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基于稳定同位素技术的南湾水库食物网结构研究 被引量：6
1
作者 李峥 魏廷 +5 位作者 马原野 曾鹏 杨东辉 郭旭升 赵良杰 黄荣静 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2021年第4期15-21,共7页
为量化水库生态系统中物质和能量流动途径与主要生物的营养层次,为水库生态资源的合理利用提供基础参数和科学依据,2017年5月、9月、11月和2018年4月在河南省信阳市南湾水库的径流谭家河、董家河、浉河港及库区中下游敞水区设置六个采样... 为量化水库生态系统中物质和能量流动途径与主要生物的营养层次,为水库生态资源的合理利用提供基础参数和科学依据,2017年5月、9月、11月和2018年4月在河南省信阳市南湾水库的径流谭家河、董家河、浉河港及库区中下游敞水区设置六个采样点,按规范标准收集浮游动物、浮游植物和颗粒有机物(POM)样品;用刺网和地笼及捕捞生产渔获物中收集鱼类、虾类、螺类样品,利用碳氮稳定同位素技术研究了南湾水库的生态系统食物网结构。结果表明:南湾水库中,消费者的碳稳定同位素比值(δ^(13)C)在-31.10‰~-22.14‰,氮稳定同位素比值(δ^(15)N)的范围为6.84‰~14.27‰。δ^(13)C分析显示:浮游植物为大部分鱼类食物的主要来源;敞水区鱼类δ^(13)C整体较低,可能与该区域受陆源碳源影响较小有关。δ^(15)N的营养级分析显示:花䱻Hemibarbus maculatus的营养级最高(TL=3.95);其次为似鱎Toxabramis swinhonis、青稍鲌Culter dabryi、翘嘴鲌Culter alburnus、子陵吻鰕虎Rhinogobius giurinus、黄䱂Hypseleotris swinhonis和红鳍原鲌Cultrichthys erythropterus等肉食性鱼类,营养级为3.39~3.51;泥鳅Misgurnus anguillicaudatus、䱗Hemiculter leucisculus、棒花鱼Abbottina rivularis、黄颡鱼Pelteobagrus fulvidraco、马口鱼Opsariichthys uncirostrisbidens等温和肉食性鱼类和肉食性为主的杂食性鱼类,营养级为3.00~3.38;日本沼虾Macrobrachium nipponense、大鳍鱎Acheilognathus macropterus、鲫Carassius auratus、团头鲂Megalobrama amblycephala、兴凯鱎Acheilognathus chankaensis、鳙Aristichthys nobilis、鲢Hypophthalmichthys molitrix为杂食偏植食性物种,营养级为2.30~2.97;盎堂拟鲿Pseudobagrus ondon、黄尾鲴Xenocypris davidi和大鳞副泥鳅Paramisgurnus dabryanus营养级较低,为1.76~1.97。营养级除与食性相关外,可能还受到物种生境选择的影响。 展开更多
关键词 稳定同位素 食物网 营养级 南湾水库
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RNAi技术干扰人喉癌Hep-2细胞PTTG1基因的初步研究
2
作者 王云龙 孙新城 +5 位作者 徐桂超 昌静峰 李玉林 王国强 刘旺根 董彩文 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2011年第16期2913-2917,共5页
目的:探索对人PTTG1基因mRNA序列有较高干扰效率的位点,构建对PTTG1基因的表达有较高抑制效率的重组质粒。方法:筛选、合成1对互补DNA单链,退火为双链后与双酶切后的质粒载体连接,构建了表达短发夹RNA的1种重组质粒plk0.1-puro/PTTG1。... 目的:探索对人PTTG1基因mRNA序列有较高干扰效率的位点,构建对PTTG1基因的表达有较高抑制效率的重组质粒。方法:筛选、合成1对互补DNA单链,退火为双链后与双酶切后的质粒载体连接,构建了表达短发夹RNA的1种重组质粒plk0.1-puro/PTTG1。重组质粒以不同浓度转染,并于转染后不同时间收集细胞,以β-actin为内参,采用RT-PCR和Western blot技术分别检测PTTG1基因的mRNA、蛋白质的相对表达水平。结果:与空白对照组相比,6孔板中每孔转染质粒plk0.1-puro/PTTG 11000ng以上、转染超过12d时,PTTG1基因mRNA、蛋白质的相对表达水平下降70%以上。结论:重组质粒plk0.1-puro/PTTG1,在6孔细胞培养板中以1000ng/孔转染12d以上时,有效抑制了人PTTG1基因的表达,在关于PTTG1基因的研究中具有较好的应用价值。 展开更多
