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siRNA干扰缺氧诱导因子-2α对乳腺癌细胞增殖能力的影响 被引量:10
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作者 李娜 王洪兴 +2 位作者 张洁 李永真 千新来 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期6-9,共4页
目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factors-2α,HIF-2α)siRNA对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响及相关机制。方法采用CoCl2处理细胞,建立细胞缺氧模型,应用RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中HIF-2α的表达;运用RT-PCR技术检测转染... 目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia-inducible factors-2α,HIF-2α)siRNA对乳腺癌细胞MCF-7增殖能力的影响及相关机制。方法采用CoCl2处理细胞,建立细胞缺氧模型,应用RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中HIF-2α的表达;运用RT-PCR技术检测转染后MCF-7细胞中HIF-2αmRNA的表达;绘制细胞生长曲线,观察细胞生长速度和倍增时间;通过流式细胞术观察细胞周期分布的改变;采用RT-PCR技术检测增殖相关基因的表达。结果细胞缺氧模型建立成功。RNA干扰结果显示:缺氧+siRNA组HIF-2αmRNA的表达与单纯缺氧组相比明显降低(P<0.05);细胞生长曲线结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,细胞生长速度明显减慢,倍增时间显著延长(P均<0.05);细胞周期结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,S期和G2/M期细胞比例显著减少(P<0.05);RT-PCR结果显示:缺氧+siRNA组与单纯缺氧组相比,p21基因表达上调(P<0.05),Cyclin B基因表达下调(P<0.05)。结论 HIF-2αsiRNA可抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖能力,可能与p21基因表达上调、Cyclin B基因表达下调有关。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 缺氧诱导因子2α RNA干扰 CoCl2 增殖
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青年人大肠癌细胞p53蛋白表达和DNA的定量研究 被引量:7
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作者 朱武凌 张祥宏 +4 位作者 杜华贞 严霞 王俊灵 谢同欣 王凤荣 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 1998年第5期475-477,共3页
目的:研究青年人大肠癌抑癌基因p53蛋白的表达和细胞DNA含量。方法:采用流式细胞光度术(FCM)。结果:青年组大肠癌细胞DI值(1.30±0.17)显著大于老年癌组(1.10±0.09)(P<0.01),且... 目的:研究青年人大肠癌抑癌基因p53蛋白的表达和细胞DNA含量。方法:采用流式细胞光度术(FCM)。结果:青年组大肠癌细胞DI值(1.30±0.17)显著大于老年癌组(1.10±0.09)(P<0.01),且细胞增殖指数(PI)亦明显大于后者(24.9%±6.5%vs20.2%±4.7%)(P<0.05)。青年组大肠癌中DNA异倍体癌发生率为87.1%(27/31),而老年癌组仅为28.6%(4/14),两者之间差别有高度显著性(P<0.001)。p53蛋白表达量青年患者(FI=1.34±0.26)显著大于老年患者(FI=1.15±0.25)(P<0.01)。在青年大肠癌中,粘液癌和侵犯周围软组织者,其p53蛋白的阳性表达率(100%,95%)分别高于腺癌和浸润较浅者(67%,58%)(P<0.05),而且低分化癌和有局部淋巴转移者p53蛋白的表达阳性率(93%,100%)也较高、中分化癌和无局部淋巴结转移者(69%,68%)为高。结论:在DNA水平上,青年大肠癌的恶性程度高于老年大肠癌;p53蛋白的高表达可能是造成青年大肠癌恶性度高的原因之一。 展开更多
关键词 流式细胞术 大肠肿瘤 P53基因 DNA定量
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lncRNA FOXCUT-mRNA FOXC1基因对对乳腺癌增殖能力的影响 被引量:6
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作者 梁文辉 李娜 +3 位作者 李永真 原志庆 王志慧 陆漫漫 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期585-588,共4页
