貂源肺炎克雷伯菌的分离鉴定及胞外分泌蛋白的核酸酶活性分析 被引量：1

1

作者 贾艳艳 李琦 +5 位作者 王晓利 牛俊辉 毛静 廖成水 张昊恺 张明亮 《河南农业科学》 北大核心 2021年第3期142-147,共6页

为确定引起水貂肺炎的病原菌,对从临床死亡病例中分离到的1株疑似肺炎克雷伯菌进行鉴定,采用琼脂糖凝胶电泳法检测肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,并探究了温度、pH值、金属离子对核酸酶活性的影响。结果显示,通过病料涂片镜检及... 为确定引起水貂肺炎的病原菌,对从临床死亡病例中分离到的1株疑似肺炎克雷伯菌进行鉴定,采用琼脂糖凝胶电泳法检测肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,并探究了温度、pH值、金属离子对核酸酶活性的影响。结果显示,通过病料涂片镜检及PCR鉴定,分离株为1株肺炎克雷伯菌,该肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白表现出降解λDNA的核酸酶活性,最适温度为30~37℃,最适pH值为7.0,在高温和碱性条件的反应环境时核酸酶的活性较弱。一价金属离子(Na^(+)、K^(+))和部分二价金属离子(Ca^(2+)、Ba^(2+)、Ni^(2+)、Zn^(2+)和Cu^(2+))对肺炎克雷伯菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性无明显影响,而5.00~10.00 mmol/L的Co^(2+)和Fe^(3+)以及10.00 mmol/L的Mg^(2+)和Mn^(2+)可以促进胞外核酸酶切割λDNA的活性。综上,从临床水貂肺炎病例中分离到1株肺炎克雷伯菌,并证实该菌胞外分泌蛋白具有核酸酶活性。 展开更多

关键词 水貂 肺炎克雷伯菌 分离鉴定 胞外分泌蛋白 核酸酶

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巨噬细胞极化在微生物感染中的作用研究进展 被引量：1

2

作者 廖成水 毛福超 程相朝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期323-327,共5页

巨噬细胞(Macrophage)起源于骨髓中的前体细胞,分化成熟的巨噬细胞广泛分布于机体各个组织和器官中[1]。在特定因素作用下,机体内某些细胞可以直接分化成为巨噬细胞,不同细胞分化后的巨噬细胞可以分布于不同组织[2]。巨噬细胞是参与机... 巨噬细胞(Macrophage)起源于骨髓中的前体细胞,分化成熟的巨噬细胞广泛分布于机体各个组织和器官中[1]。在特定因素作用下,机体内某些细胞可以直接分化成为巨噬细胞,不同细胞分化后的巨噬细胞可以分布于不同组织[2]。巨噬细胞是参与机体固有免疫的一类重要免疫细胞,不但可以吞噬外来微生物,还能递呈抗原,通过合成分泌多种细胞因子发挥功效,在控制炎症变化的过程中起到主导作用。当外界病原体侵入机体引发感染时,机体的无菌环境被打破,巨噬细胞被激活后识别病原体和抗原递呈,吞噬杀灭病原体起到免疫保护作用。 展开更多

关键词 肝巨噬细胞 炎症反应 巨噬细胞极化 戈登氏链球菌 寄生虫感染 微生物感染

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鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因的序列特征及其蛋白核酸酶活性分析

3

作者 张梦珂 廖成水 +5 位作者 毛福超 王晓利 李银聚 吴庭才 张春杰 程相朝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期675-679,共5页