关键词 RNAI PTTG1基因 SHRNA
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应用DPO技术检测食源性致病菌的多重PCR的研究 被引量：2
3
作者 卢富山 王云龙 景建洲 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期199-202,共4页
DPO是经特殊设计的特异性引物,本研究根据单增李斯特菌的prfA gene、O157的rfb Egene和副溶血弧菌的tlgene和志贺氏菌的ipaH gene设计四对DPO引物,采用多重PCR的方法,建立了检测单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、副溶血弧菌和志贺氏菌的... DPO是经特殊设计的特异性引物,本研究根据单增李斯特菌的prfA gene、O157的rfb Egene和副溶血弧菌的tlgene和志贺氏菌的ipaH gene设计四对DPO引物,采用多重PCR的方法,建立了检测单增李斯特菌、大肠杆菌O157:H7、副溶血弧菌和志贺氏菌的快速检测体系。实验结果表明:该体系特异性强,操作简单,为食源性致病菌的检测提供了新型的有效手段。 展开更多
关键词 DPO引物 多重PCR 食源性致病菌
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食源性致病菌O157:H7的生物检测研究 被引量：1
4
作者 冯健 白艳红 +1 位作者 王云龙 景建洲 《湖北农业科学》 北大核心 2011年第1期177-179,共3页
根据致病性大肠杆菌O157:H7的致病基因rfbE设计特异性引物扩增出致病性O157:H7特异性序列,然后分别用常规的琼脂糖电泳技术和Agilent 2100 Bioanalyzer对PCR产物进行检测,并比较两种检测方法的灵敏度、准确度和重复性。结果表明,Bioanal... 根据致病性大肠杆菌O157:H7的致病基因rfbE设计特异性引物扩增出致病性O157:H7特异性序列,然后分别用常规的琼脂糖电泳技术和Agilent 2100 Bioanalyzer对PCR产物进行检测,并比较两种检测方法的灵敏度、准确度和重复性。结果表明,Bioanalyzer的灵敏性较琼脂糖凝胶电泳法高;其能准确地确定片段的大小(误差率小于5%),可提供PCR目的片段的质量浓度和摩尔浓度。Bioanalyzer芯片分析系统结合PCR方法可对食源性大肠杆菌O157:H7进行特异、准确、稳定、灵敏的检测和鉴定,具有重要的推广价值。 展开更多
关键词 大肠杆菌O157:H7 聚合酶链反应 安捷伦2100生物分析仪 琼脂糖凝胶电泳
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基于生物信息学诺如病毒多表位抗原的构建及鉴定
5
作者 杜雪 赵印震 +4 位作者 张怡青 王晓军 王旭东 郭兰英 王云龙 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2391-2398,共8页
目的:基于生物信息学技术设计诺如病毒(NoV)的多表位抗原并进行制备及鉴定。方法:采用生物信息学方法构建NoV多表位抗原NoV-ZH并进行分析。通过原核表达系统制备重组蛋白并鉴定,经动物免疫、杂交瘤技术制备单克隆抗体,并在胶体金平台初... 目的:基于生物信息学技术设计诺如病毒(NoV)的多表位抗原并进行制备及鉴定。方法:采用生物信息学方法构建NoV多表位抗原NoV-ZH并进行分析。通过原核表达系统制备重组蛋白并鉴定,经动物免疫、杂交瘤技术制备单克隆抗体,并在胶体金平台初步应用。结果:设计的多表位抗原二级结构中无规卷曲占比较大,理论分子质量及等电点(PI)为13.1 ku、7.16,性质稳定,亲水性较好。免疫评估显示具有良好的免疫原性,可激活体液免疫应答和细胞免疫应答。抗原序列连接pET-28a(+)、pET-32a载体后制备的蛋白分别以包涵体蛋白、可溶性蛋白的形式表达。经动物免疫、杂交瘤技术获得一对配对抗体,应用于胶体金试纸条灵敏度达0.5 ng/ml,试纸条可特异性结合两种基因型NoV重组衣壳蛋白。结论:成功制备诺如病毒多表位抗原并鉴定,为后续NoV通用型检测靶点探究及诊断原材料开发提供参考。 展开更多
