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中性粒细胞在不同品系正常小鼠角膜的分布及其与角膜创伤修复的关系
被引量：
3
1
作者
张红敏
刘素素
+5 位作者
陈国铭
柳慧
窦新岩
王素娟
李金
王丽娅
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期780-785,共6页
背景 以往人们通常认为角膜无血管、无髓系来源的免疫细胞存在.C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠是眼科免疫学基础研究的常用模型,这些小鼠的角膜是否存在天然免疫的关键细胞——中性粒细胞是值得关注的问题. 目的 研究实验室常用的C57BL...
背景 以往人们通常认为角膜无血管、无髓系来源的免疫细胞存在.C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠是眼科免疫学基础研究的常用模型,这些小鼠的角膜是否存在天然免疫的关键细胞——中性粒细胞是值得关注的问题. 目的 研究实验室常用的C57BL/6J鼠、BALB/c鼠和裸鼠正常角膜的中性粒细胞分布特征及其与角膜创伤修复的关系,为相关研究提供依据. 方法 选取角膜正常、10 ～ 12周龄的SPF级雄性C57BL/6J鼠、BALB/c鼠和BALB/c背景的裸鼠各16只,取3种小鼠各8只制备成中央区相连的4瓣角膜铺片,并以角膜周边血管缘为界向内以3个同心圆分区.分别用Gr-1-FITC抗体和CD31/PECAM-1-PE抗体对角膜中性粒细胞和血管进行免疫荧光染色,用免疫荧光显微镜和AR软件测量角膜血管面积并计数中性粒细胞.选取3种小鼠各8只制备角膜创伤模型,用无菌手术刀片以角膜中央为中心做十字划痕,深度至角膜前弹力层.创伤后即刻（0 h）、12h、24 h用2 g/L荧光素钠点眼,荧光显微镜下以AR软件计算不同时间点的创伤面积.于划痕后24 h取小鼠角膜制备铺片,用Gr-1-FITC抗体和CD31/PECAM-1-PE抗体行荧光染色,比较3种创伤小鼠角膜的血管分布、中性粒细胞的数量和分布情况.实验动物的饲养与使用均遵循美国视觉与眼科研究协会制定的科研动物使用规范. 结果 正常C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠角膜中性粒细胞总数分别为（1 733±237）、（353±96）和（1 601 ±223）个/角膜,BALB/c小鼠角膜中性粒细胞数明显少于C57BL/6J小鼠和裸鼠,差异均有统计学意义（P＜0.01）.3种正常小鼠角膜缘均可见血管分布,BALB/c小鼠角膜缘血管面积明显小于C57BL/6J小鼠和裸鼠,C57BL/6J小鼠角膜缘血管面积明显大于裸鼠,差异均有统计学意义（P＜0.01）.3种正常小鼠中性粒细胞的数量与血管面积均呈明显正相关（C57BL/6J：r=0.936,P=0.001;BALB/c：r =0.939,P=0.001;裸鼠：r=0.935,P=0.001）.角膜划痕后24 h,C57BL/6J小鼠和裸鼠的创伤面积均明显大于BALB/c小鼠（均P=0.000）,且以裸鼠的创伤面积最大.角膜划痕后C57BL/6J模型鼠、BALB/c模型鼠和模型裸鼠的角膜上中性粒细胞数目分别为（3 340±417）、（1 235±337）和（4 680±450）个/角膜,BALB/c模型鼠角膜上中性粒细胞数目明显少于C57BL/6J模型鼠和模型裸鼠,差异均有统计学意义（均P=0.000）.3种小鼠角膜创伤面积与中性粒细胞数目均呈明显正相关（C57BL/6J小鼠：r=0.805,P=0.016;BALB/c小鼠：r=0.943,P=0.000;裸鼠：r=0.916,P=0.001）. 结论 不同品系的正常小鼠角膜中性粒细胞分布的数目取决于角膜血管的分布和面积,角膜损伤后小鼠角膜中性粒细胞数目增加,角膜中性粒细胞数目较少的小鼠其角膜创伤修复速度较快,提示角膜血管网部位中性粒细胞的基础状态可能与角膜对感染的易感性以及感染后的早期反应有关.