为研究鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因的序列特征,本研究应用PCR扩增得到鼠伤寒沙门菌SL1344株的5'-nucleotidase基因片段,利用在线网站和DNAMAN 6.0.3.48软件进行其核苷酸和氨基酸序列的同源性分析。然后将目的基因亚克隆至... 为研究鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因的序列特征,本研究应用PCR扩增得到鼠伤寒沙门菌SL1344株的5'-nucleotidase基因片段,利用在线网站和DNAMAN 6.0.3.48软件进行其核苷酸和氨基酸序列的同源性分析。然后将目的基因亚克隆至原核表达载体p ET32a构建重组表达质粒(pET32a-5'-nucleotidase),转入大肠杆菌Rosetta中经IPTG诱导表达,亲和层析法纯化后采用SDS-PAGE和western blot进行分析。采用酶切活性试验分析重组蛋白的核酸酶活性。结果显示,鼠伤寒沙门菌SL1344株5'-nucleotidase基因为1 482 bp,5'-nucleotidase核苷酸序列与其它22种微生物的5'-nucleotidase及其类似物的同源性较低,最高仅为52.8%。理论上蛋白的分子量为57.18 ku,编码523个氨基酸。SDS-PAGE和western blot结果显示5'-nucleotidase重组蛋白约72 ku,且以可溶性和包涵体两种形式表达。同时,酶切活性试验结果显示重组5'-nucleotidase蛋白具有降解DNA的能力。本实验克隆了鼠伤寒沙门菌5'-nucleotidase基因,并表达得到了具有核酸酶活性的重组蛋白,为进一步研究5'-nucleotidase基因在鼠伤寒沙门菌感染中的作用奠定基础。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 5'-nucleotidase基因 克隆 序列分析 原核表达

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鼠伤寒沙门菌SseK1蛋白的表达及其免疫生物学特性研究 被引量：5

4

作者 路霞 杨亚东 +2 位作者 郁川 杜付玉 张春杰(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期902-906,921,共6页

目的:研究鼠伤寒沙门菌SseK1蛋白免疫生物学特性及其作为潜在免疫抗原蛋白的可能性。方法:利用PCR方法从鼠伤寒沙门菌SL1344株克隆获得sseK1基因片段,测序分析正确后连接至原核表达载体pET-32a(+),并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态中诱导表... 目的:研究鼠伤寒沙门菌SseK1蛋白免疫生物学特性及其作为潜在免疫抗原蛋白的可能性。方法:利用PCR方法从鼠伤寒沙门菌SL1344株克隆获得sseK1基因片段,测序分析正确后连接至原核表达载体pET-32a(+),并在大肠杆菌BL21(DE3)感受态中诱导表达。Western blot进一步检测镍离子亲和层析法纯化的SseK1蛋白并进行免疫生物学特性分析。结果:PCR及测序结果表明BL21(pET-32a-SseK1)构建成功。经SDS-PAGE分析显示,表达的SseK1蛋白大小约为43 kD,在原核表达反应器中主要以可溶性形式存在于菌体裂解上清中;经Western blot分析显示,SseK1蛋白可被鼠伤寒沙门菌阳性多抗血清识别,具有良好的反应原性;用SseK1蛋白免疫6周龄BALB/c小鼠,二免后21 d间接ELISA检测的抗体效价高达1∶124000,具有良好的免疫原性。淋巴细胞增殖试验结果表明SseK1能够显著刺激小鼠T淋巴细胞增殖,激发机体细胞免疫应答,差异具有统计学意义(P<0.05)。小鼠攻毒及免疫保护试验表明,鼠伤寒沙门菌强毒株对二免14 d后的小鼠攻毒显示60%以上的免疫保护力。结论:本研究表达的SseK1蛋白具有良好的抗原性,为深入研究鼠伤寒沙门菌与机体在感染和免疫方面的相互作用奠定了一定的理论基础。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 SseK1 原核表达 免疫生物学特性

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金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性研究 被引量：1

5

作者 李琦 廖成水 +7 位作者 毛福超 王晓利 张梦珂 张晓洁 张春杰 李银聚 吴庭才 程相朝 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期175-181,共7页