目的探讨转录因子叉头框蛋白C1(forkhead box Fox C1,FOXC1)基因和FOXC1基因启动子上游转录体(FOXC1 promoter upstream transcript,FOXCUT)对乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法采用RNAi技术沉默乳腺癌MCF-7细胞中FOXC1及FOXCUT的表达,采... 目的探讨转录因子叉头框蛋白C1(forkhead box Fox C1,FOXC1)基因和FOXC1基因启动子上游转录体(FOXC1 promoter upstream transcript,FOXCUT)对乳腺癌细胞增殖能力的影响。方法采用RNAi技术沉默乳腺癌MCF-7细胞中FOXC1及FOXCUT的表达,采用Real-time PCR和Western blot技术分别检测FOXC1及FOXCUT mRNA和蛋白的表达。采用CCK-8法检测FOXC1 siRNA和FOXCUT siRNA转染后MCF-7细胞增殖能力的变化。结果 Real-time PCR结果显示,FOXC1 siRNA转染MCF-7细胞后,FOXC1 mRNA的表达水平显著低于对照组( P <0.01),FOXCUT mRNA的表达水平无明显降低,而FOXCUT siRNA转染MCF-7细胞后,FOXC1 mRNA及FOXCUT mRNA的表达水平均显著降低( P <0.01);Western blot结果显示,FOXC1 siRNA和FOXCUT siRNA转染MCF-7细胞后,FOXC1的蛋白表达水平显著下调( P <0.01)。CCK-8检测结果显示,转染FOXC1 siRNA和FOXCUT siRNA后,MCF-7细胞的增殖活性明显受到抑制( P <0.01)。结论 FOXC1及FOXCUT可以通过FOXC1-FOXCUT“基因对”的形式调控乳腺癌细胞的增殖。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 FOXC1 FOXCUT RNA干扰 细胞增殖
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沉默缺氧诱导因子-2α对乳腺癌细胞化疗敏感性的影响 被引量:7
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作者 李娜 贺国洋 +1 位作者 李永真 王志慧 《临床与实验病理学杂志》 CSCD 北大核心 2017年第5期501-504,共4页
目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)siRNA对人乳腺癌细胞增殖及化疗药物敏感性的影响。方法 RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中HIF-2α的表达;采用免疫细胞化学和RT-PCR法检测转染后HIF-2α基因的表达,Co C_l2... 目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)siRNA对人乳腺癌细胞增殖及化疗药物敏感性的影响。方法 RNA干扰技术沉默MCF-7细胞中HIF-2α的表达;采用免疫细胞化学和RT-PCR法检测转染后HIF-2α基因的表达,Co C_l2模拟缺氧条件下,采用MTT比色法和流式细胞术检测不同剂量的化疗药物(5-氟尿嘧啶、阿霉素和紫杉醇)在HIF-2α沉默后对细胞生长抑制率和细胞凋亡的影响。结果经HIF-2αsiRNA处理的MCF-7细胞中HIF-2α基因表达明显下调(P<0.05),HIF-2αsiRNA处理的MCF-7细胞在不同剂量化疗药物作用后,细胞生长抑制率和细胞凋亡率与对照组相比其明显增加,化疗药物敏感性明显增强(P<0.05)。结论 HIF-2αsiRNA具有促进化疗药物诱导乳腺癌MCF-7细胞凋亡、抑制增殖及增强化疗药物敏感性的作用,沉默HIF-2α有望成为乳腺癌基因治疗的新途径。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 缺氧诱导因子-2Α RNA干扰 化疗敏感性
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癌基因c-erbB-2与肿瘤 被引量:7
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作者 朱武凌 李钦选 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 1998年第1期79-81,共3页
癌基因c┐erbB┐2与肿瘤朱武凌李钦选综述杜华贞和瑞芝审校作者单位:河南省新乡医学院病理学教研室453003作者简介:朱武凌,男,27岁,硕士。研究方向:消化道恶性肿瘤基因表达及癌的阻断和瑞芝,女,57岁,教授,享... 癌基因c┐erbB┐2与肿瘤朱武凌李钦选综述杜华贞和瑞芝审校作者单位:河南省新乡医学院病理学教研室453003作者简介:朱武凌,男,27岁,硕士。研究方向:消化道恶性肿瘤基因表达及癌的阻断和瑞芝,女,57岁,教授,享受国务院特殊津贴。研究方向:食管癌... 展开更多
关键词 肿瘤 癌基因 C-ERBB-2基因 p18基因
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乳腺癌组织中FOXC1与FOXCUT的表达及意义 被引量:5
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作者 梁文辉 李娜 +3 位作者 李永真 原志庆 王志慧 陆漫漫 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期722-724,共3页
