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河南商品蛋鸡群马立克氏病病毒流行株的分离与鉴定 被引量：2
1
作者 余祖华 丁轲 +2 位作者 滕蔓 宿靖伟 罗俊 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第1期67-70,6,共4页
2011年～2012年，河南省多个地区养殖场鸡群爆发了马立克氏病，应用外周血淋巴细胞培养分离技术对流行毒株分离并进行了PCR鉴定，最终分离到17个马立克氏病毒毒株，这些病毒株感染鸡胚成纤维细胞3～5d后均能形成典型的病毒蚀斑，从感染... 2011年～2012年，河南省多个地区养殖场鸡群爆发了马立克氏病，应用外周血淋巴细胞培养分离技术对流行毒株分离并进行了PCR鉴定，最终分离到17个马立克氏病毒毒株，这些病毒株感染鸡胚成纤维细胞3～5d后均能形成典型的病毒蚀斑，从感染细胞总DNA中均能扩增出132bp重复序列的特异性条带，且各毒株间132bp重复序列扩增产物的拷贝数存在明显差异，分离鉴定表明：河南鸡群中可能存在不同毒力马立克氏病毒野毒株的共流行。 展开更多
关键词 马立克氏病病毒 分离 鉴定 132 bp重复序列
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洛阳地区鸡肉中单增李斯特菌毒力基因的分布研究 被引量：4
2
作者 贾艳艳 何雷 +4 位作者 郁川 李静 程相朝 张春杰 李银聚 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第1期135-138,共4页
为分析鸡肉中单增李斯特菌毒力基因的分布特征,从洛阳地区市售鸡肉中分离18株单增李斯特菌,血清凝集试验确定其血清型,然后采用PCR方法对inl A、inl B、virR、dlt A、dlt B、dlt C、dlt D及mpr F等8个毒力基因进行检测。结果显示,18株... 为分析鸡肉中单增李斯特菌毒力基因的分布特征,从洛阳地区市售鸡肉中分离18株单增李斯特菌,血清凝集试验确定其血清型,然后采用PCR方法对inl A、inl B、virR、dlt A、dlt B、dlt C、dlt D及mpr F等8个毒力基因进行检测。结果显示,18株分离株血清型均为1/2型,且有9株具有全部毒力基因,其中inl B、dlt A、dlt B基因全部呈阳性,inl A、virR、dlt C、dlt D、mpr F存在缺失现象,其检测率分别为88.9%(16/18)、94.4%(17/18)、83.3%(15/18)、88.9%(16/18)、83.3%(15/18)。毒力基因缺失与血清型相关性分析结果显示,不同血清型缺失基因呈多样性。表明这8个毒力基因在市售鸡肉的单增李斯特菌中普遍分布。 展开更多
关键词 单增李斯特菌 毒力基因 鸡肉 分布
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绿原酸对FAdV-4的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响 被引量：8
3
作者 崔淹鸽 李京帅 +1 位作者 李银聚 张春杰 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第12期4718-4724,共7页
试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4... 试验旨在研究绿原酸对禽腺病毒4型(FAdV-4)的抑制作用及其对鸡胚肝脏炎性因子和信号分子表达的影响。将9日龄SPF鸡胚随机分为7组:对照组、5个不同浓度的绿原酸组和FAdV-4感染组。绿原酸组经尿囊腔注射不同浓度的绿原酸,48 h后与FAdV-4感染组均经尿囊腔接种0.2 mL ELD_(50)为1.36×10^(7)拷贝的FAdV-4病毒,对照组注射等体积的生理盐水。用MTT法检测绿原酸的安全浓度(IC_(50)),计算每枚鸡胚接种绿原酸的含量;接种病毒后72 h后,剖检并无菌收集鸡胚肝脏进行病理观察,实时荧光定量PCR法检测病毒载量,ELISA法测定肝脏细胞因子白介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及信号分子磷脂酰肌醇-3-激酶(PI3K)、核转录因子-κB(NF-κB)和NF-κBp65含量。MTT法测定结果表明,绿原酸对鸡胚成纤维细胞的IC_(50)为28.6μg/mL,每枚鸡胚接种0.2 mL的绿原酸含量分别为858、429、214.5(≈215)、107.25(≈107)和53.125(≈53)μg。