关键词 诺如病毒 生物信息学分析 多表位抗原
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含分子内佐剂的ASFV重组蛋白制备和免疫效果评价
6
作者 李玉林 周方方 +4 位作者 闫生辉 于巧玲 王继创 石盼盼 王云龙 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第3期22-28,共7页
为了探究两种分子内佐剂促吞噬肽Tuftsin和破伤风毒素肽TT联合作用对非洲猪瘟病毒(ASFV)重组蛋白P753体液和细胞免疫的影响,本试验采用生物信息学软件确定了ASFV结构蛋白P72、P54和P30的优势表位并构建重组载体pET-28a(+)-p753和pET-28a... 为了探究两种分子内佐剂促吞噬肽Tuftsin和破伤风毒素肽TT联合作用对非洲猪瘟病毒(ASFV)重组蛋白P753体液和细胞免疫的影响,本试验采用生物信息学软件确定了ASFV结构蛋白P72、P54和P30的优势表位并构建重组载体pET-28a(+)-p753和pET-28a(+)-p753-Tuftsin-TT,利用大肠杆菌表达系统表达重组蛋白,经纯化和透析复性后采用蛋白质印迹法(Western blot)和斑点酶联免疫吸附测定(Dot-ELISA)鉴定重组蛋白的免疫原性和免疫反应性。将2种重组蛋白与兽用商品化疫苗佐剂ISA 61 VG混匀后免疫小鼠,通过检测小鼠血清抗体水平、脾脏淋巴细胞增殖情况和细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)分泌水平来评价2种重组蛋白诱导的体液和细胞免疫效果。结果显示,2种重组蛋白在37℃、0.5 mmol/L IPTG条件下诱导表达4 h时以包涵体形式表达且表达量最高,经纯化复性后均具有免疫原性和免疫反应性。免疫小鼠后,P753组和P753-Tuftsin-TT组抗体水平均在首免42 d进入平台期,抗体水平均高于PBS组,其中,P753-Tuftsin-TT组抗体水平最高,抗原刺激指数和细胞因子(IL-2、IL-4和IFN-γ)含量极显著高于P753组(P <0.000 1)。结果表明,分子内佐剂Tuftsin和TT联合使用可显著提升P753重组抗原引起的体液和细胞免疫应答能力,为ASFV亚单位疫苗佐剂的研发提供参考。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒(ASFV) 分子内佐剂 亚单位疫苗 体液免疫 细胞免疫
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流感病毒检测方法研究进展 被引量：5
7
作者 周贺娟 王云龙 任瑞敏 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第10期90-93,共4页
近些年,流感在全球范围的频繁暴发,使科研工作者关注的焦点转移到对流感病毒进行方便、快速、准确的鉴定上。论文介绍了国内外流感病毒的检测方法,重点介绍了免疫学检测方法,尤其是酶联免疫法和胶体金免疫标记法。通过对各方法优缺点的... 近些年,流感在全球范围的频繁暴发,使科研工作者关注的焦点转移到对流感病毒进行方便、快速、准确的鉴定上。论文介绍了国内外流感病毒的检测方法,重点介绍了免疫学检测方法,尤其是酶联免疫法和胶体金免疫标记法。通过对各方法优缺点的比较,提出了免疫学检测方法在方便、快速检测流感病毒方法中的特有优势,尤其是胶体金免疫标记法和酶联免疫检测法,旨在为研制方便、快速的流感病毒检测方法提供思路,并为流感的预防、诊断提供一定的参考。 展开更多
关键词 流感病毒 免疫学检测 核酸检测
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杆状病毒的生态学和流行病学研究进展 被引量：6
8
作者 孙新城 景建洲 陈小科 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第10期16-18,共3页
