多杀性巴氏杆菌的摄铁机制研究进展

1

作者 沈香香 关丽君 +3 位作者 张俊峰 薛云 司丽芳 赵战勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4852-4862,共11页

多杀性巴氏杆菌可广泛感染多种动物,引起出血性败血症或传染性肺炎。铁是多杀性巴氏杆菌感染宿主过程中生长、定植和增殖必不可少的营养物质,竞争宿主铁离子是该病原体感染致病的关键环节。近年来,多杀性巴氏杆菌的摄铁系统及其发生与... 多杀性巴氏杆菌可广泛感染多种动物,引起出血性败血症或传染性肺炎。铁是多杀性巴氏杆菌感染宿主过程中生长、定植和增殖必不可少的营养物质,竞争宿主铁离子是该病原体感染致病的关键环节。近年来,多杀性巴氏杆菌的摄铁系统及其发生与调控机制方面的研究取得了一系列重要进展。本文系统阐述了多杀性巴氏杆菌的转铁蛋白受体摄铁机制、血红素受体摄铁机制、铁载体摄铁机制及其摄铁系统的表达与调控机制,以期为多杀性巴氏杆菌摄铁系统的分子致病机理研究提供系统的理论知识,为多杀性巴氏杆菌分子靶标药物及亚单位疫苗的研发提供新思路。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 摄铁机制 铁载体 ExbB-ExbD-TonB FUR

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副猪格拉瑟菌的荚膜分型方法及原理研究进展

2

作者 朱亚新 关丽君 +2 位作者 张俊峰 薛云 赵战勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期5412-5422,共11页

副猪格拉瑟菌(GPS)是猪的重要病原菌之一,自1910年被确认为猪格拉瑟病的病原以来,血清型鉴定是GPS研究领域长期以来的“卡脖子”环节。1992年,基于GPS热稳定抗原的凝胶免疫扩散试验(GID)分型方法首次将GPS分为1-15型,但有约25%的菌株不... 副猪格拉瑟菌(GPS)是猪的重要病原菌之一,自1910年被确认为猪格拉瑟病的病原以来,血清型鉴定是GPS研究领域长期以来的“卡脖子”环节。1992年,基于GPS热稳定抗原的凝胶免疫扩散试验(GID)分型方法首次将GPS分为1-15型,但有约25%的菌株不可分型,当时对于其分型抗原的成分也不明确。2003年,基于GPS的“盐水提取物”抗原建立了GPS的间接血凝试验(IHA)分型方法,其敏感性和分型率均高于GID,但仍有约15%的菌株不可分型。IHA和GID方法的分型结果基本一致,因此能够确定两者的分型抗原是基于相同的GPS表面多糖成分,但仍不能确定是荚膜多糖,或是LPS,甚或是其他多糖物质。2013年,1-15型GPS荚膜多糖的合成基因簇得到成功解析,证实其血清型抗原形成的本质是荚膜多糖。2015年,Howell等基于GPS荚膜的特异性靶基因设计引物,建立了GPS的PCR分型方法(H-PCR),但不能对血清5型和12型进行鉴别;2017年,Jia等基于GPS荚膜的特异性靶基因也建立了一套PCR分型方法(J-PCR),能对血清5型和12型进行了鉴别。两种PCR分型方法配合使用可对几乎所有GPS菌株分型,并从分子生物学基础上验证了其与GID和IHA方法的一致性,最终确认三种分型方法的抗原基础均为GPS荚膜。PCR分型方法具有操作简单、速度快、成本低等优点,成功解决了GID和IHA血清分型方法中的诸多问题,得到了广泛应用。本文系统回顾了GPS GID、IHA和PCR分型方法的建立与应用历史,及其相同抗原基础的发现历程,以期为GPS三种分型方法的免疫学物质基础及原理提供系统的理论知识,为副猪格拉瑟菌病防控技术的研发提供新思路。 展开更多

关键词 副猪格拉瑟菌 荚膜 血清型 凝胶免疫扩散试验(GID) 间接血凝试验(IHA) PCR

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羊源致病性弗氏柠檬酸杆菌的分离与鉴定 被引量：13

3

作者 刘会胜 赵战勤 +4 位作者 薛云 薛巧 汪洋 常世恺 刘媛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第9期1593-1599,共7页