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关键词
角膜
感染
中性粒细胞
疾病模型
动物
C57BL
6J鼠
BALB
c鼠
裸鼠
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职称材料
BALB/c小鼠角膜细胞密度和大小的活体三维测量
2
作者
张红敏
刘素素
+5 位作者
谢艳亭
陈国铭
贺司宇
金鑫
窦新岩
王丽娅
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期400-405,共6页
背景 角膜细胞的形态学参数及其密度对角膜结构的完整性及其正常功能的维持具有重要意义.目前,BALB/c小鼠已成为角膜研究中广泛应用的实验动物,了解正常角膜细胞的大小、形态及密度可为相应的实验研究提供参考依据. 目的 应用双光子激...
背景 角膜细胞的形态学参数及其密度对角膜结构的完整性及其正常功能的维持具有重要意义.目前,BALB/c小鼠已成为角膜研究中广泛应用的实验动物,了解正常角膜细胞的大小、形态及密度可为相应的实验研究提供参考依据. 目的 应用双光子激光扫描显微镜对BALB/c小鼠的不同角膜细胞进行活体扫描,对细胞密度、细胞大小参数进行活体三维测量,活体观察角膜不同细胞的形态学特征.方法 收集6只8 ～13周龄BALB/c小鼠,麻醉后荧光解剖显微镜下于角膜基质内注射20 μg/ml的胞质膜染料1μl,注射后1.5h于注射部位的对侧注射500 μg/ml Hoechst 33342 1 μl,30 min后使用双光子激光扫描荧光显微镜对角膜中央视野（XY轴）的角膜内皮层、基质层和上皮层进行Z轴逐层扫描,每层扫描厚度为2μm,图像像素为512×512,图像位数为12 bit.应用Imaris软件对扫描的图像进行细胞密度以及细胞大小参数的测量,细胞密度通过计算3维空间内细胞核数目获得;通过软件自动测量角膜上皮基底层、中基质层和内皮层细胞和细胞核的表面积和体积,并计算细胞和细胞核的表面积/体积值和细胞的核质比. 结果 BALB/c小鼠角膜上皮基底层和内皮层均为单层细胞,而中基质层包括2层细胞.小鼠角膜上皮基底层细胞密度为（108.00±18.97） ×10^4/mm3,明显大于中基质层的（9.27±0.48）×10^4/mm3和内皮层的（22.30±2.28）×10^4/mm3,3个组间总体比较差异有统计学意义（F=141.592,P=0.000）;以中基质层的细胞表面积和体积最大,其次为内皮层,上皮基底层的细胞表面积和体积最小,3层细胞间的表面积和体积的总体比较差异均有统计学意义（F=2 222.000、598.504,均P=0.000）.小鼠角膜上皮基底层、中基质层和内皮层细胞的表面积/体积值分别为（0.80±0.13）、（0.51±0.07）和（0.40±0.04）/μm,以上皮基底层细胞最大,3层间总体比较差异有统计学意义（F=127.075,P=0.000）.小鼠角膜以内皮层的细胞核表面积和体积最大,其次为中基质层,以上皮基底层细胞的细胞核表面积和体积最小,但以上皮基底层细胞核的表面积/体积值最大,以内皮层细胞核的表面积/体积值最小;小鼠角膜内皮层细胞的核质比明显大于上皮基底层和中基质层细胞. 结论 双光子激光扫描显微镜可对BALB/c小鼠中央角膜3层细胞参数,包括细胞和细胞核表面积及体积进行活体定量测定,为BALB/c小鼠角膜生理、病理和疾病的相关研究提供参考依据.
