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鲤RNF14基因的生物学功能及其对病原刺激的免疫响应
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作者 张美娜 张子豪 +8 位作者 洪佳乐 郭朝辉 李海洁 于光晴 董鹏生 黄小城 杨振江 王延晖 刘变枝 《河南农业大学学报》 北大核心 2025年第2期255-265,共11页
【目的】探究鲤环指蛋白14(ring finger protein 14,RNF14)基因的生物学功能,为阻断鲤春季病毒血症病毒(spring viremia of Cyprinus carpio virus, SVCV)感染提供新思路。【方法】采用PCR技术、生物信息学分析和实时荧光定量PCR方法,对... 【目的】探究鲤环指蛋白14(ring finger protein 14,RNF14)基因的生物学功能,为阻断鲤春季病毒血症病毒(spring viremia of Cyprinus carpio virus, SVCV)感染提供新思路。【方法】采用PCR技术、生物信息学分析和实时荧光定量PCR方法,对鲤RNF14基因功能进行初步分析,研究其在病毒刺激后的表达规律。【结果】鲤RNF14基因编码区全长1 362 bp,编码453个氨基酸;鲤RNF14与犀角金线鲃亲缘关系较近,与原鸽亲缘关系较远;该蛋白属酸性不稳定亲水性蛋白;功能结构域预测显示该蛋白为典型的RBR E3s;泛素化底物分析结果显示,该蛋白与RBCK1、Nedd4l、Notch1a等蛋白相互作用的置信度较高。组织表达谱分析表明,鲤RNF14基因在各组织或器官中广泛表达,以心脏中相对表达量最高。与对照组相比,高剂量SVCV在体感染鲤24 h后,RNF14基因的mRNA表达水平在肌肉中显著升高;多肌胞苷酸(polyinosinic acid-polycytidylic acid,ploy(I:C))在体刺激鲤24 h后,RNF14基因的mRNA表达水平在肾脏和头肾中显著升高。与对照组相比,低剂量SVCV和poly(I:C)离体刺激下,鲤RNF14基因mRNA表达水平在各取样时间点均极显著升高。在体和离体病原刺激结果表明,鲤RNF14基因参与了病原刺激后的免疫应答过程,提示鲤RNF14基因可能是阻断SVCV感染的潜在靶点。【结论】成功克隆了鲤RNF14基因的基因编码区,揭示了鲤RNF14基因在SVCV和poly(I:C)刺激下免疫响应规律。 展开更多
关键词 环指蛋白14 生物信息学 鲤春季病毒血症病毒 多肌胞苷酸 病原刺激 免疫响应
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鲤RNF2基因的克隆、组织表达与生物信息学分析 被引量:4
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作者 刘变枝 李海洁 +5 位作者 郭家鸿 郭朝辉 冯建新 杨雪冰 张娇 李明 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 2021年第3期468-476,484,共10页
以鲤肾脏组织RNA为模板,扩增并克隆鲤环指蛋白2(RING Finger Protein 2,RNF2)基因的CDS区全长,分析其组织表达谱。结果显示,鲤RNF2基因的CDS区序列长1011 bp,编码336个氨基酸;该基因与鲫、斑马鱼、金头鲷、海洋青鳉鱼、鳕鱼、非洲爪蟾... 以鲤肾脏组织RNA为模板,扩增并克隆鲤环指蛋白2(RING Finger Protein 2,RNF2)基因的CDS区全长,分析其组织表达谱。结果显示,鲤RNF2基因的CDS区序列长1011 bp,编码336个氨基酸;该基因与鲫、斑马鱼、金头鲷、海洋青鳉鱼、鳕鱼、非洲爪蟾、尖尾娇鹟、小鼠、智人的同源性分别为98.2%、93.1%、78.0%、79.2%、79.2%、73.9%、78.1%、72.7%、72.7%;理化性质分析表明,RNF2蛋白分子质量为37.44 kD,理论等电点(pI)为6.28,脂肪系数为74.97%,不稳定指数为36.75,无跨膜结构和信号肽;亚细胞定位预测分析表明,该蛋白定位于细胞核(52.2%)、线粒体(26.1%)、细胞质(17.4%)和过氧化物酶体(4.3%)。蛋白质结构域分析表明该蛋白含RING结构域和RAWUL结构域,且RING结构域与斑马鱼、小鼠和智人完全一致;二级结构和三级结构表明,鲤鱼RNF2蛋白含有α-螺旋(35.12%)、延伸链(8.63%)、β-转角(0.89%)和无规则卷曲(55.36%);泛素化底物预测显示,TP53、IRF4、HIST2H2AC、H3F3B和HIST3H3作为RNF2蛋白的底物具有较高的置信度;实时荧光定量PCR结果显示,鲤RNF2基因在肌肉中表达量最高,其次是头肾和肝脏,在肾脏中表达量最低。这些结果为进一步研究RNF2在鲤鱼抗病毒应答中的作用提供了基础信息。 展开更多
关键词 RNF2基因 克隆鉴定 生物信息学分析 组织表达
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