为研究金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,本研究复苏培养金黄色葡萄球菌后取培养上清液,采用透析得到金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白,结果显示获得的该蛋白浓度为48.5μg/mL。采用琼脂糖凝胶电泳法、琼脂扩散法和琼脂培养法检测金... 为研究金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,本研究复苏培养金黄色葡萄球菌后取培养上清液,采用透析得到金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白,结果显示获得的该蛋白浓度为48.5μg/mL。采用琼脂糖凝胶电泳法、琼脂扩散法和琼脂培养法检测金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,利用琼脂糖凝胶电泳法探究温度、pH、金属离子对核酸酶活性的影响。结果显示,金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白表现出降解λDNA的核酸酶活性,且最适温度和pH值分别为50℃和9.0,在低温和酸性条件下核酸酶的活性较弱,但胞外核酸酶对70℃以上的耐受性较差。不同浓度的Ba^2+、Mg^2+和Zn^2+对胞外分泌蛋白的核酸酶活性无影响;低浓度(0.01 mmol/L^1 mmol/L)的Ca^2+、Ni^2+、Cu^2+和Mn^4+可以促进胞外核酸酶切割λDNA的活性;高浓度的Na^+、K^+和Fe^3+可以提高胞外核酸酶切割λDNA的活性;添加Co^2+(0.01 mmol/L^10 mmol/L)可以促进胞外分泌蛋白的核酸酶活性。本研究证实了金黄色葡萄球菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,为进一步研究胞外分泌蛋白在金黄色葡萄球菌和宿主互作中的确切作用奠定了基础。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 胞外蛋白 核酸酶 金属离子 活性

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甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的抗菌活性 被引量：3

6

作者 郭晋祥 吕会茹 +3 位作者 李姣锋 廖成水 张琳琳 牛俊辉 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2022年第3期1181-1188,共8页

【目的】研究甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的抗菌活性,为临床合理使用甘草查耳酮A抗感染治疗提供依据。【方法】采用微量肉汤稀释法和平板计数法测定甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,M... 【目的】研究甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的抗菌活性,为临床合理使用甘草查耳酮A抗感染治疗提供依据。【方法】采用微量肉汤稀释法和平板计数法测定甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌浓度(minimum bactericidal concentration,MBC);平板计数法测定1MIC、2MIC、4MIC和8MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌的杀菌效果;吸光光度法测定1/16MIC、1/8MIC、1/4MIC和1/2MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生长的影响;结晶紫染色法测定1/8MIC、1/4MIC、1/2MIC和1MIC的甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制效果以及1/4MIC、1/2MIC、1MIC和1MBC甘草查耳酮A对生物被膜的清除效果;建立小鼠皮肤刀伤模型和皮肤脓肿模型评价甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌感染小鼠的治疗效果。【结果】甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌临床分离菌株具有良好的抗菌活性,MIC和MBC分别为3.125和12.5μg/mL。时间-杀菌曲线结果显示,2MIC和1MIC组在6 h内铜绿假单胞菌数量逐渐减少,之后基本维持在1×10^(5) CFU/mL左右;8MIC和4MIC组铜绿假单胞菌的数量一直处于下降趋势,并且分别在14和16 h后均无菌落形成。1/16MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生长影响不明显,而1/8MIC、1/4MIC和1/2MIC甘草查耳酮A可抑制细菌生长。1MIC甘草查耳酮A对铜绿假单胞菌生物被膜形成的抑制率约为70%,1MBC甘草查耳酮A可清除约50%预形成的生物被膜。体内试验结果表明,甘草查耳酮A有助于铜绿假单胞菌感染小鼠刀伤的创口愈合,并减少皮肤脓肿。与对照组相比,甘草查耳酮A和氨苄西林组脓肿中的细菌数量均极显著减少(P<0.01)。【结论】甘草查耳酮A对貂源铜绿假单胞菌具有良好的体外和体内抗菌活性,可进一步用于临床治疗铜绿假单胞菌感染制剂的研发。 展开更多

关键词 甘草查耳酮A 铜绿假单胞菌 水貂 抗菌活性

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携带NDV HN 基因的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统构建及其生物学特性分析 被引量：2

