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鸡MOGAT和DGAT基因的克隆及表达特性研究 被引量:6
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作者 田方圆 王台安 +5 位作者 李艳敏 李翠翠 马峥 康相涛 田亚东 刘小军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期214-224,共11页
本研究旨在探讨鸡MOGAT和DGAT基因的表达和调控特性。首先克隆了具有MOGAT活性的MOGAT1、MOGAT2、LPGAT1和具有DGAT活性的DGAT2和SOAT1对应基因的编码区序列,并对其组织表达特性进行了研究;其次选取产蛋前期母鸡和产蛋高峰期母鸡作为试... 本研究旨在探讨鸡MOGAT和DGAT基因的表达和调控特性。首先克隆了具有MOGAT活性的MOGAT1、MOGAT2、LPGAT1和具有DGAT活性的DGAT2和SOAT1对应基因的编码区序列,并对其组织表达特性进行了研究;其次选取产蛋前期母鸡和产蛋高峰期母鸡作为试验材料,利用实时荧光定量PCR技术分析不同生理时期鸡肝中这些基因的表达变化规律;在此基础上利用雌激素处理的体内、体外试验,分析这些基因的表达调控机制。结果表明,鸡MOGAT1、MOGAT2、LPGAT1、DGAT2和SOAT1基因在各组织中表现出广泛表达的特性,并在脂类代谢旺盛的器官如肝、肾、小肠(十二指肠、空肠、回肠)等器官中表达较高,但DGAT2基因在鸡肝中的表达量较低,而MOGAT2基因主要在鸡小肠组织(十二指肠、空肠、回肠)中表达,MOGAT1在除胰腺外的大部分组织中都有表达;产蛋高峰期母鸡肝中MOGAT1、LPGAT1和SOAT1的表达量均显著低于产蛋前期母鸡;经不同浓度雌激素处理后,这些基因在鸡肝、十二指肠、肾以及鸡胚肝原代细胞中的表达量维持不变或显著下调。综上所述,已知的甘油三酯合成的单酰甘油通路中相关基因不是鸡肝TG合成代谢中的限速基因,在雌激素诱导的鸡TG合成代谢中,单酰甘油通路不发挥主导作用。 展开更多
关键词 脂类代谢 甘油三酯 雌激素 MOGAT基因 DGAT基因
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lncLER在卢氏绿壳蛋鸡肝脏中表达调控的研究 被引量:4
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作者 顾真真 李红 +6 位作者 刘乙 谭文波 任俊晓 李艳敏 李转见 田亚东 刘小军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第4期973-979,共7页
长链非编码RNA(lncRNA)在许多生物学过程中发挥着重要的调节作用。河南农业大学家禽种质资源创新工程研究中心通过对产蛋前期(20周龄)和产蛋高峰期(30周龄)卢氏绿壳蛋母鸡肝脏组织的转录组分析,筛选出了一个在产蛋高峰期母鸡肝脏中表达... 长链非编码RNA(lncRNA)在许多生物学过程中发挥着重要的调节作用。河南农业大学家禽种质资源创新工程研究中心通过对产蛋前期(20周龄)和产蛋高峰期(30周龄)卢氏绿壳蛋母鸡肝脏组织的转录组分析,筛选出了一个在产蛋高峰期母鸡肝脏中表达水平显著上调的lncRNA(lncLER)。本研究利用半定量PCR(RT-PCR)、实时荧光定量PCR分析了lncLER在卢氏绿壳蛋母鸡不同发育时期和不同组织中的表达规律,并从个体和细胞水平研究了体内、体外雌激素处理对lncLER表达的影响。结果表明,lncLER在卢氏绿壳蛋母鸡各组织中均有不同程度的表达,且在产蛋高峰期肝脏中的表达量较高;雌激素在个体和细胞水平可显著上调lncLER的表达。本试验初步阐明了lncLER基因在卢氏绿壳蛋母鸡中的表达调控规律,为进一步研究lncLER在鸡产蛋过程中的生物学功能奠定了基础。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 卢氏绿壳蛋鸡 雌激素 肝脏 表达调控
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鸡Visfatin蛋白的原核表达、纯化及其活性研究 被引量:2
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作者 张盼盼 商鹏飞 +6 位作者 田方圆 韩瑞丽 蒋瑞瑞 孙桂荣 康相涛 刘小军 田亚东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第9期1785-1794,共10页