旨在确定导致河南省某养殖场小尾寒羊细菌性感染死亡的病原。从3只不同时间发病死亡的小尾寒羊各组织脏器的病料中分离到3株细菌——LK-1、LK-2和LK-3株。经微生物自动鉴定仪鉴定和细菌16SrRNA基因序列分析,确定该致病菌为弗氏柠檬酸杆... 旨在确定导致河南省某养殖场小尾寒羊细菌性感染死亡的病原。从3只不同时间发病死亡的小尾寒羊各组织脏器的病料中分离到3株细菌——LK-1、LK-2和LK-3株。经微生物自动鉴定仪鉴定和细菌16SrRNA基因序列分析,确定该致病菌为弗氏柠檬酸杆菌。小鼠毒力试验结果表明:3株细菌的LD50分别为5.0×107、6.0×107和5.8×107 CFU。回归试验结果表明,经人工感染健康小尾寒羊,可复制与自然发病羊相似的症状和病理变化,且从其各组织脏器内再次分离到相同的病原菌。药敏试验结果表明,3株弗氏柠檬酸杆菌对大部分药物的抗药谱相同(17/21),且均对头孢噻肟等11种药物高度敏感。这些研究结果表明弗氏柠檬酸杆菌是该小尾寒羊致死性病例的病原菌。本文在国内外首次报道了弗氏柠檬酸杆菌对小尾寒羊具有致病性。 展开更多

关键词 羊 弗氏柠檬酸杆菌 分离 药敏试验 回归试验

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多杀性巴氏杆菌的分型及其灭活疫苗研究进展 被引量：19

4

作者 赵战勤 乔鹏芸 +2 位作者 刘倩玉 薛云 丁轲 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期600-604,共5页

巴氏杆菌病（Pasteurellosis）是由多杀性巴氏杆菌（Pas—teurellamultocida，Pm）引起的多种畜禽、野生动物及人类的一类传染病的总称。动物急性病例以败血症和炎性出血为主要特征。Pm由路易斯-巴斯德于1880年首次从禽霍乱病例中分离... 巴氏杆菌病（Pasteurellosis）是由多杀性巴氏杆菌（Pas—teurellamultocida，Pm）引起的多种畜禽、野生动物及人类的一类传染病的总称。动物急性病例以败血症和炎性出血为主要特征。Pm由路易斯-巴斯德于1880年首次从禽霍乱病例中分离获得并以其名字命名。该菌广泛分布于世界各地。在同种或不同种动物问可以相互传染，也可以感染人，大多因动物咬伤所致。蝉和蚤被认为是自然传递的媒介昆虫。过去曾按感染动物的名称， 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 灭活疫苗 野生动物 分型 感染动物 巴氏杆菌病 媒介昆虫 传染病

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猪源A型和D型多杀性巴氏杆菌强毒菌株的生物学特性比较研究 被引量：10

5

作者 赵战勤 刘倩玉 +4 位作者 席晓剑 王乐 邓雯 薛云 张春杰 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期366-370,共5页

为分析猪源A型和D型多杀性巴氏杆菌(PM)的生物学特性差异,本研究对5株A型和5株D型猪源PM强毒菌株的生化特征、生长特性、毒力特性、16SrRNA基因分子特征等生物学特性进行了比较研究。在TSB液体培养基中的生长曲线测定结果表明这些菌株... 为分析猪源A型和D型多杀性巴氏杆菌(PM)的生物学特性差异,本研究对5株A型和5株D型猪源PM强毒菌株的生化特征、生长特性、毒力特性、16SrRNA基因分子特征等生物学特性进行了比较研究。在TSB液体培养基中的生长曲线测定结果表明这些菌株均能够高密度发酵培养;21种生化试验的反应结果表明,10株PM的生化反应均不一致,即使同一血清型的不同菌株之间也具有较大差别。对小鼠毒力试验结果表明,A型PM菌株的毒力(LD_(50)为4 cfu^26 cfu)显著强于D型菌株(LD50为2.1×10~4 cfu^5.2×10~5 cfu)。16SrRNA基因的序列分析结果表明,16SrRNA基因非常保守,这10株PM之间的同源性均在99.8%以上;在1 505 bp序列中,仅存在第57 bp(T/C)、239 bp(T/C)和376 bp(G/C)处3个多态性位点,并且不具有型特异性。本研究为猪源PM灭活疫苗菌株的筛选等提供了实验依据。 展开更多