目的探讨转录因子叉头框蛋白C1(FOXC1)及FOXC1基因启动子上游转录体(FOXCUT)在乳腺癌组织中的表达及意义。方法 采用Western blot和免疫组化SP法检测65例乳腺癌组织中FOXC1蛋白的表达;采用Real-time PCR法检测FOXC1和FOXCUT mRNA在乳腺... 目的探讨转录因子叉头框蛋白C1(FOXC1)及FOXC1基因启动子上游转录体(FOXCUT)在乳腺癌组织中的表达及意义。方法 采用Western blot和免疫组化SP法检测65例乳腺癌组织中FOXC1蛋白的表达;采用Real-time PCR法检测FOXC1和FOXCUT mRNA在乳腺癌组织中的表达,并分析两者mRNA表达的相关性。结果 Western blot和免疫组化染色结果均显示,FOXC1蛋白在乳腺癌组织中的表达显著高于癌旁组织中的表达( P <0.01);Real-time PCR结果显示,与癌旁组织相比,乳腺癌组织中FOXC1 mRNA(5.211±1.555,中位数5.24,95% CI 为4.82~5.59)和FOXCUT mRNA(4.339±0.799,中位数4.17,95% CI 为4.14~4.53)表达量显著上升。相关性分析结果显示,FOXC1与FOXCUT在乳腺癌组织中的表达呈正相关性( r =0.500, P <0.001)。结论 乳腺癌组织中FOXC1和FOXCUT的表达高于癌旁组织,FOXC1与FOXCUT在乳腺癌组织中表达趋势具有相关性,两者可能以基因对形式的发挥功能。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 叉头框蛋白C1基因 FOXCUT 免疫组织化学
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缺氧诱导因子-2α与MMP-2启动子结合位点的确定 被引量:2
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作者 梁文辉 原志庆 +1 位作者 王志慧 李娜 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期46-49,共4页
目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)与基质金属蛋白酶-2(matrixmetallo proteinases-2,MMP-2)基因中缺氧反应元件(hypoxia-response element,HRE)的体外结合,并确定该结合位点。方法采用凝胶滞留电泳迁移... 目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoxia inducible factor-2α,HIF-2α)与基质金属蛋白酶-2(matrixmetallo proteinases-2,MMP-2)基因中缺氧反应元件(hypoxia-response element,HRE)的体外结合,并确定该结合位点。方法采用凝胶滞留电泳迁移率实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)鉴定HIF-2α与MMP-2基因中HRE的体外结合;同时利用染色质免疫沉淀技术(chromatin immunoprecipitation assay,CHIP)进一步验证并确定该结合位点。结果成功预测2条MMP-2启动子区潜在的HIF-2α结合位点,分别为-217^-204、-1 029^-1 007;探针标记效率检测结果显示,正义链和反义链标记效率均为50%以上,可用于EMSA实验;结果显示,MMP-2启动子区存在HIF-2α的结合位点,位于-217^-204。CHIP结果显示,实验组和对照组均扩增出约250 bp MMP-2启动子中含HRE区域的片段,提示HIF-2α蛋白与MMP-2启动子中的HRE区域存在活体内结合的关系。结论 HIF-2α与MMP-2基因中的HRE存在体内外结合。 展开更多
关键词 缺氧诱导因子2α MMP-2 缺氧反应元件 MCF-7细胞
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人黑色素瘤细胞侵袭转移恶性表型获得的分子学基础 被引量:5
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作者 杨廷桐 范琦芳 +1 位作者 郑杰 吴秉铨 《眼科新进展》 CAS 2000年第5期325-327,共3页
目的 探讨具有不同潜在转移能力的黑色素瘤细胞恶性表型的演进及其侵袭转移的机制。方法 采用细胞培养 ,p5 3蛋白免疫组化染色 ,PCR- SSCP检测 ,流式细胞术(PCM) ,蛋白酶活性分析 (Zymography)及裸鼠体内异种接种实验。结果 人黑色... 目的 探讨具有不同潜在转移能力的黑色素瘤细胞恶性表型的演进及其侵袭转移的机制。方法 采用细胞培养 ,p5 3蛋白免疫组化染色 ,PCR- SSCP检测 ,流式细胞术(PCM) ,蛋白酶活性分析 (Zymography)及裸鼠体内异种接种实验。结果 人黑色素瘤细胞中存在有 p5 3基因的突变 ,瘤细胞表面 6 7KD L N- R的荧光阳性率和全部细胞的平均荧光强度大小顺序为 WM45 1>WM983A>WM1341B>WM35。金属蛋白酶 (MMPs)的产生情况为 :早期 WM35不产生 MMPs;WM1341B仅产生 72 KDa(MMP- 2 ) ,不产生 92 KDa(MMP- 9) ;进展期 WM983A和远处转移瘤株 WM45 1均产生 72 KDa和 92 KDa。WM983A和 WM45 1也可见在裸鼠体内形成明显的转移瘤。结论  p5 3基因突变 ,MMPs的产生和细胞表面 6 7KD L N- 展开更多
关键词 黑色素瘤 瘤细胞 P53基因 金属蛋白酶
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乳腺癌中缺氧诱导因子-2α与MMP-2的表达及意义 被引量:1
