY02摇瓶发酵条件优化 被引量：4

5

作者 余祖华 丁轲 +2 位作者 侯奎 李元晓 李旺 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2016年第4期76-80,8,共5页

为了提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis LY02,B.LY02）的产酶能力,采用单因素试验对该菌株产酶的摇瓶发酵条件进行了优化。优化结果显示：菌株B.LY02发酵培养基的最适碳源为麦芽糖,氮源为酵母膏,初始pH值为5.0,培养... 为了提高产纤维素酶地衣芽孢杆菌（Bacillus licheniformis LY02,B.LY02）的产酶能力,采用单因素试验对该菌株产酶的摇瓶发酵条件进行了优化。优化结果显示：菌株B.LY02发酵培养基的最适碳源为麦芽糖,氮源为酵母膏,初始pH值为5.0,培养温度为37℃,培养时间为30 h,装液量为60 mL（250 m L三角瓶）,接种量（体积分数）为2%,摇床转速180～200 r/min。通过优化发酵条件,菌株B.LY02的产酶活性达到了0.683 5 U/mL,比优化前提高了约27.73%。 展开更多

关键词 纤维素酶 地衣芽孢杆菌 发酵条件 酶活

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产植酸酶芽孢杆菌对艾维茵肉鸡生产性能、免疫器官指数和肠道菌群的影响 被引量：5

6

作者 余祖华 丁轲 +4 位作者 孔志园 李旺 李元晓 刘一尘 曹平华 《湖北农业科学》 2016年第15期3942-3944,3949,共4页

本试验旨在研究产植酸酶芽孢杆菌对艾维茵肉鸡生产性能、免疫器官指数和肠道菌群的影响。选取240只1日龄健康艾维茵肉鸡,随机分4组,每组20只,3个重复。对照组饲喂基础饲粮;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础饲粮中分别添加终浓度为1.0×106、1... 本试验旨在研究产植酸酶芽孢杆菌对艾维茵肉鸡生产性能、免疫器官指数和肠道菌群的影响。选取240只1日龄健康艾维茵肉鸡,随机分4组,每组20只,3个重复。对照组饲喂基础饲粮;试验Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组在基础饲粮中分别添加终浓度为1.0×106、1.0×107和1.0×108 CFU/g的产植酸酶芽孢杆菌制剂,试验期为42 d。结果表明,在1~42日龄时,试验Ⅰ组和试验Ⅱ组的平均日增重显著高于对照组(P<0.05),试验Ⅱ组的料重比显著低于对照组(P<0.05)。产植酸酶芽孢杆菌对肉鸡的免疫器官指数无显著差异(P>0.05),但试验组与对照组相比均有提高趋势,其中试验Ⅱ组免疫器官指数最高。21日龄时,试验Ⅱ组肠道乳酸杆菌和双歧杆菌数量极显著地高于对照组(P<0.01),各试验组的大肠杆菌数量均极显著地低于对照组(P<0.01);42日龄时,各试验组的乳酸杆菌数量极显著地高于对照组(P<0.01),各试验组的双歧杆菌数量显著高于对照组(P<0.05),各试验组的大肠杆菌数量极显著地低于对照组(P<0.01)。由此可知,饲料中添加一定量的产植酸酶芽孢杆菌具有提高艾维茵肉鸡的生产性能、免疫器官指数和改善肠道菌群的作用,其中按1×107 CFU/g剂量添加效果最好。 展开更多

关键词 芽孢杆菌 植酸酶 艾维茵肉鸡 生产性能 免疫器官指数 肠道菌群

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植物乳杆菌DPP8胆盐水解酶基因在大肠杆菌中的表达及其酶学性质 被引量：1

7

作者 丁轲 段锦 +7 位作者 余祖华 李旺 李元晓 何万领 张春杰 丁盼盼 王玉琴 刘宁 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第7期3333-3342,共10页