7

作者 宋敏杰 周小双 +4 位作者 石胜丽 朱文文 田文静 程相朝 郁川 《河南农业科学》 北大核心 2021年第10期116-123,共8页

为构建能稳定携带新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶蛋白(Hemagglutinin‑neuraminidase protein,HN)基因的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统,从pMD18-T-HN中扩增出NDV HN基因,并将其克隆入载体pYA3493-sopENt100,... 为构建能稳定携带新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)血凝素-神经氨酸酶蛋白(Hemagglutinin‑neuraminidase protein,HN)基因的减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统,从pMD18-T-HN中扩增出NDV HN基因,并将其克隆入载体pYA3493-sopENt100,构建重组载体pYA3493-sopENt100-HN,然后将其电转化至减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344,并对其重组菌的生长特性、遗传稳定性、表达特性和毒力特性等进行分析。结果显示,携带NDV HN基因的重组减毒鼠伤寒沙门菌ΔcrpΔasd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN)构建成功;重组菌ΔcrpΔasd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN)的生长趋势与互补菌ΔcrpΔasd SL1344(pYA3493-sopENt100)和缺失菌ΔcrpΔasd SL1344相似,与亲本菌株SL1344有明显差异;重组菌能够稳定表达HN基因;减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统能够有效递呈HN基因,并诱导其在鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblast,CEF)内表达;重组菌的LD_(50)与互补菌和缺失菌没有明显差异,与亲本菌株SL1344差异较大。以上结果表明,成功构建了携带NDV HN基因的新型减毒鼠伤寒沙门菌Ⅲ型分泌系统ΔcrpΔasd SL1344(pYA3493-sopENt100-HN),能够有效递呈NDV HN基因并使其高效表达,且安全性高,遗传稳定。 展开更多

关键词 新城疫病毒 HN 基因 Ⅲ型分泌系统 减毒沙门菌 生物学特性

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鼠伤寒沙门菌sseK3基因缺失株的构建及其生物学特性研究

8

作者 杜付玉 廖成水(指导) +3 位作者 郁川 张春杰(指导) 程相朝 杨亚东 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第19期2375-2380,共6页

目的:检测sseK3基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供了新思路。方法:通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除sseK 3基因并成功构建缺失菌株的回复菌株,进而检测其生物... 目的:检测sseK3基因的缺失对鼠伤寒沙门菌生物学特性的影响,为探究该基因的功能及开发安全有效的鼠伤寒沙门菌活疫苗提供了新思路。方法:通过重组自杀性质粒介导,两步筛选法敲除sseK 3基因并成功构建缺失菌株的回复菌株,进而检测其生物学和免疫学特性。结果:PCR、双酶切及测序结果证实成功构建了sseK3缺失株及其回复菌株。生物学特性研究表明,sseK3缺失菌株和亲本株SL1344血清型均为1,4,5,12:i:1,2,生化特性和生长速度无明显差异,且sseK3缺失株能够稳定遗传;sseK3缺失株口服感染6周龄BALB/c小鼠的LD 50为2.96×10^8 CFU,与亲本菌株SL1344相比,sseK3缺失株的LD 50值升高约1 035倍,毒力显著下降;免疫保护效力实验显示:sseK3缺失株免疫后第17天保护率为66.7%;在免疫小鼠后的第14天血清IgG达到最高水平;回复菌株与亲本亲株生物学特性无显著性差异,基本回复到野生型水平。结论:成功构建了鼠伤寒沙门菌sseK3基因缺失株,可稳定遗传,毒力显著降低,具有良好的免疫原性,推测sseK3对鼠伤寒沙门菌的毒力具有重要的调节作用,为探究该基因的功能及将其开发为更加安全有效的沙门菌弱毒疫苗候选菌株奠定了基础。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌SL1344 sseK 3基因 缺失株 回复菌株 生物学特性

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鸡EED基因的原核表达与生物信息学分析

9

作者 郁川 宋敏杰 +5 位作者 石胜丽 朱文文 张贺伟 田文静 王聪慧 程相朝 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第10期3545-3553,共9页