杆状病毒作为杀虫剂应用,已成为生物防治中不可缺少的环节,也是一类重要的生物防治因子,但杆状病毒相对低的毒力和较长的杀虫时间是制约其推广应用的原因之一。文中就杆状病毒与宿主的关系,杆状病毒在环境中的存活、滞留与扩散等方面的... 杆状病毒作为杀虫剂应用,已成为生物防治中不可缺少的环节,也是一类重要的生物防治因子,但杆状病毒相对低的毒力和较长的杀虫时间是制约其推广应用的原因之一。文中就杆状病毒与宿主的关系,杆状病毒在环境中的存活、滞留与扩散等方面的流行病学研究进展做一总结。 展开更多
关键词 杆状病毒 生态学 流行病学
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河南信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区黄缘闭壳龟种群现状调查 被引量：9
9
作者 郭旭升 黄斌 +1 位作者 赵良杰 彭新亮 《野生动物学报》 北大核心 2017年第2期280-284,共5页
为了解黄缘闭壳龟的野外生存环境及资源现状,我们于2014年9月4日~16日,对河南省信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区境内的罗山、商城、新县等地黄缘闭壳龟的分布、数量和栖息地环境进行了调查。结果显示,除罗山境内少量地区人为干扰较强,目... 为了解黄缘闭壳龟的野外生存环境及资源现状,我们于2014年9月4日~16日,对河南省信阳黄缘闭壳龟省级自然保护区境内的罗山、商城、新县等地黄缘闭壳龟的分布、数量和栖息地环境进行了调查。结果显示,除罗山境内少量地区人为干扰较强,目前难觅黄缘闭壳龟外,其余地区均有黄缘闭壳龟分布,栖息地环境较好。根据走访调查,2012~2014年间共记录黄缘闭壳龟121只,野外实地调查发现黄缘闭壳龟2只。3 a通过调查分别发现黄缘闭壳龟47只、46只和28只,呈急剧下降趋势。为拯救这一珍贵物种,保护区应尽快组织后续的专项资源调查,以监测黄缘闭壳龟的种群动态,并积极开展该种的就地保护和迁地保护工作。 展开更多
关键词 黄缘闭壳龟 自然保护区 种群现状
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两河口国家湿地公园河流鱼类群落结构和多样性研究 被引量：4
10
作者 李峥 段家慧 +5 位作者 赵良杰 刘霞 赵春乐 李振国 余泽龙 雷宇杰 《水产学杂志》 CAS 北大核心 2020年第5期45-51,共7页
为了解两河口国家湿地公园的鱼类群落结构和多样性状况,为湿地公园的管理和保护提供科学依据,2019年1月10—25日,对两河口国家湿地公园辖区的东双河(114°6'20.42"E,32°3'59.16"N)进行了鱼类资源调查。调查... 为了解两河口国家湿地公园的鱼类群落结构和多样性状况,为湿地公园的管理和保护提供科学依据,2019年1月10—25日,对两河口国家湿地公园辖区的东双河(114°6'20.42"E,32°3'59.16"N)进行了鱼类资源调查。调查期间共采集鱼类18种,3906尾,重20432.9 g,分别隶属于3目5科17属,其中,鲤科鱼类14种,占77.78%。东双河鱼类优势种为■Hemiculter leucisculus(Basilewskv)和银鮈Squalidus argentatus(Sauvage et Dabry)。采集的渔获物个体小,绝大部分体长范围在4.1~10.0 cm之间,鱼类食性结构较单一,仅有肉食性和杂食性鱼类,肉食性鱼类的种类占38.89%,杂食性鱼类占61.11%;肉食性鱼类的数量占4.81%,杂食性鱼类占95.19%。多样性分析表明:东双河鱼类群落的Shannon-Wiener多样性指数为1.331;Wilhm改进指数为1.457;pielou均匀度指数为0.161;Simpson优势度集中指数为0.591;Margalef种类丰富度指数2.056。东双河鱼类群落结构较单一,鱼类个体小型化、低质化明显,主要原因是捕捞强度过大以及下游浉河水质下降,同时还受到捕捞季节和河流环境的影响。针对东双河鱼类资源状况,文中提出了多样性保护措施。 展开更多
关键词 鱼类群落结构 多样性 渔获物 东双河 两河口国家湿地公园
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Flag标签抗原的偶联及其单克隆抗体的应用研究 被引量：1
11