本试验旨在通过克隆Visfatin基因,将其在原核表达系统中表达并纯化,通过3T3-L1细胞的分化验证其活性,成功获得鸡重组Visfatin蛋白。以AA肉仔鸡肝组织总RNA为模板,qRT-PCR扩增Visfatin基因,转化进入pGEM?-T载体,再与原核表达载体pET-30... 本试验旨在通过克隆Visfatin基因,将其在原核表达系统中表达并纯化,通过3T3-L1细胞的分化验证其活性,成功获得鸡重组Visfatin蛋白。以AA肉仔鸡肝组织总RNA为模板,qRT-PCR扩增Visfatin基因,转化进入pGEM?-T载体,再与原核表达载体pET-30a连接转化,获取含pET-30a-Visfatin重组质粒的E.coli BL21(DE3)表达菌株。以IPTG诱导重组菌株,优化表达条件,SDS-PAGE鉴定表达情况。采用镍离子亲和层析对Visfatin蛋白进行纯化,Western blot鉴定表达蛋白,并通过3T3-L1细胞的分化情况鉴定表达蛋白Visfatin的活性。结果,通过NcoⅠ、XhoⅠ酶切获得的结果与预期目的条带大小相符,成功构建pET-30a-Visfatin表达载体。SDSPAGE检测结果表明,在培养基pH为8.0,IPTG终浓度为0.4mmol·L-1,30℃条件下,诱导10~12h时可溶性蛋白表达量最大。通过镍离子层析纯化Visfatin蛋白,在SDS-PAGE的60ku处可见一条与预期一致的蛋白条带。Western blot证明纯化蛋白可与6*His标签特异性结合。油红O染色结果表明,与对照组相比Visfatin诱导的3T3-L1细胞有更多的脂滴形成。qRT-PCR结果显示,在3T3-L1细胞分化过程中,Visfatin作用下标志基因PPARγ、aP2、FAS和C/EBPα的表达量显著增加(P〈0.05)。本研究成功建立了一套标准化的鸡Visfatin重组蛋白表达程序,获得了具有生物活性的鸡Visfatin,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 鸡重组Visfatin 克隆 原核表达 条件优化 3T3-L1
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拷贝数变异在畜禽中的研究进展 被引量:4
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作者 经珍珠 秦盼盼 +8 位作者 陈冰洁 侯丹 魏成杰 李通 韩瑞丽 刘小军 田亚东 康相涛 李转见 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第7期2512-2522,共11页
拷贝数变异(copy number variation,CNV)具有多种形式的变异结构,在品种多样性、生物进化和疾病相关性等研究中起着重要作用,并具有片段长度大、覆盖范围广等特点。随着分子生物学的发展及DNA测序技术的日渐成熟,人们对遗传变异的研究... 拷贝数变异(copy number variation,CNV)具有多种形式的变异结构,在品种多样性、生物进化和疾病相关性等研究中起着重要作用,并具有片段长度大、覆盖范围广等特点。随着分子生物学的发展及DNA测序技术的日渐成熟,人们对遗传变异的研究不断向DNA分子水平深入,多态性标记在畜禽育种中已逐渐成为动物育种研究的趋势和主流。由于CNV对基因的调控和表达所造成的影响更为显著,因此,CNV在重要畜禽中的研究越来越多。目前,已检测出大量有关畜禽重要经济性状的基因序列变异,并有许多研究均表明CNV与动物的重要经济特征及疾病的发生有关。笔者主要通过参考国内外相关的研究报道,简述了CNV的相关研究背景、概念、突变机制,归纳总结了CNV对牛、羊、猪、鸡的经济性状、繁殖性状和疾病调控的影响,以期通过对这些重要畜禽的基因组学研究揭示其适应性遗传机理和表型性状差异的遗传基础,开发相应的分子遗传标记,为畜禽的标记辅助选育提供理论基础。 展开更多
关键词 拷贝数变异(CNV) 畜禽 生产性状
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基于GC-MS代谢组学技术对内脂素调控雏鸡采食机制的研究 被引量:1
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作者 刘雪莲 张盼盼 +8 位作者 田方圆 李准 李转见 韩瑞丽 孙桂荣 蒋瑞瑞 刘小军 康相涛 田亚东 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1251-1259,共9页