本研究旨在获得鸡胚胎外胚层发育(embryonic ectoderm development,EED)原核表达蛋白,并利用生物信息学方法探索其潜在生物学功能。以提取的3日龄雏鸡脾脏总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增鸡EED基因,将其克隆至pET-32a(+)载体,构建重组... 本研究旨在获得鸡胚胎外胚层发育(embryonic ectoderm development,EED)原核表达蛋白,并利用生物信息学方法探索其潜在生物学功能。以提取的3日龄雏鸡脾脏总RNA为模板,利用RT-PCR技术扩增鸡EED基因,将其克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达载体pET-32a-EED,转化至大肠杆菌Rosetta感受态细胞中进行IPTG诱导表达;Western blotting检测经镍离子亲和层析法纯化的鸡EED蛋白,并利用在线软件对其进行生物信息学分析。结果显示,鸡EED基因序列全长1341 bp,与参考序列(GenBank登录号:NM_001031376.1)相似性为99.85%;当诱导温度为28℃,加入终浓度为1 mmol/L的IPTG诱导剂诱导表达7 h时,可在重组菌裂解上清中纯化得到分子质量约70 ku的鸡EED融合蛋白。在线软件分析表明,鸡EED蛋白相对分子质量为50377.92,理论等电点(pI)为6.54,为亲水蛋白,无跨膜结构域和信号肽序列,该蛋白序列与人多疏蛋白EED三级结构模板序列(6c23.1)相似,同样具有肿瘤靶点WD40结构域。结果表明,本研究成功获得大肠杆菌表达的鸡EED可溶性蛋白,且该蛋白具有重要的功能元件,可为深入探索鸡EED蛋白的生物学功能与调控机理提供材料。 展开更多

关键词 鸡 EED基因 表达 纯化 生物信息学

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肠炎沙门菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性测定

10

作者 田文静 廖成水 +2 位作者 李琦 毛福超 程相朝 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第8期5-10,共6页

为研究肠炎沙门菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,采用琼脂糖凝胶电泳法、琼脂扩散法和琼脂培养法检测肠炎沙门菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,同时利用琼脂糖凝胶电泳法探究温度、pH、金属离子对核酸酶活性的影响。结果显示,肠炎沙门菌胞外分... 为研究肠炎沙门菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,采用琼脂糖凝胶电泳法、琼脂扩散法和琼脂培养法检测肠炎沙门菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,同时利用琼脂糖凝胶电泳法探究温度、pH、金属离子对核酸酶活性的影响。结果显示,肠炎沙门菌胞外分泌蛋白表现出降解λDNA的核酸酶活性,且最适温度和pH分别是37℃和9.0,在低温和酸性条件的反应环境时核酸酶的活性较弱,胞外核酸酶对60℃以上的耐受性较差。不同浓度的Na^(+)和K^(+)对胞外分泌蛋白的核酸酶活性没有影响;当Ca^(2+)浓度超过0.01 mmol/L对胞外核酸酶活性有抑制作用;Zn^(2+)、Mn^(2+)和Ni^(2+)在低浓度时(0.01~1 mmol/L)以及Mg^(2+)、Cu^(2+)、Ba^(2+)、Fe^(3+)和Co^(2+)在高浓度时(5~10 mmol/L)均能促进胞外分泌蛋白的核酸酶活性。本试验证实了肠炎沙门菌胞外分泌蛋白的核酸酶活性,为今后进一步探索胞外分泌蛋白在肠炎沙门菌和宿主互作中的作用提供了科学依据。 展开更多

关键词 胞外蛋白 肠炎沙门菌 核酸酶活性

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鼠伤寒沙门菌重组鞭毛蛋白对巨噬细胞细胞因子与氧化/抗氧化水平的影响 被引量：3

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作者 王晓利 廖成水 +3 位作者 路霞 崔淹鸽 王安琪 王臣 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期528-533,共6页

