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发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核蛋白的原核表达与鉴定
被引量：
1
1
作者
胡小宁
黄学勇
+2 位作者
杜燕华
尤爱国
许汴利
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2014年第5期636-640,共5页
目的:构建发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核蛋白(NP)基因的原核表达载体,获得纯化并具有抗原性的重组表达蛋白。方法:提取病毒RNA,逆转录为cDNA后PCR扩增得到目的片段;通过连接pMD18-T构建克隆载体,测序正确后连接至原核表达...
目的:构建发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核蛋白(NP)基因的原核表达载体,获得纯化并具有抗原性的重组表达蛋白。方法:提取病毒RNA,逆转录为cDNA后PCR扩增得到目的片段;通过连接pMD18-T构建克隆载体,测序正确后连接至原核表达载体pMAL-c2x中,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达、纯化MBP-NP融合蛋白。采用SDS-PAGE、Western blot对融合蛋白进行分析;建立间接ELISA方法对SFTSV患者血清NP抗体进行检测。结果:成功构建了NP基因的原核表达载体pMAL-c2x-NP,通过优化表达条件获得了纯化的带MBP标签的融合蛋白,经免疫印迹杂交证实重组蛋白具有抗原性。用建立的ELISA方法检测96例SFTSV患者血清,阳性率为40.6%;实时荧光定量RT-PCR方法阳性率为55.2%,两者符合率为77.1%(Kappa=0.550,P<0.001)。结论:成功构建了SFTSV NP基因的原核表达系统,诱导表达了具有抗原性的MBP-NP融合蛋白,为进一步研发SFTSV的ELISA诊断试剂盒奠定了基础。
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关键词
发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒
核蛋白
原核表达
抗原性
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职称材料
题名
发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核蛋白的原核表达与鉴定
被引量：
1
1
作者
胡小宁
黄学勇
杜燕华
尤爱国
许汴利
机构
郑州大学公共卫生学院流行病学教研室
河南省疾病预防控制中心传染病防治所
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2014年第5期636-640,共5页
基金
河南省医学科技攻关省部共建基金资助项目2011010017 201301016
河南省医学科技攻关普通基金资助项目201303194
文摘
目的:构建发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(SFTSV)核蛋白(NP)基因的原核表达载体,获得纯化并具有抗原性的重组表达蛋白。方法:提取病毒RNA,逆转录为cDNA后PCR扩增得到目的片段;通过连接pMD18-T构建克隆载体,测序正确后连接至原核表达载体pMAL-c2x中,转化大肠杆菌JM109,IPTG诱导表达、纯化MBP-NP融合蛋白。采用SDS-PAGE、Western blot对融合蛋白进行分析;建立间接ELISA方法对SFTSV患者血清NP抗体进行检测。结果:成功构建了NP基因的原核表达载体pMAL-c2x-NP,通过优化表达条件获得了纯化的带MBP标签的融合蛋白,经免疫印迹杂交证实重组蛋白具有抗原性。用建立的ELISA方法检测96例SFTSV患者血清,阳性率为40.6%;实时荧光定量RT-PCR方法阳性率为55.2%,两者符合率为77.1%(Kappa=0.550,P<0.001)。结论:成功构建了SFTSV NP基因的原核表达系统,诱导表达了具有抗原性的MBP-NP融合蛋白,为进一步研发SFTSV的ELISA诊断试剂盒奠定了基础。
关键词
发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒
核蛋白
原核表达
抗原性
Keywords
severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus
nucleocapsid protein
prokaryotic expression
antigenicity
分类号
R714.246 [医药卫生—妇产科学]
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作者
出处
发文年
被引量
操作
1
发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒核蛋白的原核表达与鉴定
胡小宁
黄学勇
杜燕华
尤爱国
许汴利
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2014
1
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