作者 王云龙 李忠信 +4 位作者 李恒思 李玉林 王继美 刘旺根 李兆学 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第1期38-43,共6页
探讨不同免疫原制备抗Flag标签单克隆抗体的效果,以及Flag标签单克隆抗体在融合蛋白纯化中的应用。通过碳化二亚胺分别合成Flag-BSA、Flag-OVA、Flag-KLH3种完全抗原,采用SDS-PAGE和免疫效价对比方法确定偶联效果,选最优者利用杂交瘤技... 探讨不同免疫原制备抗Flag标签单克隆抗体的效果,以及Flag标签单克隆抗体在融合蛋白纯化中的应用。通过碳化二亚胺分别合成Flag-BSA、Flag-OVA、Flag-KLH3种完全抗原,采用SDS-PAGE和免疫效价对比方法确定偶联效果,选最优者利用杂交瘤技术制备抗Flag标签单克隆抗体的杂交瘤细胞株,制备腹水,并对其纯化、分析和鉴定。制备交联抗Flag-mAb的亲和层析柱,纯化带Flag标签的融合蛋白,经SDS-PAGE电泳后薄层扫描分析纯度,用Western blot检测mAb对融合蛋白的反应性。Flag-KLH偶联效果最好,小鼠免疫效价在104以上,共制备3株抗Flag标签单克隆抗体杂交瘤细胞株2B-7、3C-5、5F-2,分泌抗体均为IgG1类型,与其他融合蛋白标签无交叉反应,经亲和层析纯化融合蛋白纯度达85%,且都可用于融合蛋白的Western blot检测,建立了带Flag标签的融合蛋白纯化和检测方法。成功偶联了Falg完全抗原并制备单克隆抗体,为带Flag标签的融合蛋白纯化提供重要工具。 展开更多
关键词 Flag标签 偶联 单克隆抗体 免疫亲和层析
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非洲猪瘟病毒衣壳五邻体顶点蛋白(H240R)原核表达及免疫原性研究 被引量：1
12
作者 王国强 张怡青 +8 位作者 李果 苏运芳 李玉林 尚立芝 毕胜利 樊志浩 李生涛 张振强 王云龙 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2021年第9期2038-2044,共7页
【目的】原核表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)次要衣壳五邻体顶点蛋白(H240R),并研究其免疫原性。【方法】运用生物信息学软件初步预测分析H240R蛋白的理化性质、二级和三级结构。目的基因序列密码子优化后全基因合... 【目的】原核表达非洲猪瘟病毒(African swine fever virus, ASFV)次要衣壳五邻体顶点蛋白(H240R),并研究其免疫原性。【方法】运用生物信息学软件初步预测分析H240R蛋白的理化性质、二级和三级结构。目的基因序列密码子优化后全基因合成,利用基因重组技术构建重组载体pET28a/H,通过原核系统表达目的蛋白,筛选最优的诱导温度和诱导时间。目的蛋白(包涵体)通过含2M尿素洗涤缓冲液洗涤和亲和层析进行纯化。利用梯度透析对纯化的目的蛋白进行复性,Western和Dot-ELISA鉴定复性的目的蛋白。复性蛋白和佐剂ISA201乳化后免疫小鼠,评价H240R蛋白免疫原性及其在小鼠体内诱导的抗体消长规律。【结果】生物信息学分析显示H240R蛋白分子量约为27 kDa,等电点为9.40,无跨膜结构域,抗原指数较高。成功构建大肠杆菌工程菌株BL21(DE3)/pET28a/H,在不同温度诱导条件下H240R蛋白均以包涵体形式表达。包涵体蛋白经过洗涤和亲和层析纯化后,纯度达85%以上。大约65%纯化蛋白可通过梯度透析进行复性。Western显示His抗体可以和融合蛋白结合显色,表明目的蛋白表达正确,Dot-ELISA显示阳性血清和复性的目的蛋白反应,表明复性的H240R蛋白具有正确的构象。复性蛋白免疫小鼠后,可刺激小鼠产生抗体,二免后10 d达到平台期,可以稳定持续30 d左右。【结论】ASFV衣壳五邻体顶点蛋白H240R在原核系统中以包涵体形式表达,纯化复性的目的蛋白具有良好的免疫原性,并且可以和阳性血清反应。这些可为进一步研究H240R蛋白的结构和功能,以及ASFV亚单位疫苗研制提供参考和思路。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 衣壳蛋白 五邻体顶点蛋白H240R 包涵体