关键词 猪 多杀性巴氏杆菌 血清型 生物学特性

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羊源致病性柠檬酸杆菌4种佐剂灭活疫苗的免疫效果比较 被引量：5

6

作者 薛云 李静 +6 位作者 王臣 司丽芳 王玉琴 刘志军 李健 廖成水 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期726-731,共6页

为筛选羊源弗氏柠檬酸杆菌灭活菌体疫苗的合适佐剂,本研究以灭活羊源弗氏柠檬酸杆菌LK-1株为抗原分别制备其矿物油疫苗、铝胶疫苗、GEL疫苗和ISA201疫苗。将4种不同佐剂疫苗分别背部皮下免疫小鼠(0.2 mL/只)和颈部肌肉免疫羊(2 mL/只)... 为筛选羊源弗氏柠檬酸杆菌灭活菌体疫苗的合适佐剂,本研究以灭活羊源弗氏柠檬酸杆菌LK-1株为抗原分别制备其矿物油疫苗、铝胶疫苗、GEL疫苗和ISA201疫苗。将4种不同佐剂疫苗分别背部皮下免疫小鼠(0.2 mL/只)和颈部肌肉免疫羊(2 mL/只)进行疫苗安全性试验。用4种不同佐剂疫苗分别背部皮下免疫小鼠(0.2 mL/只)两次后使用3 LD50的LK-1株进行腹腔攻击;颈部肌肉免疫羊(2 mL/只)两次后使用2个致死剂量的LK-1株进行耳静脉攻击,比较4种不同佐剂疫苗对小鼠和羊的保护率并对小鼠和羊免疫血清进行微量凝集抗体检测。疫苗安全性试验结果显示,矿物油疫苗导致接种动物出现严重的精神沉郁、食欲减退、以及接种部位发生肿胀坏死和疫苗残留等不良反应;其它3种佐剂疫苗不良反应较轻微。动物免疫试验结果显示,4种佐剂疫苗对小鼠的攻毒保护率分别为85%、50%、80%、100%,对羊的保护率分别为100%、75%、0、100%。4种佐剂疫苗综合比较,ISA201疫苗使接种动物产生最轻微的副反应,而且能产生较高的抗体水平和最强的保护力。本研究为进一步开发羊柠檬酸杆菌病的灭活疫苗奠定基础。 展开更多

关键词 羊 柠檬酸杆菌 疫苗 佐剂

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副猪嗜血杆菌小鼠毒力和仔猪毒力的相关性分析 被引量：6

7

作者 李飞跃 陈坤鹏 +4 位作者 丁文文 薛云 王臣 司丽芳 赵战勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1408-1418,共11页

旨在对我国最为流行的血清4、5、12和13型副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)(共36株)进行BALB/c小鼠和仔猪毒力试验的比较研究。小鼠毒力试验结果表明,4种血清型菌株的LD50分别介于9.80×10^7~4.60×10^9、2.10×10^8... 旨在对我国最为流行的血清4、5、12和13型副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)(共36株)进行BALB/c小鼠和仔猪毒力试验的比较研究。小鼠毒力试验结果表明,4种血清型菌株的LD50分别介于9.80×10^7~4.60×10^9、2.10×10^8~8.85×10^9、4.81×10^7~7.01×10^9和1.75×10^8~8.45×10^8 CFU;整体毒力表现强弱依次是13、4、12、5型,但仅在5型与13型菌株之间毒力具有显著差异(P<0.05)。仔猪毒力试验结果表明,同一血清型中不同菌株的毒力具有明显差异,均存在强毒和弱毒菌株;整体毒力表现强弱依次是5、13、4、12型;但5型与4型(P=0.039)和12型(P=0.033)之间具有显著差异(P<0.05),与13型差异不显著(P=0.241)。综合对比分析HPS的小鼠和仔猪毒力试验结果,可以得出3个结论:1)4种国内流行性血清型菌株的整体毒力由强到弱依次是5、13、4和12型;2)但同一血清型中均存在强毒和弱毒菌株,HPS的血清型与其毒力之间不具有相关性;3)HPS虽能致死BALB/c小鼠,但其毒力结果与仔猪毒力试验结果并不一致,表明其作为替代模型具有一定的缺陷。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 血清型 毒力 小鼠 仔猪 相关性