本试验旨在克隆植物乳杆菌DPP8胆盐水解酶(BSH)基因并在大肠杆菌表达系统对其进行表达,同时探讨其酶学性质。通过PCR技术克隆植物乳杆菌DPP8 BSH基因,然后将该基因重组到大肠杆菌表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a(+)-BSH,再... 本试验旨在克隆植物乳杆菌DPP8胆盐水解酶(BSH)基因并在大肠杆菌表达系统对其进行表达,同时探讨其酶学性质。通过PCR技术克隆植物乳杆菌DPP8 BSH基因,然后将该基因重组到大肠杆菌表达载体pET32a(+)中,获得重组表达载体pET32a(+)-BSH,再将其转化至大肠杆菌BL21中,通过异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达BSH。采用牛磺酸标准液标定法对表达的BSH的活性进行测定,并对其酶学性质进行研究。结果显示:本试验获得了BSH基因全长975 bp的序列,同源性比较和系统进化树分析表明成功获得了BSH基因。对BSH表达产物的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示获得了1条约为56 ku的蛋白条带,与预期蛋白分子质量大小相符。重组菌株在37℃、0.1 mmol/L IPTG诱导6 h时BSH活性最高,可达22.81 U/mL。纯化的BSH的最适反应温度为37℃,最适反应pH为6.5,在40℃以下时具有较好的热稳定性,pH在3.0~9.0时可保持90%以上的活性。镁离子(Mg^2+)、铝离子(Al^3+)、三价铁离子(Fe^3+)对BSH活性具有较强的抑制作用,而钠离子(Na^+)、钾离子(K^+)、二价铁离子(Fe^2+)、铜离子(Cu^2+)、锰离子(Mn^2+)、锌离子(Zn^2+)、钙离子(Ca^2+)对BSH活性无明显抑制作用。综上,本试验成功表达了植物乳杆菌DPP8 BSH,且其活性可达22.81 U/mL,在40℃以下和pH 3.0~9.0时能够保持较强的活性,但Mg^2+、Al^3+和Fe^3+对其活性具有较强的抑制作用。 展开更多

关键词 植物乳杆菌 胆盐水解酶 克隆 表达 酶学性质

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胆盐水解酶基因的克隆及其在干酪乳杆菌CECT5276中的分泌表达

8

作者 丁轲 余祖玲 +7 位作者 王镨蒂 余祖华 李旺 李元晓 何万领 曹平华 张春杰 刘宁 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期466-473,共8页

本试验旨在克隆植物乳杆菌(L.plantarum)DPP8的胆盐水解酶(BSH)基因,并在干酪乳杆菌(L.casei)CECT5276中对其进行表达。通过PCR技术克隆L.plantarum DPP8的BSH基因,然后将该基因重组到L.casei表达载体pMJ67-sp中,获得了重组表达质粒pMJ6... 本试验旨在克隆植物乳杆菌(L.plantarum)DPP8的胆盐水解酶(BSH)基因,并在干酪乳杆菌(L.casei)CECT5276中对其进行表达。通过PCR技术克隆L.plantarum DPP8的BSH基因,然后将该基因重组到L.casei表达载体pMJ67-sp中,获得了重组表达质粒pMJ67-sp-BSH,再将其电转化至L.casei CECT5276中,通过乳糖诱导BSH分泌表达。采用牛磺酸标准曲线法对表达产物的BSH活力进行测定,并采用邻苯二甲醛(OPA)法对其降胆固醇能力进行测定。结果显示:本试验获得了BSH基因的全长序列,为975 bp;同源性比较显示该基因与L.plantarum MBUL69的BSH基因的同源性为99.6%;进化树分析显示该基因与L.plantarum MBUL69的BSH基因处于同一分支。表达产物的十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示获得了1条分子质量约为37 ku的蛋白条带,与推测的BSH蛋白分子质量大小相符。酶活力测定结果表明重组菌株在37℃、0.5%乳糖诱导36 h时,表达产物中BSH活力最高,可达42.57 U/mL。重组菌株在含2%胆固醇的MRS培养基中培养48 h后,胆固醇降解率为94.43%。综上可知,本试验成功克隆了L.plantarum DPP8 BSH基因,并实现了其在L.casei CECT5276中的高效分泌表达。 展开更多