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抗烟草青枯病拮抗菌的筛选及抑菌活性研究 被引量：3
13
作者 孙新城 司艳红 +1 位作者 张莉 王云龙 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第14期5917-5918,5929,共3页
[目的]为了筛选能有效防治烟草青枯病的生防菌株。[方法]对从土壤中分离到的链霉菌产生的次生代谢产物的抑菌活性和理化性质采用管碟法进行了测定。[结果]离体条件下,发酵液具有耐热性,在100℃以下仍具有较强的抑菌活性。在一定的pH值... [目的]为了筛选能有效防治烟草青枯病的生防菌株。[方法]对从土壤中分离到的链霉菌产生的次生代谢产物的抑菌活性和理化性质采用管碟法进行了测定。[结果]离体条件下,发酵液具有耐热性,在100℃以下仍具有较强的抑菌活性。在一定的pH值范围内(pH值3.8～9.0),拮抗能力无明显差异,其中在接近中性条件下拮抗活性较强。拮抗物质经胰蛋白酶处理后,拮抗活性亦无明显变化。经终浓度为2 mol/L(NH4)2SO4处理过的粗发酵液,其上清液与沉淀均具有拮抗活性,沉淀经SDS-PAGE凝胶电泳检测证明其拮抗物质具有蛋白质性质。[结论]1#链霉菌具有很好的开发研究价值。 展开更多
关键词 链霉菌 烟草青枯菌 拮抗活性
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基于铂金纳米酶和磁珠的新冠病毒可视化检测方法的建立
14
作者 王丙年 左蕾 +5 位作者 王继创 李玉林 程蕾 王晓军 WANG DAVID XUDONG 王云龙 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第7期712-717,725,共7页
目的建立一种基于磁珠(MBs)富集和铂金纳米颗粒(Au@PtNPs)酶催化的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)可视化检测方法。方法根据双抗体夹心法原理,MBs抗体偶联物与SARS-CoV-2抗原和Au@PtNPs抗体标记物形成免疫复合物,最后利用Au@PtNPs催化显色液... 目的建立一种基于磁珠(MBs)富集和铂金纳米颗粒(Au@PtNPs)酶催化的新型冠状病毒(SARS-CoV-2)可视化检测方法。方法根据双抗体夹心法原理,MBs抗体偶联物与SARS-CoV-2抗原和Au@PtNPs抗体标记物形成免疫复合物,最后利用Au@PtNPs催化显色液变色的原理,通过比较颜色变化判定结果,蓝色变化表示阳性结果,无明显颜色变化表示阴性结果,并对该方法的灵敏度、特异性进行评价。结果成功建立了基于MBs富集和Au@PtNPs酶催化的以SARS-CoV-2抗原为靶向分子的可视化检测方法。该方法能在30 min内完成对SARS-CoV-2抗原的检测,可检测病毒抗原浓度3.125 ng/mL以上的SARS-CoV-2核衣壳蛋白样本;与季节性流感(H1N1)核蛋白、乙型流感病毒核蛋白无交叉反应。结论基于Au@PtNPs酶催化和MBs富集的可视化检测方法在SARS-CoV-2检测中具有较高的特异性和灵敏度、操作简单快捷,为病毒快速检测提供一种新思路。 展开更多
关键词 纳米铂金颗粒 磁微粒 新型冠状病毒 免疫检测
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甲型H1N1流感病毒血凝素基因的原核表达及用于胶体金检测方法的研究
15
作者 王云龙 郭文丽 +6 位作者 孙新城 李玉林 李恒思 陈冬焕 王真 董彩文 刘旺根 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第7期1-4,共4页
根据GenBank公布的甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因序列,合成HA全长基因,构建原核表达载体pET-30 Xa/LIC-HA。阳性质粒转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot检测的结果表明,HA基因获得表达,产物具... 根据GenBank公布的甲型H1N1流感病毒血凝素(HA)基因序列,合成HA全长基因,构建原核表达载体pET-30 Xa/LIC-HA。阳性质粒转化E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达。对表达蛋白进行SDS-PAGE和Western blot检测的结果表明,HA基因获得表达,产物具有免疫学活性,分子质量约64 ku,以包涵体形式存在。以纯化的重组蛋白作为抗原初步建立了双抗原夹心检测甲型H1N1流感HA抗体的胶体金方法。该方法能检测出甲型H1N1流感阳性血清,为疫苗效果的评价奠定了基础。 展开更多