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关键词
角膜/解剖和组织学
细胞计数
细胞大小
近交系BALB/c小鼠
双光子荧光显微镜
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职称材料
题名
中性粒细胞在不同品系正常小鼠角膜的分布及其与角膜创伤修复的关系
被引量：
3
1
作者
张红敏
刘素素
陈国铭
柳慧
窦新岩
王素娟
李金
王丽娅
机构
河南省眼科研究所&河南省立眼科医院郑州大学人民医院
眼科
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第9期780-785,共6页
基金
国家自然科学基金项目（81170831、81270991）
河南省基础与前沿计划项目（102300410024、112300410036、11230040093、132102310087）
+1 种基金
河南省医学科技攻关计划项目（201203171）
河南省科技创新人才计划项目（144100510019）：郑州市科技创新团队项目（131PCXTD620）
文摘
背景 以往人们通常认为角膜无血管、无髓系来源的免疫细胞存在.C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠是眼科免疫学基础研究的常用模型,这些小鼠的角膜是否存在天然免疫的关键细胞——中性粒细胞是值得关注的问题. 目的 研究实验室常用的C57BL/6J鼠、BALB/c鼠和裸鼠正常角膜的中性粒细胞分布特征及其与角膜创伤修复的关系,为相关研究提供依据. 方法 选取角膜正常、10 ～ 12周龄的SPF级雄性C57BL/6J鼠、BALB/c鼠和BALB/c背景的裸鼠各16只,取3种小鼠各8只制备成中央区相连的4瓣角膜铺片,并以角膜周边血管缘为界向内以3个同心圆分区.分别用Gr-1-FITC抗体和CD31/PECAM-1-PE抗体对角膜中性粒细胞和血管进行免疫荧光染色,用免疫荧光显微镜和AR软件测量角膜血管面积并计数中性粒细胞.选取3种小鼠各8只制备角膜创伤模型,用无菌手术刀片以角膜中央为中心做十字划痕,深度至角膜前弹力层.创伤后即刻（0 h）、12h、24 h用2 g/L荧光素钠点眼,荧光显微镜下以AR软件计算不同时间点的创伤面积.于划痕后24 h取小鼠角膜制备铺片,用Gr-1-FITC抗体和CD31/PECAM-1-PE抗体行荧光染色,比较3种创伤小鼠角膜的血管分布、中性粒细胞的数量和分布情况.实验动物的饲养与使用均遵循美国视觉与眼科研究协会制定的科研动物使用规范. 结果 正常C57BL/6J小鼠、BALB/c小鼠和裸鼠角膜中性粒细胞总数分别为（1 733±237）、（353±96）和（1 601 ±223）个/角膜,BALB/c小鼠角膜中性粒细胞数明显少于C57BL/6J小鼠和裸鼠,差异均有统计学意义（P＜0.01）.3种正常小鼠角膜缘均可见血管分布,BALB/c小鼠角膜缘血管面积明显小于C57BL/6J小鼠和裸鼠,C57BL/6J小鼠角膜缘血管面积明显大于裸鼠,差异均有统计学意义（P＜0.01）.3种正常小鼠中性粒细胞的数量与血管面积均呈明显正相关（C57BL/6J：r=0.936,P=0.001;BALB/c：r =0.939,P=0.001;裸鼠：r=0.935,P=0.001）.角膜划痕后24 h,C57BL/6J小鼠和裸鼠的创伤面积均明显大于BALB/c小鼠（均P=0.000）,且以裸鼠的创伤面积最大.角膜划痕后C57BL/6J模型鼠、BALB/c模型鼠和模型裸鼠的角膜上中性粒细胞数目分别为（3 340±417）、（1 235±337）和（4 680±450）个/角膜,BALB/c模型鼠角膜上中性粒细胞数目明显少于C57BL/6J模型鼠和模型裸鼠,差异均有统计学意义（均P=0.000）.3种小鼠角膜创伤面积与中性粒细胞数目均呈明显正相关（C57BL/6J小鼠：r=0.805,P=0.016;BALB/c小鼠：r=0.943,P=0.000;裸鼠：r=0.916,P=0.001）. 结论 不同品系的正常小鼠角膜中性粒细胞分布的数目取决于角膜血管的分布和面积,角膜损伤后小鼠角膜中性粒细胞数目增加,角膜中性粒细胞数目较少的小鼠其角膜创伤修复速度较快,提示角膜血管网部位中性粒细胞的基础状态可能与角膜对感染的易感性以及感染后的早期反应有关.