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副猪嗜血杆菌主要免疫原性抗原的克隆表达及其反应原性的对比分析 被引量：5

8

作者 戚百川 杨金钱 +7 位作者 丁文文 马艳杰 李健 陈坤鹏 薛云 司丽芳 刘志军 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期880-884,889,共6页

为制备和筛选副猪嗜血杆菌(HPS)具有免疫保护效力的抗原因子重组蛋白,本研究根据GenBank中已登录HPS基因序列,设计引物,分别克隆其OapA、Hps0675(包括全片段和2个子片段)、Hsp60、OmpP2、HbpB、GAPDH、Hps06257和D15抗原因子的10个基因... 为制备和筛选副猪嗜血杆菌(HPS)具有免疫保护效力的抗原因子重组蛋白,本研究根据GenBank中已登录HPS基因序列,设计引物,分别克隆其OapA、Hps0675(包括全片段和2个子片段)、Hsp60、OmpP2、HbpB、GAPDH、Hps06257和D15抗原因子的10个基因片段,分别将其克隆入pET28a质粒构建重组表达质粒并转化大肠杆菌BL21经IPTG诱导表达。SDS-PAGE检测结果显示,除OapA外,其他9个重组蛋白均正确表达,其表达量占菌体总蛋白的10.20%~31.90%。除rGAPDH以可溶性和包涵体两种形式表达外,其他8个重组蛋白均以包涵体形式存在。Western blot鉴定结果显示,rHbpB、rD15、rHps06257反应原性最强,rGAPDH、rHsp60、rOmpP2反应原性中等,r Hps0675-1、r Hps0675-2、rHps0675反应原性最弱。以His标签蛋白纯化试剂盒纯化后,9个重组蛋白的纯度在90.72%~98.72%,浓度在1.082 mg/mL~7.936 mg/mL。本研究实现了HPS 9个重要抗原因子的克隆表达和纯化,首次在相同条件下对其反应原性进行了对比分析,为其亚单位疫苗候选保护性抗原蛋白的筛选奠定基础。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 免疫原性蛋白 表达 纯化 Western blot

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猪丹毒丝菌灭活疫苗免疫佐剂的筛选 被引量：5

9

作者 裴世璇 宋吉健 +4 位作者 韩忆侬 薛云 王臣 司丽芳 赵战勤 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期1083-1090,共8页

旨在筛选适宜于猪丹毒丝菌灭活疫苗的佐剂。以分离鉴定出的猪丹毒丝菌1a型HG-1株灭活菌体为抗原分别配制矿物油佐剂疫苗(简称矿物油疫苗)、氢氧化铝胶佐剂疫苗(简称铝胶疫苗)、ISA201双相油乳佐剂疫苗(简称ISA201疫苗)、GEL02水溶性聚... 旨在筛选适宜于猪丹毒丝菌灭活疫苗的佐剂。以分离鉴定出的猪丹毒丝菌1a型HG-1株灭活菌体为抗原分别配制矿物油佐剂疫苗(简称矿物油疫苗)、氢氧化铝胶佐剂疫苗(简称铝胶疫苗)、ISA201双相油乳佐剂疫苗(简称ISA201疫苗)、GEL02水溶性聚合物佐剂疫苗(简称GEL疫苗)、IMS1313水溶性纳米佐剂疫苗(简称IMS1313疫苗)共5种佐剂的灭活疫苗。小鼠免疫保护试验结果表明,二免14 d后使用约为4 LD50的HG-1株对小鼠进行腹腔攻毒,矿物油疫苗和GEL疫苗的保护率分别为100%(7/7)和71%(5/7),其他三种佐剂疫苗的保护率均为14%(1/7)。本研究进一步选择铝胶疫苗和GEL疫苗进行猪体对比试验;仔猪安全性试验结果表明,两种佐剂疫苗的副反应均较小;免疫保护试验结果表明,两次免疫后使用约为16 LD100的HG-1株对免疫仔猪进行耳缘静脉攻毒,两种佐剂疫苗的保护率分别为60%(3/5)和100%(5/5)。本研究最终选择GEL佐剂作为开发猪丹毒灭活疫苗的最适佐剂。 展开更多

