细胞保存技术在禽类遗传资源保存应用中的研究进展 被引量：2

1

作者 秦清明 李治利 +4 位作者 李建柱 赵云焕 赵聘 焦凤超 张自富 《中国家禽》 北大核心 2020年第8期93-100,共8页

禽类具有特殊的生殖系统,导致其遗传资源保存应用方法的研究进展缓慢。在禽类遗传资源保存方法中,生殖细胞的保存应用、睾丸卵巢组织的保存移植具备一定的稳定性和长效性,是未来进行禽类遗传资源保存应用的主要手段。文章综述了精液、... 禽类具有特殊的生殖系统,导致其遗传资源保存应用方法的研究进展缓慢。在禽类遗传资源保存方法中,生殖细胞的保存应用、睾丸卵巢组织的保存移植具备一定的稳定性和长效性,是未来进行禽类遗传资源保存应用的主要手段。文章综述了精液、原始生殖细胞、囊胚细胞、性腺生殖细胞、睾丸组织和卵巢组织等在禽类遗传资源保存应用的研究进展,以期为我国禽业遗传资源保存提供参考。 展开更多

关键词 禽 遗传资源 生殖细胞

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基于RPA-LFD的鸭星状病毒2型核酸快速可视化检测技术

2

作者 何书海 晋丹丹 +4 位作者 薛玉坤 曲哲会 鲁绍芳 董建国 胡建新 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第12期46-51,共6页

为建立一种鸭星状病毒2型(DAstV-2)核酸的快速可视化检测方法,本试验基于重组酶聚合酶扩增结合横向侧流层析试纸条(RPA-LFD)技术,以DAstV-2的ORF2基因为检测靶标,设计和筛选适用于DAstV-2核酸检测的RPA引物和匹配探针,并优化反应条件;... 为建立一种鸭星状病毒2型(DAstV-2)核酸的快速可视化检测方法,本试验基于重组酶聚合酶扩增结合横向侧流层析试纸条(RPA-LFD)技术,以DAstV-2的ORF2基因为检测靶标,设计和筛选适用于DAstV-2核酸检测的RPA引物和匹配探针,并优化反应条件;进一步验证该方法的灵敏性、特异性和准确性。结果显示,筛选获得1对引物和匹配探针适用于DAstV-2核酸的RPA-LFD检测,探针的最佳工作浓度为5μmol/L;建立的RPA-LFD检测方法对DAstV-2核酸的最低检测限为3×10^(1)copies/μL;可特异性检测DAstV-2核酸,对鸭肝炎病毒(DHV)、鹅星状病毒(GAstV)、鸭圆环病毒(DuCV)和鸭瘟病毒(DPV)的检测结果均为阴性;对疑似DAstV-2感染病鸭肝脏组织病毒核酸样本的检测结果显示,建立的RPA-LFD与实时荧光定量PCR检测结果的符合率为100%,且该检测方法更加便捷。本试验结果表明,利用RPA-LFD检测DAstV-2核酸灵敏度高、特异性强、准确性高,操作简单、检测快速,可在38℃恒温条件下15 min内实现DAstV-2核酸的快速可视化检测。 展开更多

关键词 鸭星状病毒2型 重组酶聚合酶扩增 横向侧流层析试纸条 快速检测 可视化

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蜂毒素对热应激鸭生产性能、肝脏免疫功能和抗氧化功能的影响