关键词 胆盐水解酶 克隆 干酪乳杆菌 分泌表达 酶活力

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gga-miRNA-155对MDCC-MSB1细胞增殖的影响

9

作者 余祖华 丁轲 +8 位作者 郁川 贾艳艳 何雷 廖成水 李静 张梦珂 邱静静 张春杰 程相朝 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第2期1-6,共6页

【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga... 【目的】构建gga-miRNA-155前体基因(pre-gga-miRNA-155)真核表达载体,验证gga-miRNA-155在MDCC-MSB1细胞中的表达效果,探究其对MDCC-MSB1细胞增殖的影响。【方法】采用PCR方法从鸡肝脏基因组DNA中扩增gga-miRNA-155前体基因片段pre-gga-miRNA-155,并将其克隆入pMD-18T载体,构建克隆载体pMD-18T-pre-gga-miRNA-155。用EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA真核表达载体和pMD-18T-pre-gga-miRNA-155,将pre-gga-miRNA-155酶切回收片段与pcDNA6.2-GW/EmGFP-miRNA的酶切回收片段进行连接,构建重组真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,对其进行PCR、EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切及DNA测序鉴定。将重组载体转染到MDCC-MSB1细胞中,应用实时荧光定量PCR (Real-time PCR)检测gga-mi-RNA-155的表达水平,利用MTT法检测细胞增殖能力的变化。【结果】PCR扩增获得了长度约154bp的鸡pre-gga-mi-RNA-155基因。成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体pcDNA6.2-pre-gga-miRNA-155,瞬时转染MD-CC-MSB1细胞后gga-miRNA-155表达水平显著增加,且MDCC-MSB1细胞的体外增殖能力增强。【结论】成功构建了pre-gga-miRNA-155的真核表达载体,其可在MDCC-MSB1细胞中过表达gga-miRNA-155,且可促进MDCC-MSB1细胞的体外增殖。 展开更多

关键词 gga-miRNA-155 表达载体 MDCC-MSB1细胞 细胞增殖

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玉米赤霉烯酮降解菌株的筛选及降解特性研究 被引量：7

10

作者 段锦 丁轲 +8 位作者 余祖华 李旺 李元晓 何万领 曹平华 赵龙妹 贾艳艳 王玉琴 刘宁 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第9期5266-5276,共11页

本试验旨在筛选能够有效降解玉米赤霉烯酮(ZEN)的微生物菌株。试验以ZEN为唯一碳源对发霉饲料、动物粪便等样品中的菌株进行分离筛选,选取其中降解率较高的菌株进行鉴定。研究菌株不同活性成分的ZEN降解效率以及不同培养条件下菌株的ZE... 本试验旨在筛选能够有效降解玉米赤霉烯酮(ZEN)的微生物菌株。试验以ZEN为唯一碳源对发霉饲料、动物粪便等样品中的菌株进行分离筛选,选取其中降解率较高的菌株进行鉴定。研究菌株不同活性成分的ZEN降解效率以及不同培养条件下菌株的ZEN降解效率,初步探明菌株降解机制,优化菌株降解条件,并通过小鼠试验评价菌株的体内ZEN降解效果。结果表明:从样品中筛选出2株能有效降解ZEN的菌株,分别命名为NA-J21和MLS-H32,经鉴定分别是解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)及枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。37℃培养48 h,菌株NA-J21与MLS-H32的ZEN降解率分别为71.3%和61.5%。2株菌主要通过细胞分泌的胞外酶降解ZEN,此外菌株细胞壁对ZEN有一定的吸附能力。菌株NA-J21降解ZEN的最适条件为接种量2.0%,初始pH 7.0,温度37℃,培养时间12 h;菌株MLS-H32的最佳ZEN降解条件为接种量2.5%,初始pH 7.0,温度32℃,培养时间12 h。菌株NA-J21和MLS-H32能够缓解ZEN中毒引起的小鼠脏器损伤,对ZEN污染小鼠有一定治疗效果。综上所述,本试验筛选的菌株NA-J21和MLS-H32能够有效降解ZEN,是微生物降解ZEN的良好选择。 展开更多