关键词 猪 猪丹毒丝菌 疫苗 佐剂

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猪多杀性巴氏杆菌4个重组蛋白的小鼠免疫保护效力比较 被引量：6

10

作者 孙鑫妍 王怡涤 +4 位作者 关丽君 史琳琪 薛云 司丽芳 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1172-1178,共7页

为筛选多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据GenBank中登录的Pm基因序列,设计相应引物,经PCR扩增Pm torA、prX、gpmA和thiB基因片段,分别克隆于原核表达载体pET28a中,构建各重组表达质粒,经... 为筛选多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究根据GenBank中登录的Pm基因序列,设计相应引物,经PCR扩增Pm torA、prX、gpmA和thiB基因片段,分别克隆于原核表达载体pET28a中,构建各重组表达质粒,经测序鉴定后转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导表达,采用His6标签蛋白纯化试剂盒纯化获得4个重组蛋白rTorA、rPrX、rPGAM和rThiB,同时利用透析膜制备rTorA的粗提蛋白(rTorA-C)。SDS-PAGE检测结果显示,分别在91 ku、25 ku、32 ku及41 ku处出现目的条带,表明4个重组蛋白均正确表达,其中rTorA主要以包涵体形式表达,少量表达在上清中;rPrX、rPGAM和rThiB主要以可溶性形式表达;各重组蛋白的表达量占菌体总蛋白的7.44%~61.46%,各重组蛋白纯化后的纯度为76%~98.15%,浓度为0.15 mg/mL~4.56 mg/mL。Western blot检测结果显示,分别在上述4个位置处出现特异性条带。将4个纯化蛋白和rTorA-C分别与MontanideTM ISA 201 VG佐剂混合制成亚单位疫苗,免疫小鼠后分别于首免前、首免后14 d、二免后14 d(首免后28 d)采血,分离血清,通过间接ELISA方法检测各组小鼠抗体水平;二免后15 d采用4倍半数致死剂量(LD50)A型Pm强毒A5株菌液进行腹腔注射攻毒,观察并记录小鼠死亡及发病情况至21 d。ELISA检测结果显示,各重组蛋白免疫组小鼠的IgG抗体水平均随免疫次数的增加而升高,与PBS对照组相比差异均极显著(P<0.01)。攻毒试验结果显示,PBS对照组小鼠攻毒后24 h内开始发病,10 d内全部死亡(10/10);发病小鼠主要症状为精神萎靡、食欲减退或废绝,被毛凌乱,对外界刺激无明显反应等;对死亡小鼠剖检,各组织器官主要表现为出血为特征的败血症的剖检变化。各重组蛋白免疫组小鼠中,也出现了不同程度的发病或死亡。rTorA、rTorA-C、rPGAM、rThiB和rPrX免疫组小鼠的免疫保护率分别为60%、40%、100%、20%和0。本研究首次在相同条件下对Pm 4个重要重组抗原蛋白的免疫保护效力进行了对比分析,筛选出的rPGAM和rTorA具有作为亚单位疫苗靶抗原的潜力,为Pm亚单位疫苗候选保护性抗原蛋白的筛选奠定基础。 展开更多

关键词 多杀性巴氏杆菌 重组表达 小鼠 免疫保护效力 亚单位疫苗

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猪链球菌三价灭活疫苗免疫佐剂的筛选 被引量：2

11

作者 赵旭东 陈坤鹏 +4 位作者 孔美萍 薛云 王臣 董发明 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期178-185,共8页