为研究重组鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白对巨噬细胞细胞因子与氧化/抗氧化水平的影响,本研究将50 ng/mL、250 ng/mL和500 ng/mL重组鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC分别与巨噬细胞J774.1共孵育,分别采用CCK-8法、LDH试剂盒、ELISA试剂盒和荧光显微镜... 为研究重组鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白对巨噬细胞细胞因子与氧化/抗氧化水平的影响,本研究将50 ng/mL、250 ng/mL和500 ng/mL重组鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC分别与巨噬细胞J774.1共孵育,分别采用CCK-8法、LDH试剂盒、ELISA试剂盒和荧光显微镜检测巨噬细胞活力、巨噬细胞上清乳酸脱氢酶(LDH)、巨噬细胞分泌细胞因子和巨噬细胞胞内活性氧(ROS)水平;采用商品化试剂盒检测巨噬细胞产生的诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、超氧化物歧化酶(SOD)和总抗氧化能力(T-AOC)等氧化/抗氧化水平。结果显示,50 ng/mL重组鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白对巨噬细胞活力无影响,而巨噬细胞活力在该蛋白浓度为250 ng/mL(12 h)和500 ng/mL(9 h)时明显下降。该重组蛋白对巨噬细胞上清LDH水平的影响随其浓度的增加呈上升趋势,同时该重组蛋白的浓度对巨噬细胞分泌IL-1β、IL-4、IL-6、IL-10、IL-12、TNF-α和TGF-β的影响也呈正相关趋势。荧光显微镜检测显示,该重组蛋白刺激巨噬细胞胞内ROS水平明显增强。氧化/抗氧化水平方面,该重组蛋白导致巨噬细胞iNOS、MDA和NO氧化水平升高,而GSH-PX、SOD和T-AOC抗氧化水平降低。综上所述,鼠伤寒沙门菌重组鞭毛蛋白能增强巨噬细胞分泌细胞因子,也可引起巨噬细胞氧化/抗氧化平衡失调,为进一步探究鼠伤寒沙门菌与宿主的互作提供参考。 展开更多

关键词 鼠伤寒沙门菌 鞭毛蛋白 巨噬细胞 细胞因子 氧化/抗氧化

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旋毛虫5′-nucleotidase基因特征与克隆表达 被引量：1

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作者 廖成水 王晓利 +7 位作者 杜付玉 郁川 余祖华 张春杰 李银聚 吴庭才 刘明远 程相朝 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期971-976,共6页

目的研究旋毛虫5′-nucleotidase基因的序列结构特征及其蛋白克隆表达。方法从旋毛虫获得5′-nucleotidase基因的序列,利用生物信息学方法进行系统性分析,并进行原核表达。结果旋毛虫5′-nucleotidase基因大小为1 653bp,编码550个氨基酸... 目的研究旋毛虫5′-nucleotidase基因的序列结构特征及其蛋白克隆表达。方法从旋毛虫获得5′-nucleotidase基因的序列,利用生物信息学方法进行系统性分析,并进行原核表达。结果旋毛虫5′-nucleotidase基因大小为1 653bp,编码550个氨基酸,119个氨基酸残基组成,理论相对分子质量(Mr)为62kD,分子式为C_(2800)H_(4358)N_(742)O_(803)S_(23),等电点为6.13,属于稳定存在的亲水蛋白质。该蛋白含有21个氨基酸组成的信号肽,同时具有跨膜区域,此外还含有3个N-糖基化位点、2个O-糖基化位点、20个磷酸化位点、28个B细胞线性结合位点和13个T细胞结合位点。二级结构中,α-螺旋占43.27%(238个),伸展链占22.73%(125个),β-折叠占7.82%(43个),无规则卷曲占26.18%(144个)。SDS-PAGE显示,5′-nucleotidase基因在原核表达系统中呈可溶性形式表达,重组蛋白大小约为74kD。结论成功克隆了旋毛虫5′-nucleotidase基因,对其进行序列分析和原核表达,为进一步探究5′-nucleotidase蛋白在旋毛虫感染过程中的作用奠定基础。 展开更多

