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某铬酸盐生产工作场所主要职业病危害因素检测
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作者 程广超 王思华 孟成名 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2009年第5期1115-1116,共2页
关键词 铬酸盐 超限倍数 职业病危害因素
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人谷胱甘肽硫转移酶Pi基因的克隆、原核表达和蛋白纯化
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作者 王智慧 吴逸明 吴拥军 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2006年第6期1114-1117,共4页
目的克隆人谷胱甘肽硫转移酶Pi(GSTPi)基因并在大肠杆菌中实现高效表达及蛋白纯化。方法用RT-PCR技术从人胎盘组织获取人GSTPi基因的cDNA序列,将其扩增产物GSTPi基因插入到原核克隆载体pMD18-T中,用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法... 目的克隆人谷胱甘肽硫转移酶Pi(GSTPi)基因并在大肠杆菌中实现高效表达及蛋白纯化。方法用RT-PCR技术从人胎盘组织获取人GSTPi基因的cDNA序列,将其扩增产物GSTPi基因插入到原核克隆载体pMD18-T中,用PCR扩增、酶切分析及序列测定等方法对重组质粒pMD18-T-GSTPi进行鉴定,将测序正确的GSTPi基因连接到表达载体pMAL-c2x多克隆位点中,构建重组表达质粒pMAL-c2x-GSTPi,鉴定后,用异丙基-b-d-硫代半乳糖苷进行诱导表达,表达产物用麦芽糖亲和层析法纯化。结果人GSTPi克隆到原核表达载体pMAL-c2x中,测序结果同GenBank序列比较,同源性为100%。通过诱导,在85000的表达量约达到35%,麦芽糖亲和层析法纯化蛋白,纯度达到85%。结论实现了解毒酶基因GSTPi的克隆和高效表达菌株的构建,并获取了高纯度的GSTPi蛋白。 展开更多
关键词 人谷胱甘肽硫转移酶Pi RT-PCR 基因克隆 序列测定 表达 纯化
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