3

作者 李治利 陶梦筱 +5 位作者 卫雪妍 董玉珠 麻冰洁 吴海港 张自富 秦清明 《中国饲料》 北大核心 2025年第11期43-48,共6页

为研究蜂毒素对热应激鸭生产性能、肝脏免疫功能和抗氧化功能的影响,试验选取200只15日龄雄性鸭,随机分为4组:热应激组(HS组,基础日粮)、热应激加蜂毒素低剂量组(HSM1组,基础日粮+蜂毒素0.08 g/kg)、热应激加蜂毒素中剂量组(HSM2组,基... 为研究蜂毒素对热应激鸭生产性能、肝脏免疫功能和抗氧化功能的影响,试验选取200只15日龄雄性鸭,随机分为4组:热应激组(HS组,基础日粮)、热应激加蜂毒素低剂量组(HSM1组,基础日粮+蜂毒素0.08 g/kg)、热应激加蜂毒素中剂量组(HSM2组,基础日粮+蜂毒素0.12 g/kg)、热应激加蜂毒素高剂量组(HSM3组,基础日粮+蜂毒素0.16 g/kg),每天进行4 h热应激处理(温度36~38℃,相对湿度75%80%),持续15 d,采集肝脏,检测肝脏中还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)、总抗氧化能力(T-AOC)活性和丙二醛(MDA)含量,以及细胞因子IL-1β、TNF-α、IL-10的含量。荧光定量RT-PCR检测肝脏的核因子红细胞2相关因子2(Nrf2)、过氧化氢酶(CAT)、SOD、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和环氧化酶-2(COX-2)mRNA相对表达量。结果表明:与HS组相比,HSM2组和HSM3组热应激鸭平均日增重分别显著增加30.23%和31.46%,肝脏IL-10含量分别显著增加40.92%和42.80%、GSH活性分别显著增加20.89%、20.89%和T-AOC活性分别显著增加28.38%、33.19%(P<0.05)。与HS组相比,蜂毒素能显著增加热应激鸭肝脏Nrf2、CAT、GSH-Px、SOD和COX-2 mRNA相对表达量(P<0.05)。与HS组相比,HSM2组和HSM3组热应激鸭料肉比分别显著降低12.25%和11.07%,肝脏IL-1β分别显著降低14.92%和21.74%、MDA含量分别显著降低31.76%和25.00%(P<0.05)。与HS组相比,蜂毒素能使热应激鸭平均日采食量和肝脏SOD活性稍微的升高,肝脏TNF-α稍微的降低(P > 0.05)。综上所述,饲粮中添加蜂毒素能提高热应激鸭生产性能、肝脏免疫功能和抗氧化功能,其中以饲料中添加0.12 g/kg和0.16 g/kg蜂毒素为最优,该试验为蜂毒素作为绿色、安全的饲料添加剂应用于鸭生产提供科学理论依据。 展开更多

关键词 蜂毒素 热应激 鸭 免疫 抗氧化指标

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禽白血病与马立克氏病肿瘤细胞的甲基绿-派洛宁染色鉴别诊断

4

作者 师睦然 刘妍 +2 位作者 王佳宁 王成才 何书海 《中国畜禽种业》 2025年第2期98-103,共6页

为探索一种经济实用的病理形态学诊断方法鉴别淋巴细胞性禽白血病(Avian leukosis,AL)和马立克氏病(Marek's disease,MD),以A亚群禽白血病病毒(ALV-A)和马立克氏病毒核酸检测为阳性的淋巴细胞性AL和MD病鸡为研究对象,采用尸体剖检... 为探索一种经济实用的病理形态学诊断方法鉴别淋巴细胞性禽白血病(Avian leukosis,AL)和马立克氏病(Marek's disease,MD),以A亚群禽白血病病毒(ALV-A)和马立克氏病毒核酸检测为阳性的淋巴细胞性AL和MD病鸡为研究对象,采用尸体剖检、苏木精-伊红(HE)染色和甲基绿-派洛宁特殊染色法对二者进行诊断鉴别。结果表明,淋巴细胞性AL和MD鸡肝脏均肿大,表面和切面可见灰白色肿瘤结节,其他内脏器官亦可见肿瘤结节;肝脏肿瘤组织切片HE染色可见淋巴细胞样瘤细胞增生灶,但无法从形态区分两种肿瘤细胞;经甲基绿-派洛宁特殊染色,淋巴细胞性禽白血病鸡肝脏肿瘤细胞的胞质呈紫红色,而MD病鸡肝脏肿瘤细胞胞质呈蓝色。综上,该试验所建立的甲基绿-派洛宁染色可有效鉴别诊断淋巴细胞性AL和MD的肿瘤细胞。 展开更多