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作者 王洪兴 张洁 +1 位作者 贺国洋 李娜 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期257-260,共4页
目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoia-inducible factor-2α,HIF-2α)与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在乳腺癌中的表达及意义。方法 (1)采用免疫组化SP法检测47例乳腺癌标本及30例癌旁组织中HIF-2α和MMP-2的表达,... 目的探讨缺氧诱导因子-2α(hypoia-inducible factor-2α,HIF-2α)与基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在乳腺癌中的表达及意义。方法 (1)采用免疫组化SP法检测47例乳腺癌标本及30例癌旁组织中HIF-2α和MMP-2的表达,分析其表达与乳腺癌临床病理特征的关系及二者表达的相关性;(2)采用Western blot法检测不同转移潜能乳腺癌细胞株中HIF-2α和MMP-2的表达,分析其表达与乳腺癌转移潜能的关系。结果 (1)HIF-2α蛋白在乳腺癌组织中的阳性率高于癌旁组织(P<0.05),且其高表达与肿瘤大小、分期及淋巴结转移均密切相关(P均<0.05)。MMP-2蛋白在乳腺癌组织中的阳性率高于癌旁组织(P<0.05),且其低表达与肿瘤的淋巴结转移均密切相关(P<0.05);HIF-2α蛋白与MMP-2的表达呈正相关(P<0.05)。(2)Western blot法检测结果提示与低转移乳腺癌细胞相比,高转移潜能乳腺癌细胞中HIF-2α和MMP-2的表达均明显升高。结论 HIF-2α和MMP-2的过表达可能与乳腺癌的侵袭、转移有关。二者有望成为判定乳腺癌侵袭和转移能力的指标。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 缺氧诱导因子-2α基质金属蛋白酶-2 免疫组织化学 WESTERN BLOT
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食管癌切缘残留癌发生途径及其生物学特性的研究
10
作者 原志庆 千高峰 +4 位作者 和瑞芝 王凤荣 吴国祥 左连富 王玉峰 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1993年第2期133-134,136,共3页
本文应用流式细胞术,对食管癌切缘残留癌(RT)与其相应的主体癌和癌中心与癌前缘之间的DNA含量(DI)、异倍体(AN)率和细胞增殖指数(PI)进行了定量研究和比较分析。结果表明,RT的DI、AN率和PI显著低于主体癌(P<0.001);而癌中心与癌前缘... 本文应用流式细胞术,对食管癌切缘残留癌(RT)与其相应的主体癌和癌中心与癌前缘之间的DNA含量(DI)、异倍体(AN)率和细胞增殖指数(PI)进行了定量研究和比较分析。结果表明,RT的DI、AN率和PI显著低于主体癌(P<0.001);而癌中心与癌前缘之间无显著差异(P>0.05)。提示多数RT可能为多中心起源所致。文中对RT的生物学行为进行初步探讨。 展开更多
关键词 切缘 残留癌 流式细胞术 食管肿瘤
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改造的人乳头瘤病毒16型E6/E7融合蛋白疫苗抗肺癌作用的实验研究
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作者 周小山 赵清正 +2 位作者 千新来 许春雷 陆元志 《中国肺癌杂志》 CAS 2004年第5期379-382,共4页
目的 研究经改造的HPV16E6/E7蛋白质疫苗 (HPV 16mE6Δ/mE7)对表达HPV16E6和E7的小鼠肺癌细胞的体内生长抑制作用 ,为肺癌免疫治疗提供新线索。方法 预防性实验 :对C5 7BL/6小鼠先进行免疫 ,然后接种表达HPV 16E6和E7癌蛋白的TC 1肿... 目的 研究经改造的HPV16E6/E7蛋白质疫苗 (HPV 16mE6Δ/mE7)对表达HPV16E6和E7的小鼠肺癌细胞的体内生长抑制作用 ,为肺癌免疫治疗提供新线索。方法 预防性实验 :对C5 7BL/6小鼠先进行免疫 ,然后接种表达HPV 16E6和E7癌蛋白的TC 1肿瘤细胞 ;第 3 3天 ,对未出瘤小鼠进行第二次大剂量肿瘤细胞攻击。治疗性实验 :C5 7BL/6小鼠先接种TC 1细胞 ,然后进行两次免疫治疗 ,再对未出瘤小鼠进行第二次大剂量TC 1细胞攻击实验。计算各组肿瘤发生率、肿瘤体积。采用MTT方法检测淋巴细胞增殖反应。结果 预防性实验 :在 10 0天的观察时间内 ,免疫组小鼠可以有效抵抗第一、二次肿瘤细胞攻击 ,所有小鼠均未见肿瘤发生 ;而PBS组及单纯佐剂组小鼠在第一次肿瘤细胞接种后 6~ 12天内均有肿瘤形成 ,3 0天内因肿瘤负荷出现衰竭。在治疗性实验中 ,免疫组、PBS组、单纯佐剂组小鼠成瘤率分别为 2 0 %、90 %、60 % ;第二次攻击实验中 ,免疫组仍有 87.5 %的小鼠无肿瘤生长 ,而其他两组动物在 4~ 6天内均有肿瘤形成。MTT实验表明经mE6Δ/mE7免疫的小鼠脾淋巴细胞增殖反应明显强于对照组。结论 经改造的HPV16型mE6Δ/mE7蛋白质疫苗对于实验动物肺癌有较好的抑制作用 。 展开更多
关键词 肺肿瘤 HPV16 E6/E7病毒蛋白 免疫治疗
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