关键词 旋毛虫 5′-nucleotidase 克隆 原核表达 生物信息学

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Ⅲ型分泌系统在沙门菌囊泡形成中的作用研究进展 被引量：1

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作者 王晓利 杜付玉 廖成水 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第1期106-109,共4页

沙门菌是一种兼性胞内革兰氏阴性病原菌,是世界上公认的主要食源性病原菌[1]。全球沙门菌感染人数呈逐年上升趋势,在一些不发达地区的感染最为严重,且可发生于各个年龄段人群。沙门菌感染机体后通过网状内皮系统传播,定居于巨噬细胞、... 沙门菌是一种兼性胞内革兰氏阴性病原菌,是世界上公认的主要食源性病原菌[1]。全球沙门菌感染人数呈逐年上升趋势,在一些不发达地区的感染最为严重,且可发生于各个年龄段人群。沙门菌感染机体后通过网状内皮系统传播,定居于巨噬细胞、树突状细胞、多形核白细胞和肝细胞以及其他非专业性吞噬细胞。沙门菌的毒力对于吞噬细胞内细菌的存活至关重要。 展开更多

关键词 多形核白细胞 沙门菌 Ⅲ型分泌系统 网状内皮系统 吞噬细胞 食源性病原菌 树突状细胞 不发达地区

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旋毛虫plancitoxin-1-like基因的序列分析与编码蛋白结构预测

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作者 廖成水 王晓利 +7 位作者 田文静 杨亚东 张梦珂 王安琪 张春杰 刘明远 Boireau Pascal 程相朝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期218-222,共5页

基因组预测旋毛虫拥有125种庞大的DNase II家族蛋白,但只有plancitoxin-1唯一在C端含有一个保守的DNase II活性位点(HKD基序)。为研究旋毛虫plancitoxin-1基因的序列结构特征,以旋毛虫总RNA为模板进行RT-PCR,获得plancitoxin-1基因的序... 基因组预测旋毛虫拥有125种庞大的DNase II家族蛋白,但只有plancitoxin-1唯一在C端含有一个保守的DNase II活性位点(HKD基序)。为研究旋毛虫plancitoxin-1基因的序列结构特征,以旋毛虫总RNA为模板进行RT-PCR,获得plancitoxin-1基因的序列,并利用生物信息学方法进行系统性分析。结果显示,扩增得到的核苷酸序列比GenBank中相关序列短210bp,编码294个氨基酸,由20种氨基酸组成,重新命名为plancitoxin-1-like,且氨基酸序列中在N端和C端都具有HKD基序。蛋白质理论相对分子质量为33.19ku,等电点为9.17,是稳定存在的亲水性蛋白。Plancitoxin-1-like的氨基酸序列与其他物种DNase II的相似性为35%左右。Plancitoxin-1-like含有4个N-糖基化位点、3个O-糖基化位点、31个磷酸化位点、17个B细胞线性结合位点和9个T细胞结合位点以及3个二硫键。二级结构中,α-螺旋占14.29%(42个),延伸链占28.23%(83个),无规卷曲占55.10%(162个)。本研究成功克隆旋毛虫plancitoxin-1-like基因,对其序列结构进行分析,为进一步研究庞大的DNase II家族蛋白在旋毛虫发育和感染中的作用奠定基础。 展开更多

关键词 旋毛虫 DNASE II 克隆 生物信息学

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甘草多糖对小鼠及鼠伤寒沙门菌生长性能的影响 被引量：7

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作者 付道斌 廖成水 +4 位作者 路霞 王晓利 辛玲 肖宜航 宋香朋 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第6期139-143,共5页