关键词 马立克氏病 淋巴细胞性禽白血病 甲基绿-派洛宁 鉴别诊断

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热应激对家禽免疫功能影响的研究进展 被引量：13

5

作者 李治利 秦清明 +4 位作者 李宁倩 赵聘 赵云焕 李建柱 唐雪峰 《中国家禽》 北大核心 2021年第7期99-105,共7页

热应激是全球畜牧业面临的最大挑战之一,环境温度和湿度的增加影响夏季动物生产,导致严重的经济损失。免疫功能是维持家禽机体健康的基础,改善机体免疫功能可以改善健康状况,提高生产性能,降低死亡率,减少损失。大量研究表明,热应激能... 热应激是全球畜牧业面临的最大挑战之一,环境温度和湿度的增加影响夏季动物生产,导致严重的经济损失。免疫功能是维持家禽机体健康的基础,改善机体免疫功能可以改善健康状况,提高生产性能,降低死亡率,减少损失。大量研究表明,热应激能影响家禽的免疫器官和细胞因子,并通过对家禽B细胞介导的体液免疫、T细胞介导的细胞免疫和肠道免疫产生不利影响,而对免疫系统产生负面影响;热应激条件下TLR-4基因的表达可作为预测肠道病原体侵袭和免疫调节的指标。文章旨在为家禽生产管理提供理论依据。 展开更多

关键词 热应激 免疫 细胞因子 肠道免疫 家禽

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一株孔雀源奇异变形杆菌全基因组测序及毒力与耐药性分析

6

作者 焦凤超 雷震 +2 位作者 李迎晓 武娴 曲哲会 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期3030-3040,共11页

【目的】试验旨在了解分离自蓝孔雀的奇异变形杆菌PM19的毒力、耐药性以及基因组特征。【方法】采用动物试验、药敏试验和PCR方法对分离菌进行毒力、耐药性以及毒力基因检测,并运用Illumina NovaSeq6000平台进行基因组框架图测序,通过NR... 【目的】试验旨在了解分离自蓝孔雀的奇异变形杆菌PM19的毒力、耐药性以及基因组特征。【方法】采用动物试验、药敏试验和PCR方法对分离菌进行毒力、耐药性以及毒力基因检测,并运用Illumina NovaSeq6000平台进行基因组框架图测序,通过NR、KEGG、Swiss-Prot、COG、PHI-base、CAZy、CARD和VFDB数据库进行功能基因注释以及病原宿主互作用蛋白、碳水化合物活性酶、耐药基因和毒力因子预测分析。【结果】分离菌PM19为多重耐药菌,对受试的氨苄西林、阿莫西林/克拉维酸钾、头孢曲松、头孢噻肟、阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星、四环素、强力霉素、磺胺嘧啶钠、替米考星、氟苯尼考和氯霉素共14种抗菌药物全部耐药。分离菌具有较强毒力,对小鼠半数致死量为6.19×10^(6)CFU。FliL、zapA、rsmA、hmpA、mrpA、atfA、pmfA和ureC共8种毒力基因在该菌中被检测到。全基因组测序分析显示,该菌基因组大小约为3.98 Mb,GC含量为38.94%,预测到3715个编码基因。PHI-base数据库注释出158个与病原宿主互作用有关的蛋白基因;CAZy数据库注释出101个碳水化合物活性酶基因;通过CARD数据库和VFDB数据库分别注释到92个耐药基因和8类毒力相关基因。【结论】奇异变形杆菌PM19菌株具有较强毒力且为多重耐药菌株,携带大量病原宿主互作用蛋白基因、碳水化合物活性酶基因、耐药基因及毒力基因。 展开更多