关键词 甲型H1N1流感病毒 血凝素 原核表达 胶体金
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流感病毒抗原荧光免疫层析双质控检测方法的建立
16
作者 赵印震 王继创 +7 位作者 薛梦旗 牛楠楠 吕锡亮 张应福 杜学利 程蕾 李玉林 王云龙 《郑州大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第3期353-357,共5页
目的:以β-actin蛋白为内参,建立流感病毒抗原荧光免疫层析双质控检测方法。方法:使用荧光微球标记流感病毒单克隆抗体、β-actin单克隆抗体,将配对流感病毒单克隆抗体、β-actin单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体依次包被在硝酸纤维素膜... 目的:以β-actin蛋白为内参,建立流感病毒抗原荧光免疫层析双质控检测方法。方法:使用荧光微球标记流感病毒单克隆抗体、β-actin单克隆抗体,将配对流感病毒单克隆抗体、β-actin单克隆抗体和羊抗鼠IgG多克隆抗体依次包被在硝酸纤维素膜上,分别作为检测线、内参线、质控线,试纸条组装后进行检测。优化样品垫处理液配方和喷球量后,考察试纸条线性范围、准确度、精密性,并与江苏硕世流感病毒抗原检测试剂盒(铂金法)进行方法学比对,通过ROC曲线计算试纸条敏感度、特异度、阳性和阴性预测值。结果:结合垫最佳喷球量为8μL/cm;甲、乙型流感病毒线性范围分别为2.50×10^(3)~320.00×10^(3)和6.25×10^(5)~800.00×10^(5) TCID_(50)/L;批内、批间变异系数均小于15%;与新型冠状病毒等其他呼吸道病毒无交叉反应;与江苏硕世流感病毒抗原检测试剂盒平行检测临床样本,二者检测阳性预测值可达98%,自制试纸条检测敏感度达到90.63%。结论:建立了高敏感度的流感病毒抗原荧光免疫层析双质控检测方法。 展开更多
关键词 流感病毒 Β-ACTIN 免疫层析 抗原检测
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肠道病毒71型的诊断方法及疫苗研究述评
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作者 董彩文 张胜楠 +4 位作者 王云龙 李玉林 孙新城 王国强 李恒思 《郑州轻工业学院学报（自然科学版）》 CAS 2012年第5期13-17,共5页
对肠道病毒71型的诊断方法及疫苗研究进行了综述.EV71的诊断有病毒分离培养、中和抗体滴度检测、核酸检测和免疫学检测;EV71的疫苗研究主要为国内流行的C4型毒株,经过动物模型评价研发减毒活疫苗、病毒样颗粒疫苗和针对VP1位点的重组疫... 对肠道病毒71型的诊断方法及疫苗研究进行了综述.EV71的诊断有病毒分离培养、中和抗体滴度检测、核酸检测和免疫学检测;EV71的疫苗研究主要为国内流行的C4型毒株,经过动物模型评价研发减毒活疫苗、病毒样颗粒疫苗和针对VP1位点的重组疫苗.采用两种或两种以上诊断方法联合使用为EV71的快速诊断提供一种有效方法;而建立合适的动物模型,筛选免疫原性和交叉保护水平高的毒种,以及不同类型疫苗免疫原性比较是疫苗研究的方向. 展开更多
关键词 肠道病毒71型 免疫学检测 疫苗
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南湾水库鱼类群落结构及主要鱼类的生态位
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作者 伦峰 檀晨曦 +3 位作者 苏超群 杨铁柱 马原野 李峥 《河南农业科学》 北大核心 2025年第8期159-166,共8页