为筛选适用于新型猪源链球菌(SS)灭活疫苗的佐剂,本研究以SS1 Z1株、SS2 Z2株和SS7 Z7株为抗原,分别配制ISA201 VG双相油乳佐剂疫苗(简称ISA201疫苗)、GEL 02 PR水溶性聚合物佐剂疫苗(简称GEL疫苗)、IMS1313N VG水溶性纳米佐剂疫苗(简称... 为筛选适用于新型猪源链球菌(SS)灭活疫苗的佐剂,本研究以SS1 Z1株、SS2 Z2株和SS7 Z7株为抗原,分别配制ISA201 VG双相油乳佐剂疫苗(简称ISA201疫苗)、GEL 02 PR水溶性聚合物佐剂疫苗(简称GEL疫苗)、IMS1313N VG水溶性纳米佐剂疫苗(简称IMS1313疫苗)、矿物油佐剂疫苗(简称油疫苗)、氢氧化铝胶佐剂疫苗(简称铝胶疫苗)共5种佐剂的三价灭活疫苗。豚鼠和仔猪安全性试验结果表明:油佐剂疫苗的副反应较大,其余疫苗的副反应较小。仔猪免疫保护试验结果显示:二免14 d后利用约为1 LD100的SS2 Z2株对仔猪经耳缘静脉攻毒,ISA201疫苗、GEL疫苗对仔猪的保护率均为100%,油疫苗和铝胶疫苗保护率分别为60%、40%,IMS1313疫苗组的保护率为0;利用1 LD100 SS1 Z1株攻毒后,ISA201疫苗、GEL疫苗、油疫苗、铝胶疫苗和IMS1313疫苗对仔猪的保护率分别为100%、80%、80%、60%和0。综上结果表明,ISA201疫苗免疫仔猪能产生最高的抗体水平,同时提供了最高的保护效力,且副反应较小,确定ISA201为开发链球菌灭活苗的首选佐剂。本研究为SS三价灭活疫苗的研发奠定了基础。 展开更多

关键词 猪链球菌 疫苗 佐剂

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我国传统猪丹毒疫苗及流行株灭活疫苗的免疫保护效力评估 被引量：3

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作者 詹鹏飞 裴世璇 +5 位作者 宋吉健 韩忆侬 关丽君 薛云 司丽芳 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期716-721,共6页

为评估我国传统猪丹毒灭活疫苗(C43-5株,2型)及其衍生的猪丹毒活疫苗(GC42株和G4T10株)对当前流行株HG-1、Er-2、Er-3和Er-4(1a型)的免疫保护效力,本研究将2种猪丹毒活疫苗(GC42株和G4T10株)分别经皮下注射免疫小鼠,14 d后采用ELISA方... 为评估我国传统猪丹毒灭活疫苗(C43-5株,2型)及其衍生的猪丹毒活疫苗(GC42株和G4T10株)对当前流行株HG-1、Er-2、Er-3和Er-4(1a型)的免疫保护效力,本研究将2种猪丹毒活疫苗(GC42株和G4T10株)分别经皮下注射免疫小鼠,14 d后采用ELISA方法检测小鼠血清中的抗体水平,免疫后15 d,以10 LD50/只分别经腹腔注射攻击传统疫苗检验株C43-6、C43-8,当前流行株HG-1、Er-2、Er-3和Er-4菌液并观察、记录各组小鼠的临床症状和死亡情况,共观察14 d。死亡小鼠立即剖检,采集心、肺、肝等组织进行细菌的分离与鉴定。结果显示,2种活疫苗均能刺激小鼠产生较高的抗体水平,且极显著高于PBS对照组(P<0.01),但两种活疫苗之间无显著差异(P>0.05);攻毒结果显示,分别对应GC42株和G4T10株的6个攻毒组小鼠均无任何临床症状,且均获得100%的保护率;对照组小鼠攻毒后24 h出现相应发病症状,5 d内全部死亡;死亡小鼠各组织器官主要出现败血症的剖检病变;从死亡小鼠的心血、肺、肝等脏器均能分离到猪丹毒丝菌。将我国传统猪丹毒灭活疫苗株C43-5及其检验株C43-6和C43-8,以及当前流行株HG-1、Er-2、Er-3和Er-4分别制备灭活疫苗免疫小鼠2次(间隔21 d),于首免后20 d和35 d分别采用ELISA方法检测抗体水平;小鼠首免后35 d,按上述方法攻毒,并检测相应指标。结果显示,上述7种灭活疫苗免疫小鼠20 d后,均诱导小鼠产生了极显著高于对照组的Ig G抗体水平(P<0.01),但7种灭活疫苗之间均无显著差异(P>0.05);首免后35 d与首免后20 d相比,7种灭活疫苗免疫组小鼠的Ig G抗体水平虽有所升高,但均无显著差异(P>0.05)。攻毒结果显示,C43-5、C43-6、C43-8和HG-1株灭活疫苗免疫组小鼠均获得80%(4/5)及以上的保护率,Er-2、Er-3和Er-4株的灭活疫苗仅能对小鼠提供20%~60%(1/5~3/5)的保护率,6个菌株攻击的对照组小鼠均于攻毒后24 h开始发病,5 d内全部死亡。本研究首次将我国3种传统猪丹毒疫苗对当前流行菌株的免疫保护效力进行综合评估,结果表明我国传统猪丹毒活疫苗(GC42株和G4T10株)和灭活疫苗(C43-5株)针对当前流行的猪丹毒丝菌仍具有良好的免疫保护效力。为我国当前猪丹毒疫苗的防控应用提供了借鉴。 展开更多