关键词 奇异变形杆菌 多重耐药性 毒力 全基因组测序

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白藜芦醇对鸭卵巢组织冻融后移植效果的影响

7

作者 秦清明 李治利 +4 位作者 王宏辉 李浩洋 麻冰洁 黄立 朱忠珂 《中国家禽》 北大核心 2024年第2期7-15,共9页

为探究不同浓度白藜芦醇对鸭卵巢组织玻璃化冷冻以及在鸭肾脏被膜下移植过程中的影响,试验分为5组(Con组:新鲜卵巢组织;0组、2.5组、5组、10组:0、2.5、5、10 mmol/L白藜芦醇),采用荧光定量PCR技术,检测玻璃化冷冻复苏后、复苏后鸭肾脏... 为探究不同浓度白藜芦醇对鸭卵巢组织玻璃化冷冻以及在鸭肾脏被膜下移植过程中的影响,试验分为5组(Con组:新鲜卵巢组织;0组、2.5组、5组、10组:0、2.5、5、10 mmol/L白藜芦醇),采用荧光定量PCR技术,检测玻璃化冷冻复苏后、复苏后鸭肾脏被膜下移植第3天和第9天卵巢组织中MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA表达情况;HE染色观察移植后卵巢的卵泡形态。结果显示:与Con组相比,玻璃化冷冻显著降低卵巢组织MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。与0组相比,10 mmol/L白藜芦醇能显著增加玻璃化冷冻卵巢MST1、LATS1、YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。卵巢移植3 d后,与0组相比,白藜芦醇能显著增加10组MST1、YAP1、VEGF,2.5组LATS1、YAP1,5组VEGF mRNA相对表达量(P<0.05);移植9 d后,白藜芦醇能显著降低MST1和LATS1 mRNA相对表达量(P<0.05)和显著升高YAP1和VEGF mRNA相对表达量(P<0.05)。白藜芦醇能显著增加冻融卵巢移植3 d和9 d的5组和10组正常卵泡率(P<0.05)。综上所述,白藜芦醇能提高鸭卵巢冻融移植后的卵泡存活率,以10 mmol/L为试验的最佳浓度。 展开更多

关键词 鸭 白藜芦醇 玻璃化冷冻 卵巢移植 YAP1/VEGF信号通路

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14株鸭疫里默氏杆菌的部分生物学特性分析 被引量：8

8

作者 左春生 李迎晓 +7 位作者 徐光科 李洵 饶丹 吴海港 刘锦妮 黄立 赵聘 焦凤超 《江苏农业科学》 2020年第15期221-225,共5页

为了解鸭疫里默氏杆菌的流行情况,对信阳地区疑似鸭疫里默氏杆菌感染病料进行病原分离和鉴定。结果显示,共鉴定到14株鸭疫里默氏杆菌,其中血清1型、2型和10型菌株依次为3、4、2株,未定血清型菌株5株;动物致病性试验结果显示,分离菌对雏... 为了解鸭疫里默氏杆菌的流行情况,对信阳地区疑似鸭疫里默氏杆菌感染病料进行病原分离和鉴定。结果显示,共鉴定到14株鸭疫里默氏杆菌,其中血清1型、2型和10型菌株依次为3、4、2株,未定血清型菌株5株;动物致病性试验结果显示,分离菌对雏鸭均具有致病性。对11种抗菌药物敏感性检测结果表明,分离菌株对阿米卡星、链霉素和头孢曲松较为敏感,对氟苯尼考、阿莫西林、磺胺异噁唑、多黏菌素B和多西环素耐药性较高;生物被膜检测结果表明,14株菌株中有8株为强生物被膜形成株,2株为弱生物被膜形成株。 展开更多