FAdV-4病毒接种72 h后,FAdV-4感染组鸡胚肝脏边缘钝圆、肿大,变脆,呈土黄色或黄色,甚至出现坏死;随着绿原酸浓度增加,绿原酸组鸡胚肝脏肿胀渐不明显,坏死灶和出血瘀点减少;肝脏内病毒明显增殖,载量为7.8 log_(2)拷贝/mg,107μg绿原酸即可显著抑制FAdV-4在鸡胚肝脏中的增殖(P<0.05)。炎性细胞因子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加鸡胚肝脏中IL-1β、IL-6和TNF-α的含量(P<0.01);53μg绿原酸组IL-1β和TNF-α含量极显著增加(P<0.01),107μg绿原酸组IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,107μg绿原酸组IL-1β和TNF-α的含量均极显著降低(P<0.01),215和429μg绿原酸组IL-6的含量显著降低(P<0.05),858μg绿原酸组IL-6的含量极显著降低(P<0.01)。细胞信号分子检测结果表明,与对照组相比,FAdV-4可极显著增加PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量(P<0.01);53μg绿原酸组PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均显著增加(P<0.05)。与FAdV-4感染组相比,53μg绿原酸PI3K和NF-κBp65的含量均显著降低(P<0.05);215μg绿原酸组NF-κB的含量显著降低(P<0.05),NF-κBp65的含量极显著降低(P<0.01);当绿原酸达429μg时,PI3K、NF-κB和NF-κBp65的含量均极显著降低(P<0.01)。本试验结果表明,绿原酸能够抑制FAdV-4的增殖,且剂量依赖性地抑制炎性因子和信号分子的表达,说明绿原酸可用于鸡抗病毒和炎性相关疾病的防控。 展开更多
关键词 绿原酸 禽腺病毒血清4型(FAdV-4) 炎性因子 信号分子 鸡胚
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豫西地区市售鸭翅中单增李斯特菌毒力基因的检测 被引量：2
4
作者 贾艳艳 何雷 +4 位作者 郁川 余祖华 程相朝 张春杰 李银聚 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期283-287,共5页
为分析来自豫西地区市售鸭翅中单增李斯特菌毒力基因的分布变化,本研究以分离自豫西地区市售鸭翅的11株单增李斯特菌分离株为研究对象,利用PCR方法进行8种毒力基因的检测(inlA、inlB、virR、mprF、dltA、dltB、dltC、dltD基因)。结果显... 为分析来自豫西地区市售鸭翅中单增李斯特菌毒力基因的分布变化,本研究以分离自豫西地区市售鸭翅的11株单增李斯特菌分离株为研究对象,利用PCR方法进行8种毒力基因的检测(inlA、inlB、virR、mprF、dltA、dltB、dltC、dltD基因)。结果显示有3株出现了基因缺失,dltA基因检出率为90.9%(10/11),dltC、mprF基因检出率均为81.8%(9/11),其他基因全部呈阳性。这些毒力基因在单增李斯特菌分离株中分布广泛,对豫西地区市售鸭翅具有潜在的威胁,应引起食品监管部门的高度关注。 展开更多
关键词 食源性单增李斯特菌 毒力基因 分布 豫西地区 鸭翅
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胞外捕获器:固有免疫细胞第三种防御机制的研究进展 被引量：3
5
作者 廖成水 Boireau Pascal +1 位作者 刘明远 程相朝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1768-1774,共7页
胞外捕获器(extracellular traps,ETs)的释放是近来新发现的一种由DNA和颗粒蛋白组成的固有免疫防御机制。作为继吞噬作用、自噬之后的第三种杀伤机制,大量的研究已经证实ETs在体内外可捕获和杀伤绝大多数的细菌、病毒、真菌和寄生虫,... 胞外捕获器(extracellular traps,ETs)的释放是近来新发现的一种由DNA和颗粒蛋白组成的固有免疫防御机制。作为继吞噬作用、自噬之后的第三种杀伤机制,大量的研究已经证实ETs在体内外可捕获和杀伤绝大多数的细菌、病毒、真菌和寄生虫,作者对ETs的概念、形成的分子机制以及ETs在宿主防御中的作用进行了简要的介绍,这将对固有免疫细胞防御策略的新认识具有重要的意义。 展开更多
