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猪多杀性巴氏杆菌5个抗原蛋白的免疫保护效力比较研究: 1; 作者孙贺洁孙鑫妍 +5 位作者申慧媛张俊峰关丽君董发明薛云赵战勤《中国预防兽医学报》北大核心 2025年第1期63-70,共8页; 为筛选多杀性巴氏杆菌(PM)的优势保护性抗原,本研究利用原核表达系统表达了PM 5个重组蛋白rTorA、rPlpE、rThiB、rPGAM和rPrX,采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化该5个重组蛋白后,通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果;采用western b... 展开更多; 关键词多杀性巴氏杆菌抗原小鼠免疫保护; 在线阅读下载PDF 职称材料

多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)保护性抗原片段的筛选及免疫效果的评估: 2; 作者庞碧寒姚文敬 +4 位作者王怡涤关丽君薛云张俊峰赵战勤《中国预防兽医学报》北大核心 2025年第3期278-285,共8页; 为筛选产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其分为N端3个片段(rPMT-N1和rPMT-N2a、rPMT-N2b)和C端5个片段(rPMT-C3、rPMTC4、rPMT-C5、rPMT-C6及rPMT-C7),利用原核... 展开更多; 关键词产毒多杀性巴氏杆菌 toxA 多杀性巴氏杆菌毒素重组蛋白亚单位疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

副猪格拉瑟菌两种重要抗原蛋白的串联表达及其免疫保护效力的研究: 3; 作者杨金钱董玉岗 +7 位作者丁略烜史琳琪杨梦娟张俊峰关丽君司丽芳薛云赵战勤《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第11期1166-1173,共8页; 为获得副猪格拉瑟菌(GPS)亚单位疫苗的高效保护性抗原,本研究利用原核表达系统对GPS重要保护性抗原Hps06257与HbpB及其C端片段(HbpB2)进行了融合表达,获得4个重组蛋白rHps06257-HbpB、rHbpBHps06257、rHps06257-HbpB2和rHbpB2-Hps06257... 展开更多; 关键词副猪格拉瑟菌串联表达小鼠保护效力亚单位疫苗; 在线阅读下载PDF 职称材料

NOD1基因单核苷酸多态性与牛结核病易感性相关性的研究被引量：3: 4; 作者王坤高伟娜 +3 位作者杨霄况修冬赵战勤薛云《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1232-1239,1252,共9页; 为探究中国荷斯坦奶牛NOD1基因多态性与牛结核病(BTB)易感性的相关性,本研究以提取的BTB组(130份)与对照组(130份)共260份的牛全血样品基因组DNA为模板,利用PCR分段扩增NOD1基因13个外显子的编码区基因序列并测序,通过Chromas软件读取26... 展开更多; 关键词牛结核病 NOD1基因 SNP 易感性; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪多杀性巴氏杆菌5个抗原蛋白的免疫保护效力比较研究: 1; 作者孙贺洁孙鑫妍申慧媛张俊峰关丽君董发明薛云赵战勤; 机构河南科技大学动物科技学院/洛阳市动物细菌性传染病防控技术重点实验室河南科技大学医学技术与工程学院/分子诊断实验室; 出处《中国预防兽医学报》北大核心 2025年第1期63-70,共8页; 基金国家自然科学基金项目(32072899、U1704117)。; 文摘为筛选多杀性巴氏杆菌(PM)的优势保护性抗原,本研究利用原核表达系统表达了PM 5个重组蛋白rTorA、rPlpE、rThiB、rPGAM和rPrX,采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化该5个重组蛋白后,通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果;采用western blot检测各重组蛋白的反应原性。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白rTorA主要以包涵体的形式表达,重组蛋白rPlpE以可溶性和包涵体两种形式表达,重组蛋白rThiB、rPGAM和rPrX主要以可溶性形式表达。