关键词 霉菌毒素 玉米赤霉烯酮 微生物降解 芽孢杆菌 降解特性

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鸭源高产L-乳酸凝结芽孢杆菌的分离与鉴定 被引量：9

11

作者 孟长纪 丁轲 +2 位作者 李旺 李元晓 孙二刚 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2015年第6期67-70,8-9,共4页

为了获得高产L-乳酸的凝结芽孢杆菌,从河南省汝州市的肉鸭养殖场采集50份鸭肠道黏液样品。利用分离培养基对细菌进行分离和纯化,用试剂盒检测L-乳酸产量,结合菌落形态、显微形态、生理生化试验和16S r DNA序列鉴定其种属。鉴定结果表明:... 为了获得高产L-乳酸的凝结芽孢杆菌,从河南省汝州市的肉鸭养殖场采集50份鸭肠道黏液样品。利用分离培养基对细菌进行分离和纯化,用试剂盒检测L-乳酸产量,结合菌落形态、显微形态、生理生化试验和16S r DNA序列鉴定其种属。鉴定结果表明:从50株细菌中分离得到一株高产L-乳酸的菌株BC07,L-乳酸产量为43.2 g/L。经鉴定为凝结芽孢杆菌,能形成芽孢,而且该菌株能够耐受较强的酸、胆盐和高温。 展开更多

关键词 鸭源 凝结芽孢杆菌 L-乳酸 分离 鉴定

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副猪嗜血杆菌环介导等温扩增快速检测方法的建立 被引量：4

12

作者 侯魁 丁轲 +2 位作者 刘守业 余祖华 赵战勤 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2017年第6期59-62,69,共5页

为了建立一种简便、快速、灵敏、特异的副猪嗜血杆菌(Hps)检测方法,以Hps的16S rRNA保守区域片段为靶序列,选择6个特异性区域,设计4条特异性引物F3、B3、FIP和BIP。经优化反应体系、检测灵敏性和特异性,建立Hps的环介导等温扩增(LAMP)... 为了建立一种简便、快速、灵敏、特异的副猪嗜血杆菌(Hps)检测方法,以Hps的16S rRNA保守区域片段为靶序列,选择6个特异性区域,设计4条特异性引物F3、B3、FIP和BIP。经优化反应体系、检测灵敏性和特异性,建立Hps的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法。研究结果表明:该方法的最优反应体系是引物c(F3)∶c(FIP)或c(B3)∶c(BIP)为1∶4、Mg^(2+)浓度为2 mmol/L、d NTPs浓度为6 mmol/L,最低检出量为0.241pg/μL DNA。该方法灵敏度是PCR法的100倍,且能够特异性检测出Hps,不能检测出猪链球菌、沙门氏菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、胸膜肺炎放线杆菌和金黄色葡萄球菌。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 16S RRNA 环介导等温扩增 灵敏性 特异性

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牛源纤维素降解菌的分离筛选与鉴定 被引量：5

13

作者 张玉云 丁轲 +2 位作者 李旺 余祖华 李元晓 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2021年第5期72-77,87,M0006,M0007,共9页

为了提高牛粪中的纤维素降解效率,筛选牛粪发酵菌剂的优良菌种,采用连续稀释平板法,以羧甲基纤维素纳(CMC-Na)为碳源,从新鲜牛粪和腐熟牛粪中对纤维素降解菌株进行初步分离。对所得菌株进行纤维素水解圈测定,并进一步采用3,5-二硝基水杨... 为了提高牛粪中的纤维素降解效率,筛选牛粪发酵菌剂的优良菌种,采用连续稀释平板法,以羧甲基纤维素纳(CMC-Na)为碳源,从新鲜牛粪和腐熟牛粪中对纤维素降解菌株进行初步分离。对所得菌株进行纤维素水解圈测定,并进一步采用3,5-二硝基水杨酸(DNS)法测定纤维素酶活,再结合菌落形态、生化反应特性和16S rDNA序列分析进行菌种鉴定。研究结果表明:从牛粪样品中初步分离得到了56株纤维素降解菌,进一步水解圈测定筛选出13株菌,其中菌株NA10的水解圈最大,水解圈直径与菌落直径比值(H/C)为5.35,该菌纤维素酶活(CMC)和滤纸酶活(FPA)分别为55.13 U/mL和35.47 U/mL。观察NA10菌落呈乳白色圆盘状,表面光滑不透明。显微镜下,可见NA10经革兰氏染色呈阳性,为短杆状、链状排列,中生芽孢。生化反应显示NA10符合芽孢杆菌属安全芽孢杆菌的特征。经16S rDNA基因序列分析鉴定,该菌株为芽孢杆菌属的安全芽孢杆菌(Bacillus safensis),将其命名为Bacillus safensis NA10。本文分离得到一株具有降解纤维素潜力的菌株,可作为制备发酵菌剂的优势菌种之一。 展开更多