为探讨甘草多糖对小鼠及鼠伤寒沙门菌生长性能的影响,利用小鼠灌胃给予低剂量(1 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)和高剂量(100 mg/kg)甘草多糖,测定小鼠生长性能(体质量和脏器指数)变化;在培养基中分别加入终质量浓度为10、20、50、100、200μ... 为探讨甘草多糖对小鼠及鼠伤寒沙门菌生长性能的影响,利用小鼠灌胃给予低剂量(1 mg/kg)、中剂量(10 mg/kg)和高剂量(100 mg/kg)甘草多糖,测定小鼠生长性能(体质量和脏器指数)变化;在培养基中分别加入终质量浓度为10、20、50、100、200μg/mL的甘草多糖,检测其对鼠伤寒沙门菌体外生长的影响;Bliss法计算鼠伤寒沙门菌对小鼠半数致死量(LD_(50));检测甘草多糖对小鼠感染100倍LD_(50)鼠伤寒沙门菌的保护力。给予甘草多糖后所有剂量组小鼠一般临床状况均无明显变化,体质量和脏器(肝脏、肺脏、心脏、肾脏和胸腺)指数稍有增高。而第5天和第7天时甘草多糖可显著增加小鼠的脾脏指数(P<0.05)。甘草多糖可促进鼠伤寒沙门菌的生长速率和生物被膜的形成,但差异不显著。鼠伤寒沙门菌腹腔感染小鼠的LD_(50)为2.09×10~5cfu/mL。100倍LD_(50)的鼠伤寒沙门菌感染小鼠后,随着甘草多糖质量浓度增加小鼠死亡时间延迟。结果表明,甘草多糖对鼠伤寒沙门菌体外生长具有有限的促进作用,对小鼠生长性能无显著性影响,但可以提高小鼠抵抗鼠伤寒沙门菌感染的能力。 展开更多

关键词 甘草多糖 小鼠 生长性能 鼠伤寒沙门菌 生物被膜

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食源性病原菌激发固有免疫细胞胞外诱捕网的研究进展 被引量：2

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作者 钱满 廖成水 张春杰 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第7期1800-1808,共9页

固有免疫细胞在外源物质刺激后向细胞胞外环境释放由染色质DNA和多种胞内颗粒蛋白组成的纤维样网状物质,称为胞外诱捕网(extracellular traps,ETs)。ETs是一种新型的宿主防御机制,能够捕获或杀灭病原菌,有效控制病原菌的扩散,从而使机... 固有免疫细胞在外源物质刺激后向细胞胞外环境释放由染色质DNA和多种胞内颗粒蛋白组成的纤维样网状物质,称为胞外诱捕网(extracellular traps,ETs)。ETs是一种新型的宿主防御机制,能够捕获或杀灭病原菌,有效控制病原菌的扩散,从而使机体免受感染。大肠杆菌、沙门菌等食源性人兽共患病病原体引发的疾病是全球广泛关注的公共卫生问题。本文就食源性病原菌激发固有免疫细胞ETs的形成、ETs的生物学活性以及细菌部分蛋白对ETs形成的影响等研究进展进行综述,以期为食源性疾病的防控提供相关理论参考。 展开更多

关键词 食源性病原菌 胞外诱捕网 固有免疫细胞 防御机制

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巨噬细胞极化形成的影响因素研究进展 被引量：7

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作者 程相朝 毛福超 《动物医学进展》 北大核心 2019年第6期72-77,共6页

巨噬细胞是生物体中宿主防御的重要调节者。为了满足机体不同的需要,巨噬细胞可以在不同刺激因子作用下转化为具有不同功能表型的状态,这个过程称为极化。不同影响因素下的静息巨噬细胞(M0)可极化形成不同的表型,促炎表型(M1)和抗炎表型... 巨噬细胞是生物体中宿主防御的重要调节者。为了满足机体不同的需要,巨噬细胞可以在不同刺激因子作用下转化为具有不同功能表型的状态,这个过程称为极化。不同影响因素下的静息巨噬细胞(M0)可极化形成不同的表型,促炎表型(M1)和抗炎表型(M2)。极化后的巨噬细胞也可通过逆转它们的表型进一步重新编程。巨噬细胞极化和重编程在维持免疫系统的稳定状态中发挥重要作用,并参与许多疾病的发生发展过程。论文对巨噬细胞极化形成的影响因素进行了论述提供参考。 展开更多

关键词 巨噬细胞 极化 信号通路

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