纯化后分别在91 ku、45 ku、41 ku、32 ku和25 ku处出现单一目的条带,纯化效果较好;western blot结果显示,5个重组蛋白均可与猪PM阳性血清发生特异性反应,表明5个重组蛋白的反应原性均较强;采用超微量核酸蛋白浓度测定仪测定这5个重组蛋白的浓度分别0.7 mg/mL、2.0 mg/mL、1.0 mg/mL、1.5 mg/mL和0.5 mg/mL。将这5个重组蛋白分别与ISA201佐剂混合制成疫苗后以皮下注射方式免疫小鼠2次,间隔21 d。利用间接ELISA方法检测各组小鼠免疫后不同时间的抗体水平。二免后15 d,分别从各组随机取一半小鼠,以约4 LD50(210 cfu)A型PM A7强毒株第一次经腹腔注射攻毒;7 d后,将各组剩余的小鼠再以相同剂量的PM A7株攻毒。间接ELISA检测结果显示,5个重组蛋白疫苗均能诱导免疫小鼠产生较高水平的IgG抗体。攻毒结果显示,对照组小鼠全部死亡,各蛋白疫苗组(除rPlpE组外)也出现不同程度的发病死亡情况,死亡小鼠剖检均呈典型的败血症性病理变化,从死亡小鼠的心、肺、肝等组织脏器中均能分离到PM;在第一次攻毒试验中,rTorA、rPlpE、rThiB、rPGAM和rPrX疫苗对小鼠提供的免疫保护率分别为60%(6/10)、100%(10/10)、90%(9/10)、70%(7/10)、20%(2/10);在第二次重复攻毒试验中rTorA、rPlpE、rThiB、rPGAM和rPrX疫苗分别对小鼠提供60%(6/10)、100%(10/10)、80%(8/10)、60%(6/10)、40%(4/10)的免疫保护率。两次攻毒试验结果基本一致。本研究证实重组蛋白rPlpE和rThiB可以作为PM亚单位疫苗的候选抗原蛋白,为研发PM亚单位疫苗奠定了实验基础。; 关键词多杀性巴氏杆菌抗原小鼠免疫保护; Keywords Pasteurella mulcida antigen mice immune protection; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)保护性抗原片段的筛选及免疫效果的评估: 2; 作者庞碧寒姚文敬王怡涤关丽君薛云张俊峰赵战勤; 机构河南科技大学动物科技学院/洛阳市动物细菌性传染病防控技术重点实验室河南科技大学医学技术与工程学院/分子诊断实验室; 出处《中国预防兽医学报》北大核心 2025年第3期278-285,共8页; 基金国家自然科学基金项目(32072899) 中牧实业股份有限公司开放科研课题(ZM20200526)。; 文摘为筛选产毒多杀性巴氏杆菌(T+Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)的结构和功能区将其分为N端3个片段(rPMT-N1和rPMT-N2a、rPMT-N2b)和C端5个片段(rPMT-C3、rPMTC4、rPMT-C5、rPMT-C6及rPMT-C7),利用原核表达系统表达这8个片段,采用His6标签蛋白纯化试剂盒纯化各重组蛋白,经SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果后,通过Image J软件计算各重组蛋白的表达量,进一步采用western blot检测各重组蛋白的反应原性。SDS-PAGE结果显示,分别获得了34 ku、62 ku、67 ku、70 ku、64 ku、102 ku、36 ku、60 ku的重组蛋白,其中rPMT-N2a、rPMT-N2b、rPMT-C5和rPMT-C7以可溶性和包涵体两种形式表达,另外4个重组蛋白均以包涵体形式表达,纯化后在上述各位置处分别出现较单一的目的条带,且各蛋白的表达量占菌体总蛋白的8.44%~35.77%。Western blot结果显示,8个重组蛋白均可与猪源T+Pm TPM-6株的猪阳性血清发生特异性反应,均具有一定的反应原性,其中rPMT-N1、rPMT-N2a、rPMT-N2b、rPMT-C5的反应原性较强。基于此,采用ISA201佐剂制备这4种重组蛋白的亚单位疫苗,间隔20 d对小鼠经皮下注射免疫(50μg/只)两次,观察并记录各组小鼠的临床症状及死亡数,评估该疫苗对小鼠的安全性。首免后35 d(二免后14 d)对各组小鼠分别以10 LD_(100)和30 LD_(100)的天然粗提PMT(cPMT)对小鼠攻毒,评估4种亚单位疫苗(rPMT-N1、rPMT-N2a、rPMT-N2b及rPMT-C5)对小鼠的免疫保护效力。安全性试验结果显示,免疫后21 d rPMT-N2a组小鼠的死亡率为2/24,rPMT-N2b组小鼠的死亡率为6/24,其余各组小鼠均无异常。ELISA结果显示,二免后各疫苗组小鼠的几何平均抗体效价分别升至1:1552、1:18820、1:1351和1:6208,表明各重组蛋白均能诱导免疫小鼠产生良好的体液免疫反应。