关键词 鸭疫里默氏杆菌 分离鉴定 血清型 药敏试验 生物被膜

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五种植物精油对鸭疫里默氏菌体外抑菌效果观察 被引量：4

9

作者 左春生 徐光科 +5 位作者 焦凤超 李迎晓 吴海港 何敏 黄立 赵聘 《中国饲料》 北大核心 2020年第15期55-58,共4页

本试验旨在研究五种天然主要植物精油(桉叶油、肉桂油、紫苏油、陈皮油、薄荷油)对鸭疫里默氏菌的体外抑菌效果,分别用几种植物精油对鸭疫里默氏菌的敏感性进行测定,然后再采用试管二倍稀释法测定各植物精油对鸭疫里默氏菌的最小抑菌浓... 本试验旨在研究五种天然主要植物精油(桉叶油、肉桂油、紫苏油、陈皮油、薄荷油)对鸭疫里默氏菌的体外抑菌效果,分别用几种植物精油对鸭疫里默氏菌的敏感性进行测定,然后再采用试管二倍稀释法测定各植物精油对鸭疫里默氏菌的最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:桉叶油、肉桂油、陈皮油、紫苏油、薄荷油对鸭疫里默氏菌的最小抑菌浓度分别为:78.12、156.24、78.12、156.24、312.5μL/L。经分析可知,桉叶油、肉桂对鸭疫里默氏菌的体外抑菌效果最佳(P<0.05),紫苏、陈皮油对鸭疫里默氏菌的体外抑菌效果次之(P<0.05),薄荷油效果最差(P<0.05)。 展开更多

关键词 植物精油 鸭疫里默氏菌 抑菌活性 最小抑菌浓度(MIC)

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鸭源大肠杆菌耐药表型及耐药基因分析 被引量：4

10

作者 焦凤超 李迎晓 +8 位作者 张迎冰 吴海港 刘锦妮 李洵 赵灿 曲哲会 易本驰 黄立 赵聘 《中国家禽》 北大核心 2019年第10期64-68,共5页

为了解鸭致病性大肠杆菌耐药表型及耐药基因的情况,选取信阳地区分离的11株致病性大肠杆菌,采用药敏纸片法对17种抗菌药物进行药敏试验,并对29种耐药基因进行PCR检测。结果显示:11株鸭源致病性大肠杆菌均表现为多重耐药,耐6、8、9种药... 为了解鸭致病性大肠杆菌耐药表型及耐药基因的情况,选取信阳地区分离的11株致病性大肠杆菌,采用药敏纸片法对17种抗菌药物进行药敏试验,并对29种耐药基因进行PCR检测。结果显示:11株鸭源致病性大肠杆菌均表现为多重耐药,耐6、8、9种药物的现象最为普遍。在检测的29种耐药基因中,最为流行的基因是AacC4和FloR基因,两种基因检出率均为100%。耐药基因与相关耐药菌株检出率基本呈正相关。表明11株鸭源致病性大肠杆菌耐药性高,耐药谱广,携带耐药基因现象普遍,结果为鸭致病性大肠杆菌的耐药现状与临床用药提供理论指导。 展开更多

关键词 大肠杆菌 耐药性表型 耐药基因

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鸡骨髓源造血干细胞的体外培养及分化诱导

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作者 何书海 张晒 +4 位作者 焦凤超 位格格 王旭 黄守孝 董建国 《中国家禽》 北大核心 2023年第10期6-11,共6页

为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34^(+)HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34^(+)HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培... 为获取鸡骨髓源造血干细胞(HSC)和建立其体外培养方法,试验从鸡长骨中获取骨髓单个核细胞,流式细胞术分选出CD34^(+)HSC后,在体外进行培养和诱导分化,进一步观察CD34^(+)HSC的形态、生长状态、集落形成能力和分化能力。结果显示:IMDM培养基中添加50 ng/mL干细胞生长因子、30 ng/mL Flt-3配体、10μg/mL白细胞介素-3、50 ng/mL白细胞介素-6以及20%鸡血清可维持鸡CD34^(+)HSC的短期体外培养,最长可存活10 d。将上述培养体系加入到甲基纤维素半固体培养基中,可使鸡CD34^(+)HSC形成典型的干细胞克隆集落;在上述培养体系中加入50 ng/mL血小板生成素和80 ng/mL的粒细胞集落刺激因子,可诱导鸡CD34^(+)HSC向粒系细胞分化。瑞氏-姬姆萨染色结果显示,鸡CD34^(+)HSC的胞核较大,呈蓝紫色,核染色质细而分散,胞浆呈浅蓝色,均匀无颗粒。研究提示:在培养体系中添加鸡造血细胞生长因子,可实现鸡骨髓源CD34+HSC的体外扩增和定向诱导分化。 展开更多