关键词 固有免疫细胞 胞外捕获器 外捕作用 杀菌活性
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酵母诱导表达鸡IFN-α抗IBDV效果及其对信号分子PI3K和NF-κB的影响 被引量：1
6
作者 韩海锋 李银聚 +5 位作者 程相朝 张春杰 余祖华 杨惠 杨荣恩 付威 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第8期2164-2169,共6页
试验旨在研究酵母表达鸡IFN-α抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)的效果及对其淋巴细胞信号分子PI3K和NF-κB p65的影响。将40只10日龄非免疫雏鸡随机分为IFN-α组和空白对照组,持续注射给药3d后,于第3次给药后第1天开始每天心脏采血,持续3d,... 试验旨在研究酵母表达鸡IFN-α抗传染性法氏囊病病毒(IBDV)的效果及对其淋巴细胞信号分子PI3K和NF-κB p65的影响。将40只10日龄非免疫雏鸡随机分为IFN-α组和空白对照组,持续注射给药3d后,于第3次给药后第1天开始每天心脏采血,持续3d,并于最后一次采血后对雏鸡进行攻毒,在攻毒后开始每天心脏采血,连续3d。通过MTT法检测淋巴增殖活性情况,ELISA测定不同时间段淋巴细胞中PI3K的水平、细胞中总NF-κB p65、细胞核中NF-κB p65蛋白表达含量及IBDV抗原量。结果显示,与对照组相比,攻毒前,IFN-α对淋巴增殖活性、细胞中PI3K和NF-κB p65的表达具有极显著地促进作用(P<0.01);与攻毒前相比,攻毒后第1和2天IFN-α组淋巴增殖活性、细胞中PI3K和NF-κB p65的表达极显著增加(P<0.01),IFN-α对IBDV-Ag具有极显著地抑制效果(P<0.01)。这些结果表明,IFN-α可通过增加PI3K激活NF-κB信号通路以增强机体免疫反应,并对IBDVAg有显著的抑制作用,本试验为IFN-α免疫增强和抗病毒作用的研究提供科学依据。 展开更多
关键词 IFN-Α PI3K 核转录因子 NF-ΚB P65 传染性法氏囊病
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低氧诱导因子-1α在旋毛虫感染过程中的动态变化
7
作者 廖成水 王臣 +8 位作者 王晓利 王安琪 余祖华 郁川 汪洋 李世杰 陈贯超 程相朝 刘明远 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期664-666,共3页
为了解旋毛虫感染过程中血清和膈肌低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的动态变化,本研究将旋毛虫ISS534株经口服感染90只大鼠,并于感染后不同时间各取6只大鼠收集血清和膈肌,采用荧光定量PCR和ELISA方法检测各时间点膈肌HIF-1α mRNA水平和血清... 为了解旋毛虫感染过程中血清和膈肌低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的动态变化,本研究将旋毛虫ISS534株经口服感染90只大鼠,并于感染后不同时间各取6只大鼠收集血清和膈肌,采用荧光定量PCR和ELISA方法检测各时间点膈肌HIF-1α mRNA水平和血清HIF-1α水平。结果显示,旋毛虫发育成成虫至产生新生幼虫期间血清和膈肌HIF-1α含量无明显变化,产生新生幼虫后血清和膈肌HIF-1α水平逐渐升高,而且分别在6d和7 d时HIF-1α含量与感染前相比差异显著(p<0.05),随后呈逐渐上升趋势。血清HIF-1α含量直至9 d达到峰值并保持平稳状态,从14 d开始逐渐下降;而膈肌HIF-1α含量于9 d达到峰值后开始逐渐下降至肌幼虫形成,感染30 d血清和膈肌HIF-1α水平下降至感染前状态。结果表明,HIF-1α水平在旋毛虫感染过程中呈倒V型走势,HIF-1α可能是参与调控旋毛虫感染的重要因子。 展开更多
关键词 旋毛虫 低氧诱导因子-1Α 血清 膈肌 动态变化
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鸡传染性法氏囊病病毒超强毒洛阳分离株VPP2基因的原核表达及鉴定 被引量：2
8
作者 杨阳 刘莎莎 +4 位作者 贾艳艳 胡茂志 李银聚 王伟杰 张震 《中国家禽》 北大核心 2016年第17期17-20,共4页