攻毒结果显示,对照组小鼠在两种剂量的cPMT攻毒后均出现相应症状并均在24h内全部死亡,部分亚单位疫苗免疫组小鼠也出现不同程度的发病及死亡,但发病及死亡时间较对照组延长。以10LD_(100)的cPMT攻毒后,上述各疫苗对小鼠的免疫保护率分别为87.5%、100%、37.5%和100%;以30 LD_(100)的cPMT攻毒后,各疫苗对小鼠的免疫保护率分别为50%、85.7%、0和75%。本研究表明,rPMT-N2a、rPMT-C5具有作为T+Pm亚单位疫苗优势保护性抗原的潜力,该结果为后期T+Pm亚单位疫苗的研发奠定基础。; 关键词产毒多杀性巴氏杆菌 toxA 多杀性巴氏杆菌毒素重组蛋白亚单位疫苗; Keywords toxigenic Pasteurella multocida toxA Pasteurella multocida toxin recombinant proteins subunit vaccines; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名副猪格拉瑟菌两种重要抗原蛋白的串联表达及其免疫保护效力的研究: 3; 作者杨金钱董玉岗丁略烜史琳琪杨梦娟张俊峰关丽君司丽芳薛云赵战勤; 机构河南科技大学动物科技学院洛阳市动物细菌性传染病防控技术重点实验室河南科技大学医学技术与工程学院分子诊断实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心 2024年第11期1166-1173,共8页; 基金国家自然科学基金项目(31672530、U1704117)。; 文摘为获得副猪格拉瑟菌(GPS)亚单位疫苗的高效保护性抗原,本研究利用原核表达系统对GPS重要保护性抗原Hps06257与HbpB及其C端片段(HbpB2)进行了融合表达,获得4个重组蛋白rHps06257-HbpB、rHbpBHps06257、rHps06257-HbpB2和rHbpB2-Hps06257。采用His标签蛋白纯化试剂盒纯化该4个重组蛋白后,通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达及纯化效果。采用超微量核酸蛋白浓度测定仪测定这4个串联重组蛋白以及实验室前期保存的两个重组蛋白(rHps06257和rHbpB)的浓度后,分别与ISA201佐剂混合制成亚单位疫苗,对小鼠经皮下注射方式免疫2次,分别在小鼠免疫前、首免后21 d和二免后14 d采血,采用间接ELISA方法检测各组小鼠的抗体水平;二免后15 d分别以5 LD50(8.40×10^(8)cfu)和10 LD50(1.68×10^(9)cfu)的GPS 5型H5L3株菌液对小鼠经腹腔攻毒,统计各重组蛋白疫苗对小鼠的攻毒保护率。SDS-PAGE检测结果显示,4个重组蛋白分别在约92.4 ku、92.5 ku、63.6 ku和63.6 ku处出现目的条带,均以包涵体形式表达,其表达量占菌体总蛋白的11.2%~28.3%。4个重组蛋白的纯化效果均较好,浓度介于1.2 mg/mL~3.0 mg/mL。Western blot结果显示,4个重组蛋白均能够与GPS阳性血清发生特异性反应。ELISA结果显示,各重组蛋白疫苗免疫组小鼠血清中IgG抗体水平随免疫次数的增加而升高,且均与PBS对照组差异极显著(P<0.01),其中rHps06257-HbpB组小鼠血清中的IgG抗体水平最高。攻毒试验结果显示,采用5 LD50H5L3株攻毒后,重组蛋白疫苗rHps06257-HbpB、rHbpB-Hps06257、rHps06257-HbpB2和rHbpB2-Hps06257对小鼠的免疫保护率均为100%(6/6),重组蛋白疫苗rHps06257和rHbpB对小鼠的免疫保护率分别为67%(4/6)和50%(3/6)(对照组存活率为0);采用10 LD50H5L3株攻毒后,6个重组蛋白疫苗对小鼠的免疫保护率分别为83%(5/6)、0、67%(4/6)、33%(3/6)、0和0。本研究对GPS重要保护性抗原Hps06257与HbpB及其C端片段(HbpB2)进行了4种方式的串联表达,并对4个重组蛋白疫苗的免疫保护效力进行了评价,证实重组蛋白rHps06257-HbpB和rHps06257-HbpB2具备成为GPS亚单位疫苗候选靶抗原的潜力,为GPS亚单位疫苗的研发提供了重要参考依据。