关键词 猪丹毒丝菌 传统疫苗 小鼠 保护效力

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副猪嗜血杆菌5个重组蛋白的小鼠免疫保护效力比较 被引量：4

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作者 丁略烜 戚百川 +5 位作者 史琳琪 杨金钱 詹鹏飞 关丽君 薛云 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1074-1079,共6页

为筛选副猪嗜血杆菌(GPS)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究利用大肠杆菌BL21系统表达了GPS重要抗原r Hps06257、r D15和r Hps0675,及Hps0675 N端和C端的重组蛋白r Hps0675-N和r Hps0675-C,并通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达情况。利... 为筛选副猪嗜血杆菌(GPS)亚单位疫苗的优势保护性抗原,本研究利用大肠杆菌BL21系统表达了GPS重要抗原r Hps06257、r D15和r Hps0675,及Hps0675 N端和C端的重组蛋白r Hps0675-N和r Hps0675-C,并通过SDS-PAGE检测各重组蛋白的表达情况。利用His标签蛋白纯化试剂盒纯化5个重组蛋白后,分别与Montanide^(TM)ISA 201 VG佐剂混合制成亚单位疫苗,对小鼠进行2次免疫,并分别在小鼠首免前、一免后21 d和二免后14 d(即首免后35 d)经尾根静脉采血分离血清,利用间接ELISA方法检测各组小鼠的抗体水平。二免后14 d分别利用5倍半数致死剂量(LD_(50))的5型GPS H5L3株和12型GPS H12L3株菌液对小鼠进行腹腔攻毒,攻毒后14 d内观察并记录各组小鼠的临床症状、发病及死亡情况,统计各组小鼠的免疫攻毒保护率。SDS-PAGE检测结果显示,5个重组蛋白均以包涵体形式表达,其表达量占菌体总蛋白的27.46%~42.37%。ELISA检测结果显示,各蛋白疫苗免疫组小鼠的Ig G抗体水平随免疫次数的增加而升高,与PBS对照组相比差异均极显著(P<0.01)。攻毒试验结果显示,分别利用5 LD_(50)GPS 5型H5L3株菌液和12型H12L3株菌液攻毒后,PBS和BL21菌体蛋白对照组小鼠攻毒后24 h内开始发病,3 d内全部死亡;发病小鼠主要症状为精神沉郁,食欲减退或废绝,被毛紊乱,对外界刺激无明显反应等;对死亡小鼠剖检可见其各组织器官的多发性浆膜炎和败血症性病理学变化。各蛋白疫苗免疫组小鼠中也出现了不同程度的发病和死亡情况,其中利用5 LD_(50)H5L3株攻毒后,r Hps06257、r D15、r Hps0675、r Hps0675-N和r Hps0675-C对免疫组小鼠的保护率分别为80%、0、0、40%和80%;利用5 LD_(50)H12L3株攻毒后,上述各组蛋白疫苗对小鼠的保护率分别为80%、20%、20%、10%和60%。本研究首次证实重组蛋白r Hps06257和r Hps0675-C能够诱导小鼠产生较强的免疫保护效力,具有作为亚单位疫苗靶抗原的潜力,为GPS亚单位疫苗候选保护性抗原的筛选奠定基础。 展开更多