关键词 鸡 骨髓 造血干细胞 分离培养 分化诱导

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病死蓝孔雀胚中细菌的分离与鉴定

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作者 焦凤超 李迎晓 +7 位作者 李洵 徐光科 赵瑜 饶丹 刘锦妮 吴海港 黄立 赵聘 《家禽科学》 2021年第4期33-37,共5页

2019~2020年,河南省某蓝孔雀繁育基地连续出现死胚增多、出雏率下降等情况,通过对送检蓝孔雀死胚进行细菌病原学检测,结果共检出绿脓杆菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌和奇异变形杆菌四种细菌,分离率分别为38.82%、17.65%、17.65%和16.47%。... 2019~2020年,河南省某蓝孔雀繁育基地连续出现死胚增多、出雏率下降等情况,通过对送检蓝孔雀死胚进行细菌病原学检测,结果共检出绿脓杆菌、大肠杆菌、阴沟肠杆菌和奇异变形杆菌四种细菌,分离率分别为38.82%、17.65%、17.65%和16.47%。其中绿脓杆菌和大肠杆菌混合感染分离率为16.47%、绿脓杆菌和奇异变形杆菌混合感染分离率为10.59%、奇异变形杆菌和大肠杆菌混合感染分离率为5.88%。由此可见,四种细菌单独或混合感染可能是引起该孵化场死胚增多、出雏率下降的主要原因。 展开更多

关键词 蓝孔雀 绿脓杆菌 大肠杆菌 阴沟肠杆菌 奇异变形杆菌 分离 鉴定

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蜂毒素对热应激淮南麻鸭生产性能和免疫器官氧化应激的影响 被引量：3

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作者 李治利 秦清明 +5 位作者 李新玉 冯智园 易先国 张自富 祝发明 唐雪峰 《中国家禽》 北大核心 2022年第7期50-56,共7页

为研究蜂毒素对热应激淮南麻鸭生产性能和免疫器官抗氧化能力的影响,试验将320只20日龄雄性淮南麻鸭随机分为4组,每组4个重复,每个重复20只鸭。热应激组饲喂基础日粮,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂添加0.08 g/kg、0.12 g/kg和0.16 g/kg蜂毒素的... 为研究蜂毒素对热应激淮南麻鸭生产性能和免疫器官抗氧化能力的影响,试验将320只20日龄雄性淮南麻鸭随机分为4组,每组4个重复,每个重复20只鸭。热应激组饲喂基础日粮,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组分别饲喂添加0.08 g/kg、0.12 g/kg和0.16 g/kg蜂毒素的基础日粮。每天进行4 h热应激处理(温度36~38℃,相对湿度60%~70%),持续15 d,采集胸腺、脾脏和法氏囊,计算器官指数,检测胸腺、脾脏和法氏囊中谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)mRNA相对表达水平,以及谷胱甘肽(GSH)和SOD活性以及丙二醛(MDA)浓度。结果显示:添加蜂毒素对热应激鸭平均采食量、平均日增重、料肉比,以及胸腺、脾脏和法氏囊指数无显著性影响(P>0.05);与热应激组相比,Ⅰ组脾脏GSH-Px、SOD和CAT mRNA相对表达量显著增加,脾脏MDA含量显著降低(P<0.05),Ⅱ组胸腺和脾脏GSH-Px、SOD和CAT与法氏囊SOD mRNA相对表达量、SOD活性均显著增加及脾脏MDA含量显著降低(P<0.05),Ⅲ组热应激鸭胸腺和法氏囊SOD mRNA相对表达量显著增加(P<0.05)。综上,饲粮添加蜂毒素能提高热应激淮南麻鸭的抗氧化能力,缓解热应激导致的氧化应激损伤,以添加0.12 g/kg蜂毒素为宜。 展开更多