; 关键词副猪格拉瑟菌串联表达小鼠保护效力亚单位疫苗; Keywords Glaesserella parasuis tandem expression mice protective efficacy subunit vaccine; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名NOD1基因单核苷酸多态性与牛结核病易感性相关性的研究被引量：3: 4; 作者王坤高伟娜杨霄况修冬赵战勤薛云; 机构河南科技大学动物科技学院/洛阳市动物细菌性传染病防控技术重点实验室河南科技大学医学技术与工程学院分子诊断实验室; 出处《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期1232-1239,1252,共9页; 基金国家自然科学基金项目(32072899、31672530) 河南省科技公关项目(212102310741)。; 文摘为探究中国荷斯坦奶牛NOD1基因多态性与牛结核病(BTB)易感性的相关性,本研究以提取的BTB组(130份)与对照组(130份)共260份的牛全血样品基因组DNA为模板,利用PCR分段扩增NOD1基因13个外显子的编码区基因序列并测序,通过Chromas软件读取260份全血样品每段PCR产物的测序结果,以筛选单核苷酸多态性(SNP)位点。采用SPSS.16.0软件分别统计BTB组与对照组牛NOD1基因中SNP等位基因与基因型出现频率的差异。采用卡方检验,计算各组牛中NOD1基因SNP等位基因、基因型出现频率差异的P值、OR值(风险比值)及95%CI值(95%可信区间),通过上述指标确定与BTB易感性相关的SNP位点。PCR及其产物测序结果显示:从260份牛全血样品中均扩增到NOD115个目的基因片段并全部测序。Chromas软件筛选结果显示,从中国荷斯坦奶牛NOD1基因的编码区共筛选出7个SNP位点,其等位基因分别为C/T、A/C、T/A、G/C、C/T、C/G和G/A。7个SNP位点共包含18种基因型,其中4个SNP位点均包含3种基因型,均包括2个纯合子基因型和1个杂合子基因型;3个SNP位点分别包含2种基因型,均包括1个纯合子基因型和1个杂合子基因型。SNP位点鉴定结果显示,rs42935035等位基因T(基因型TT)和rs466132550等位基因A(基因型GA)在BTB组与对照组牛中出现的频率存在显著差异(P<0.05),且其OR值、95%CI值均小于1,表明两者均是BTB易感性低风险位点;其余5个SNP位点的等位基因在BTB组与对照组牛中的出现频率均无显著差异(P>0.05),且95%CI值均包含小于1~大于1的范围,表明它们均不是BTB易感性相关的位点。利用RNAfold软件测定SNP位点rs42935035等位基因变为T和rs466132550等位基因变为A后mRNA二级结构的自由能(与参考NOD1基因相应SNP位点等位基因相比)后NOD1基因mRNA二级结构的自由能,结果显示两者较参考序列mRNA二级结构的自由能均有所升高,表明其稳定性降低。采用ExPasy软件分析结果显示,仅rs42935035能够引起NOD1相应氨基酸的改变,当其等位基因由C变为T时,对应编码的氨基酸由半胱氨酸(Cys)变为精氨酸(Arg),为错义突变;而rs466132550位点等位基因(由G变为A)的变化不能导致NOD1相应氨基酸的改变,为同义突变。采用SOPMA软件和AlphaFold 2软件的分析结果显示,当SNP位点rs42935035的等位基因由C变为T时,NOD1蛋白质的二级结构和三级结构均未发生改变。本研究从宿主分子遗传学的角度阐述了BTB的发病机制,并提供了一种区分低风险与高风险结核病牛的新方法。; 关键词牛结核病 NOD1基因 SNP 易感性; Keywords bovine tuberculosis NOD1 gene SNPs susceptibility; 分类号 S852.61 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	猪多杀性巴氏杆菌5个抗原蛋白的免疫保护效力比较研究	孙贺洁孙鑫妍申慧媛张俊峰关丽君董发明薛云赵战勤	《中国预防兽医学报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	多杀性巴氏杆菌毒素(PMT)保护性抗原片段的筛选及免疫效果的评估	庞碧寒姚文敬王怡涤关丽君薛云张俊峰赵战勤	《中国预防兽医学报》北大核心	2025	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	副猪格拉瑟菌两种重要抗原蛋白的串联表达及其免疫保护效力的研究	杨金钱董玉岗丁略烜史琳琪杨梦娟张俊峰关丽君司丽芳薛云赵战勤	《中国预防兽医学报》 CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
4	NOD1基因单核苷酸多态性与牛结核病易感性相关性的研究	王坤高伟娜杨霄况修冬赵战勤薛云	《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2023	3	在线阅读下载PDF 职称材料