根据GenBank公布的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列,设计合成1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vv IBDV)洛阳分离株LY1的VP2基因并进行克隆,构建重组质粒p MD18-T-VP2,然后连接至原核表达载体p ET32a... 根据GenBank公布的鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)VP2基因序列,设计合成1对特异性引物,应用RT-PCR技术扩增鸡传染性法氏囊病病毒超强毒(vv IBDV)洛阳分离株LY1的VP2基因并进行克隆,构建重组质粒p MD18-T-VP2,然后连接至原核表达载体p ET32a,将阳性质粒转化至感受态细胞Rosetta中进行诱导表达。SDS-PAGE结果显示VP2基因在大肠杆菌Rosetta细胞中实现融合表达,蛋白大小约66 ku,且主要存在于细胞上清中,Western blot试验证实表达的VP2蛋白具有较好的反应原性。研究结果可为IBDV的诊断抗原及基因工程疫苗研究奠定基础。 展开更多
关键词 鸡传染性法氏囊病病毒超强毒 VP2基因 原核表达
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副猪嗜血杆菌国内流行血清型对小鼠外周血淋巴细胞·细胞因子及免疫球蛋白水平的影响
9
作者 陈贯超 廖成水 《安徽农业科学》 CAS 2016年第16期164-166,共3页
[目的]比较副猪嗜血杆菌国内流行血清型菌株感染后小鼠外周血淋巴细胞、血清细胞因子及免疫球蛋白水平的变化情况。[方法]将72只小鼠分为4组,分别腹腔注射副猪嗜血杆菌血清型4、5和12菌株,检测3 d、7 d和15 d各组外周血T、B淋巴细胞及... [目的]比较副猪嗜血杆菌国内流行血清型菌株感染后小鼠外周血淋巴细胞、血清细胞因子及免疫球蛋白水平的变化情况。[方法]将72只小鼠分为4组,分别腹腔注射副猪嗜血杆菌血清型4、5和12菌株,检测3 d、7 d和15 d各组外周血T、B淋巴细胞及血清细胞因子和Ig水平。[结果]副猪嗜血杆菌感染小鼠3 d,T、B淋巴细胞数量明显高于对照组,而随着感染时间的延长而逐渐下降。Ig G、IFN-γ和IL-10水平随感染时间的延长而逐渐增高,而Ig A、Ig M和Ig E水平逐渐降低。感染3 d,Th1/Th2比值稍有下降,而Th1/Th2比值随着感染时间的延长而逐渐升高,明显高于对照组。不同血清型感染在各时间点之间T、B淋巴细胞、Ig A、Ig M、Ig E、IFN-γ、IL-10和Th1/Th2差异均无统计学意义,而血清型4和5感染组小鼠血清Ig G均明显高于血清型12组。[结论]除Ig G以外,副猪嗜血杆菌国内流行血清型4、5和12菌株感染小鼠后外周血淋巴细胞、血清细胞因子及Ig水平无明显差异。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 血清型 淋巴细胞 细胞因子 免疫球蛋白
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TAT-Apoptin基因原核表达载体的构建及其表达鉴定
10
作者 陈桂华 李翔辉 郁川 《现代农业研究》 2019年第11期96-98,共3页
为得到TAT-Apoptin融合蛋白,以pMD-19T-Apoptin为模板PCR扩增出TATApoptin基因,构建重组载体pET-32a-TAT-Apoptin,并对TAT-Apoptin蛋白进行表达。PCR和测序表明,成功构建重组载体pET-32a-TAT-Apoptin,进一步对其进行蛋白表达,发现该蛋... 为得到TAT-Apoptin融合蛋白,以pMD-19T-Apoptin为模板PCR扩增出TATApoptin基因,构建重组载体pET-32a-TAT-Apoptin,并对TAT-Apoptin蛋白进行表达。PCR和测序表明,成功构建重组载体pET-32a-TAT-Apoptin,进一步对其进行蛋白表达,发现该蛋白能与Apoptin多抗发生特异性结合。以上结果证明,TAT-Apoptin基因原核表达载体构建成功,并能在Rosetta中进行分泌性表达。 展开更多
关键词 TAT-Apoptin融合蛋白 重组载体pET-32a-TAT-Apoptin 分泌性表达
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