关键词 牛源 纤维素降解菌 分离 筛选 鉴定

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一株降解呕吐毒素的青霉菌的分离与鉴定 被引量：7

14

作者 李亚菲 余祖华 +2 位作者 刘赛宝 李三栋 丁轲 《饲料工业》 北大核心 2015年第15期42-45,共4页

为了分离能降解呕吐毒素的菌株,试验以呕吐毒素为唯一碳源,对采集于洛阳市周围的农田、垃圾场、水沟边的土壤及瘤胃内容物等共55份样品进行初筛,然后用初筛的菌株来发酵粉碎的玉米秸秆以复筛呕吐毒素降解率较高的菌株,其中编号为Ma-1-4... 为了分离能降解呕吐毒素的菌株,试验以呕吐毒素为唯一碳源,对采集于洛阳市周围的农田、垃圾场、水沟边的土壤及瘤胃内容物等共55份样品进行初筛,然后用初筛的菌株来发酵粉碎的玉米秸秆以复筛呕吐毒素降解率较高的菌株,其中编号为Ma-1-4的菌株具有较强的降解呕吐毒素的能力,对玉米秸秆中呕吐毒素的降解率达46%。经形态学和r DNA-ITS序列同源性分析,确定该菌株为青霉属菌株。 展开更多

关键词 呕吐毒素 青霉菌 分离 鉴定

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鸡RORα真核表达载体的构建及其在MSB1细胞中的表达

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作者 尤钊 左珂朦 +5 位作者 余祖华 丁轲 王垚垚 刘彤 张梦珂 邱静静 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第7期1791-1797,共7页

为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM_001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中... 为构建鸡维甲酸相关孤核受体α(retinoid acid receptor related orphan receptorα,RORα)的真核表达载体,并检测其在MSB1细胞中的表达效果,本研究参照GenBank中鸡RORα基因序列(登录号:NM_001289887.1)设计特异性引物,从鸡肝脏组织中提取总RNA,经反转录合成cDNA,以此为模板进行PCR扩增,将扩增的特异性RORα基因片段连接pMD18-T载体,构建克隆载体pMD18-T-RORα,再用SalⅠ和BamHⅠ双酶切克隆载体pMD18-T-RORα和真核表达载体pEGFP-N1,将酶切回收的RORα与pEGFP-N1片段进行连接,构建重组真核表达载体pEGFP-N1-RORα,经PCR、酶切和测序验证准确性后,将其转染MSB1细胞,于转染后48h荧光显微镜下观察EGFP的表达情况,并采用实时荧光定量PCR检测鸡RORα在MSB1细胞中的表达水平。结果显示,从构建的重组质粒pEGFP-N1-RORα中可扩增出大小约1 600bp的特异性片段,用SalⅠ和BamHⅠ可切出大小约4 700和1 600bp的两条带。实时荧光定量PCR结果显示,转染MSB1细胞48h后,与对照组相比,重组真核表达载体转染组中鸡RORα基因mRNA水平显著增加(P<0.05)。表明本试验成功构建了鸡RORα的真核表达载体,该载体可在MSB1细胞中表达鸡RORα,为进一步研究鸡RORα对MSB1细胞增殖的影响奠定基础。 展开更多

关键词 鸡 甲酸相关孤核受体α(RORα)基因 真核表达载体 MSB1细胞 表达

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