关键词 副猪嗜血杆菌 抗原 小鼠 保护效力 亚单位疫苗

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猪源产新德里金属β-内酰胺酶-1大肠埃希菌的感染特性研究 被引量：1

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作者 常世恺 赵战勤 +3 位作者 薛云 龙塔 丁轲 程相朝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第1期149-156,共8页

对猪源产NDM-1大肠埃希菌E120413株在猪群中的交互传播、致病力和体内分布特性等进行初步探讨。仔猪粪便样本的细菌学检测结果表明,E120413株细菌能从接种仔猪快速传染给未接种的同居组仔猪;接种组仔猪粪便样本检测到E120413株细菌的持... 对猪源产NDM-1大肠埃希菌E120413株在猪群中的交互传播、致病力和体内分布特性等进行初步探讨。仔猪粪便样本的细菌学检测结果表明,E120413株细菌能从接种仔猪快速传染给未接种的同居组仔猪;接种组仔猪粪便样本检测到E120413株细菌的持续时间最短为7周,最长超过11周;同居组的持续时间介于7-9周。仔猪血液样本的检测结果表明,E120413株细菌能快速突破仔猪的免疫防御进入血液循环形成菌血症;接种组和同居组仔猪菌血症的持续时间为第2—10天和第4—10天,并在第7天达到最高活菌浓度3.7×10^5和4.3×10^5CFU·mL^-1。仔猪组织样本的检测结果表明,从感染仔猪的脑、心、肝、脾、肺、肾、胃、肠系膜淋巴结和十二指肠中均能分离到该菌,且能在十二指肠长期存在（≥11周）。但仔猪的临床症状与病理学检查结果表明,该菌仅能引起感染猪的体温升高和轻微的局部炎症反应,并不能导致猪的明显临床症状和严重病理变化。产NDM-1大肠埃希菌E120413株对猪具有较强的传播扩散能力和持续感染能力。 展开更多

关键词 猪 大肠埃希菌 NDM-1 感染

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红斑丹毒丝菌SpaA的分段克隆及表达

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作者 马艳杰 戚百川 +5 位作者 裴世璇 薛云 司丽芳 王臣 刘志军 赵战勤 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期16-21,共6页

为筛选表达量高且免疫原性强的红斑丹毒丝菌表面保护性抗原A(SpaA)的抗原片段,本研究根据该菌SpaA的结构和功能区将其设计为6个子片段和1个全长片段,采用PCR技术从红斑丹毒丝菌HG-1菌株中扩增出SpaA的7个抗原基因片段,利用原核表达系统... 为筛选表达量高且免疫原性强的红斑丹毒丝菌表面保护性抗原A(SpaA)的抗原片段,本研究根据该菌SpaA的结构和功能区将其设计为6个子片段和1个全长片段,采用PCR技术从红斑丹毒丝菌HG-1菌株中扩增出SpaA的7个抗原基因片段,利用原核表达系统克隆并表达后采用SDS-PAGE和western blot检测表达及纯化情况。结果显示,获得7个重组蛋白,分别命名为rSpaA1~rSpaA7,其表达量占菌体总蛋白的17.44%~25.38%,其中rSpaA1、rSpaA2、r SpaA5以包涵体形式表达,r SpaA3以可溶性蛋白形式表达,而rSpaA4、rSpaA6、rSpaA7两种表达形式同时存在。纯化后,rSpaA1~rSpaA7的纯度介于84.22%~93.72%,浓度为0.89 mg/mL~3.25 mg/mL。Western blot结果显示,7个重组蛋白均显示出良好的反应原性,其中rSpaA1、rSpaA3、rSpaA4的反应原性更强。本研究实现了对红斑丹毒丝菌SpaA的分段及其全长的表达和纯化,为SpaA保护性抗原片段的筛选及猪丹毒亚单位疫苗的研发奠定基础。 展开更多

关键词 红斑丹毒丝菌 SpaA蛋白 表达 纯化 western blot

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