关键词 蜂毒素 热应激 淮南麻鸭 免疫器官 抗氧化指标

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鸭坦布苏病毒NS1蛋白的原核表达与多克隆抗体制备 被引量：2

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作者 张喜文 鲁绍芳 +8 位作者 李盼盼 冉梦媛 李卓燕 焦凤超 董建国 黄立 赵聘 曲哲会 时代 《养殖与饲料》 2023年第4期19-25,共7页

[目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因,连接至重组表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)... [目的]利用原核表达系统制备鸭坦布苏病毒(duck Tembusu virus,DTMUV)NS1蛋白及其多克隆抗体。[方法]利用PCR与核苷酸序列测定方法克隆DTMUV NS1基因,连接至重组表达载体p ET-30a(+),构建重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞,SDS-PAGE和Western blot进行IPTG诱导表达产物分析与鉴定,从IPTG的浓度和诱导时间进行表达条件优化,并进行表达产物可溶性分析,重组DTMUV NS1蛋白经亲和层析纯化后免疫小鼠,制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,并通过间接免疫荧光试验(IFA)鉴定。[结果]成功克隆DTMUV NS1基因,约1065 bp,获得重组质粒p ET-NS1,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)后,可见分子质量约43 ku的特异蛋白,可以与鸡抗DTMUV多克隆抗体发生免疫反应,终浓度为0.8 mmol/L的IPTG诱导2~5 h为DTMUV NS1蛋白最佳表达条件,呈包涵体形式表达,经亲和层析纯化后,成功获得分子质量约43ku的NS1蛋白,蛋白质量浓度为329μg/m L,鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体可以与DTMUV发生特异性免疫反应。[结论]本研究利用原核表达系统表达和纯化DTMUV NS1蛋白,并制备鼠抗DTMUV NS1蛋白多克隆抗体,可为DTMUV致病机制研究和免疫学检测方法建立提供物质材料与技术指导。 展开更多

关键词 鸭坦布苏病毒 NS1蛋白 原核表达系统 多克隆抗体

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广东佛山地区鸭圆环病毒分子流行株遗传变异分析 被引量：3

15

作者 武娴 鲁绍芳 +4 位作者 陈帅 王梦瑶 李梦莉 赵瑜 张喜文 《畜禽业》 2023年第5期10-14,共5页

目的研究广东佛山地区鸭圆环病毒(DuCV)流行毒株的遗传变异情况。方法采用常规PCR方法,对采自广东佛山的3份阳性鸭组织样品中扩增Rep基因部分片段和Cap基因,进行核苷酸序列测序,并将Rep基因部分片段、Cap基因推导的氨基酸序列与30株参... 目的研究广东佛山地区鸭圆环病毒(DuCV)流行毒株的遗传变异情况。方法采用常规PCR方法,对采自广东佛山的3份阳性鸭组织样品中扩增Rep基因部分片段和Cap基因,进行核苷酸序列测序,并将Rep基因部分片段、Cap基因推导的氨基酸序列与30株参考序列进行同源性比较和遗传变化分析。结果3份阳性样品分别扩增出相应的基因片段;Rep基因部分片段、Cap基因推导的氨基酸序列进化树和同源性分析显示,3株DuCV流行株与台湾株(AY3947213)在同一进化支,均属于DuCV-2型,与同分支的参考毒株相似性分别为97.2%~100%和96.9%~100%,2个基因型中Rep基因同源性高于Cap基因;氨基酸序列的变异分析表明,与中国台湾株(AY3947213)相比较,Rep部分氨基酸和Cap氨基酸分别发生相同位置的氨基酸置换和单独突变,Cap氨基酸突变位点多于Rep氨基酸。结论研究测得的3株DuCV流行株均属于DuCV-2型,在广东地区有一定范围的流行,且CAP蛋白的变异程度高于REP蛋白,为鸭圆环病毒感染的监控和诊断提供了依据。 展开更多

关键词 鸭圆环病毒 Rep基因 Cap基因

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