为了解南湾水库鱼类群落结构特征和种间关系,分别于2022年11月(秋季)和2023年5月(春季)开展鱼类资源调查,分析其群落组成、鱼类多样性及时空生态位特征[包括生态位宽度指数(Bi)和重叠指数(Qik)]。结果表明,2次调查共捕获鱼类1903尾,隶属... 为了解南湾水库鱼类群落结构特征和种间关系,分别于2022年11月(秋季)和2023年5月(春季)开展鱼类资源调查,分析其群落组成、鱼类多样性及时空生态位特征[包括生态位宽度指数(Bi)和重叠指数(Qik)]。结果表明,2次调查共捕获鱼类1903尾,隶属于4目6科22属24种。综合分析表明,南湾水库优势种为䱗、似鱎和黄尾鲴,根据PINKAS相对重要性指数(IRI)确定主要鱼类共10种。南湾水库鱼类多样性存在一定的时空差异,Margalef物种丰富度指数春季(2.78)稍高于秋季(2.67),Shannon-wiener多样性指数、Pielou均匀度指数和Simpson优势度指数均为秋季明显高于春季,库区中部鱼类多样性更高。时空生态位分析表明,达氏鲌(1.254)、黄尾鲴(1.073)和红鳍鳈(1.024)具有中等生态位宽度指数,其余物种生态位宽度指数较窄;时空生态位重叠指数中,高重叠指数(Qik>0.6)的有18组,占总组数的40.0%,重叠指数低于0.3的有11组,占总组数的24.4%。时空重叠度最高的是麦穗鱼与鲫(0.922),而麦穗鱼与生态习性更相似的似鱎重叠指数反而较低(0.249)。综上,在南湾水库食性和生活水层具有明显差异的优势鱼种表现出更稳定的群落结构;食性相似但生活空间不同的鱼种时空重叠指数较高;而食性和生活水层均相似的鱼种可能因生态位竞争导致时空重叠指数降低,并伴随明显的种群数量波动。 展开更多
关键词 鱼 南湾水库 群落结构 生态位宽度指数 生态位重叠指数
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荧光层析定量检测tPSA和fPSA方法研究
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作者 钱存 王云龙 +6 位作者 明亮 李玉林 王继创 程蕾 程春杰 高玉红 闫生辉 《轻工学报》 CAS 2017年第4期37-42,共6页
采用碳二亚胺(EDC)活化荧光微球,再将荧光微球与抗体进行偶联,制备同时定量检测总前列腺特异性抗原(t PSA)和游离前列腺特异性抗原(f PSA)的荧光层析试纸条,并进行性能分析和方法论对比.结果表明:该方法检测t PSA和f PSA的灵敏度分别为0... 采用碳二亚胺(EDC)活化荧光微球,再将荧光微球与抗体进行偶联,制备同时定量检测总前列腺特异性抗原(t PSA)和游离前列腺特异性抗原(f PSA)的荧光层析试纸条,并进行性能分析和方法论对比.结果表明:该方法检测t PSA和f PSA的灵敏度分别为0.08 ng/m L和0.06 ng/m L;批内差异均小于10%,批间差异均小于15%;回收率均为95%~105%;特异性良好.该方法检测结果与电化学发光法相关性较好,可满足小型医院辅助诊断需要. 展开更多
关键词 TPSA FPSA 荧光微球 荧光层析
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超声检测技术在鱼类人工繁殖的应用价值分析
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作者 黄荣静 孟瑾 雷宇杰 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第1期83-86,共4页
本文旨在探究超声检测技术在鱼类人工繁殖的应用价值。选取黄颡鱼、黄鳝、斑点叉尾鮰、泥鳅、施氏鲟和南方大口鲶6种无磷亲鱼,经超声检测,分别对其性腺发育不同阶段卵径进行横向和纵向比较。结果显示:6种鱼类的卵径的超声检测测量值与... 本文旨在探究超声检测技术在鱼类人工繁殖的应用价值。选取黄颡鱼、黄鳝、斑点叉尾鮰、泥鳅、施氏鲟和南方大口鲶6种无磷亲鱼,经超声检测,分别对其性腺发育不同阶段卵径进行横向和纵向比较。结果显示:6种鱼类的卵径的超声检测测量值与卵子发育呈正相关;在卵巢成熟期内,超声检测可通过检测卵径及卵子在影像中是否具有游动性这2项指标来判断是否具有催产条件,其超声检测符合率达98.90%以上。表明对于无鳞鱼或珍稀鱼类应用超声检测卵巢发育,其分辨率和诊断符合率比较高,可作为人工繁殖诊断卵子发育情况的首选方法,具有重要的临床应用价值。 展开更多
关键词 超声检测 人工繁殖 黄颡鱼 黄鳝 斑点叉尾鮰 泥鳅 施氏鲟 南方大口鲶
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