关键词
角膜
感染
中性粒细胞
疾病模型
动物
C57BL
6J鼠
BALB
c鼠
裸鼠
Keywords
Cornea
Infection
Neutrophil
Disease model
Animal
C57BL/6J
BALB/c
Nude
分类号
R772.2 [医药卫生—眼科]
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职称材料
题名
BALB/c小鼠角膜细胞密度和大小的活体三维测量
2
作者
张红敏
刘素素
谢艳亭
陈国铭
贺司宇
金鑫
窦新岩
王丽娅
机构
河南省眼科研究所&河南省立眼科医院郑州大学人民医院
出处
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第5期400-405,共6页
基金
国家自然科学基金项目（81170831、81270991）
河南省基础与前沿计划项目（10230040024、112300410036、112300410093、132102310087）
+4 种基金
河南省医学科技攻关计划项目（201203171）
河南省科技创新人才计划项目（144100510015）
郑州市科技创新团队项目（131PCXTD620）
郑州市国际科技合作与交流项目（141PGJHZ352）
志谢感谢Andor/Bitplane亚太培训和应用支持中心的王娟和南茜在使用Imaris软件对细胞密度和大小进行测量过程中给予的技术支持
文摘
背景 角膜细胞的形态学参数及其密度对角膜结构的完整性及其正常功能的维持具有重要意义.目前,BALB/c小鼠已成为角膜研究中广泛应用的实验动物,了解正常角膜细胞的大小、形态及密度可为相应的实验研究提供参考依据. 目的 应用双光子激光扫描显微镜对BALB/c小鼠的不同角膜细胞进行活体扫描,对细胞密度、细胞大小参数进行活体三维测量,活体观察角膜不同细胞的形态学特征.方法 收集6只8 ～13周龄BALB/c小鼠,麻醉后荧光解剖显微镜下于角膜基质内注射20 μg/ml的胞质膜染料1μl,注射后1.5h于注射部位的对侧注射500 μg/ml Hoechst 33342 1 μl,30 min后使用双光子激光扫描荧光显微镜对角膜中央视野（XY轴）的角膜内皮层、基质层和上皮层进行Z轴逐层扫描,每层扫描厚度为2μm,图像像素为512×512,图像位数为12 bit.应用Imaris软件对扫描的图像进行细胞密度以及细胞大小参数的测量,细胞密度通过计算3维空间内细胞核数目获得;通过软件自动测量角膜上皮基底层、中基质层和内皮层细胞和细胞核的表面积和体积,并计算细胞和细胞核的表面积/体积值和细胞的核质比. 结果 BALB/c小鼠角膜上皮基底层和内皮层均为单层细胞,而中基质层包括2层细胞.小鼠角膜上皮基底层细胞密度为（108.00±18.97） ×10^4/mm3,明显大于中基质层的（9.27±0.48）×10^4/mm3和内皮层的（22.30±2.28）×10^4/mm3,3个组间总体比较差异有统计学意义（F=141.592,P=0.000）;以中基质层的细胞表面积和体积最大,其次为内皮层,上皮基底层的细胞表面积和体积最小,3层细胞间的表面积和体积的总体比较差异均有统计学意义（F=2 222.000、598.504,均P=0.000）.小鼠角膜上皮基底层、中基质层和内皮层细胞的表面积/体积值分别为（0.80±0.13）、（0.51±0.07）和（0.40±0.04）/μm,以上皮基底层细胞最大,3层间总体比较差异有统计学意义（F=127.075,P=0.000）.小鼠角膜以内皮层的细胞核表面积和体积最大,其次为中基质层,以上皮基底层细胞的细胞核表面积和体积最小,但以上皮基底层细胞核的表面积/体积值最大,以内皮层细胞核的表面积/体积值最小;小鼠角膜内皮层细胞的核质比明显大于上皮基底层和中基质层细胞. 结论 双光子激光扫描显微镜可对BALB/c小鼠中央角膜3层细胞参数,包括细胞和细胞核表面积及体积进行活体定量测定,为BALB/c小鼠角膜生理、病理和疾病的相关研究提供参考依据.
关键词
角膜/解剖和组织学
细胞计数
细胞大小
近交系BALB/c小鼠
双光子荧光显微镜
Keywords
Cornea/anatomy ＆amp
histology
Cell count
Cell size
Mice,inbred BALB/c
Microscopy,fluorescence,two-photon
分类号
R322.91 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
中性粒细胞在不同品系正常小鼠角膜的分布及其与角膜创伤修复的关系
张红敏
刘素素
陈国铭
柳慧
窦新岩
王素娟
李金
王丽娅
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
3
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职称材料
2
BALB/c小鼠角膜细胞密度和大小的活体三维测量
张红敏
刘素素
谢艳亭
陈国铭
贺司宇
金鑫
窦新岩
王丽娅
《中华实验眼科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
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