旨在探索内脂素(Visfatin)调控家禽采食的分子机制,为完善家禽的食欲调控和能量平衡理论奠定基础。选取1日龄罗曼褐健康雏鸡20只,随机分为4个处理(C、L、M、H组)。常规饲粮饲养至10日龄进行下丘脑导管埋置,通过脑室注射技术对雏鸡下丘... 旨在探索内脂素(Visfatin)调控家禽采食的分子机制,为完善家禽的食欲调控和能量平衡理论奠定基础。选取1日龄罗曼褐健康雏鸡20只,随机分为4个处理(C、L、M、H组)。常规饲粮饲养至10日龄进行下丘脑导管埋置,通过脑室注射技术对雏鸡下丘脑部位注射不同浓度的重组人内脂素(0、40、200、400ng)。脑室注射Visfatin60min后,记录各处理组累积采食量,并采集下丘脑组织,通过GC-MS系统进行代谢组学检测,建立PLS-DA模型,并将差异代谢物输入KEGG数据库进行代谢通路的构建。结果表明,脑室注射Visfatin 60min后,M组和H组的雏鸡累积采食量与C组相比均显著升高(P<0.05)。在对雏鸡下丘脑进行GC-MS代谢组学分析后,处理组与对照组间共鉴定获得73个差异性代谢物,富集到51条通路上。脑室注射Visfatin后下丘脑产生的差异性代谢物与氨基酸、糖和脂代谢有着密切的联系,其中脂肪酸合成通路被显著富集。结果提示,中枢营养物质下降导致稳态发生改变可能是Visfatin发挥促食作用的主要机制。 展开更多
关键词 VISFATIN 采食量 下丘脑 代谢组学
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鸟类Leptin及其受体的研究进展
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作者 王丹丹 李艳敏 +2 位作者 蒋瑞瑞 康相涛 刘小军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1905-1915,共11页
自1998年首次报道从鸡的肝组织中克隆获得"鸡Leptin基因"以来,鸡Leptin基因序列的正确性以及Leptin在家禽中的存在性就一直备受争议。虽然家禽Leptin受体的存在被广泛证实,但对其功能的研究也由于内源性Leptin的缺乏而受到限... 自1998年首次报道从鸡的肝组织中克隆获得"鸡Leptin基因"以来,鸡Leptin基因序列的正确性以及Leptin在家禽中的存在性就一直备受争议。虽然家禽Leptin受体的存在被广泛证实,但对其功能的研究也由于内源性Leptin的缺乏而受到限制。随着后基因组学研究时代的到来,使得在更大范围、更深层次上探寻鸟类Leptin基因的存在与否成为可能。2014年,3个独立的实验室先后报道了部分野生鸟类Leptin基因的克隆和功能验证,将鸟类Leptin及其受体的研究又推向了新的高潮。本文综述了鸟类Leptin及其受体基因的结构特征、起源进化、组织分布及"生理功能"的最新研究进展。 展开更多
关键词 鸟类 LEPTIN 基因克隆 起源进化 生理功能
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鸡QTL定位的研究进展
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作者 梁敏 康相涛 +4 位作者 田亚东 孙桂荣 韩瑞丽 孙宜梅 靳明明 《中国畜牧兽医》 CAS 2008年第11期85-87,共3页
近年来,对鸡的染色体上QTL定位工作有了迅猛的发展,成为动物基因定位工作中一个异常活跃的领域。对鸡数量性状的研究也已发展为直接将研究目标指向各个数量性状位点,借助各种遗传标记,构建遗传连锁图谱,通过一定的统计分析方法,从而将... 近年来,对鸡的染色体上QTL定位工作有了迅猛的发展,成为动物基因定位工作中一个异常活跃的领域。对鸡数量性状的研究也已发展为直接将研究目标指向各个数量性状位点,借助各种遗传标记,构建遗传连锁图谱,通过一定的统计分析方法,从而将影响数量性状的多个基因剖分开来,将其定位于特定的染色体区域。作者重点介绍了QTL定位的方法及鸡QTL定位的现状。 展开更多
关键词 标记-QTL连锁分析 QTL定位
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雌激素通过ER-α调控CYP2C8在鸡肝中的表达 被引量:10
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作者 李艳敏 李翠翠 +6 位作者 郑航 田方圆 王台安 田亚东 李转见 康相涛 刘小军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第12期2362-2369,共8页
本研究旨在探讨鸡CYP2C8基因的表达调控规律。采集30周龄卢氏绿壳蛋鸡心、肝、脾、肺、肾、胸肌、腹脂、肌胃、腺胃、卵巢、胰、十二指肠、空肠、回肠14种组织以及从1日龄~30周龄不同发育时期的肝组织,用荧光实时定量PCR分析CYP2C8基因... 本研究旨在探讨鸡CYP2C8基因的表达调控规律。采集30周龄卢氏绿壳蛋鸡心、肝、脾、肺、肾、胸肌、腹脂、肌胃、腺胃、卵巢、胰、十二指肠、空肠、回肠14种组织以及从1日龄~30周龄不同发育时期的肝组织,用荧光实时定量PCR分析CYP2C8基因的时空表达规律;用雌激素及其受体拮抗剂对活体和体外培养的鸡胚肝原代细胞进行处理,用荧光实时定量PCR分析CYP2C8基因的表达调控机制。结果表明,鸡CYP2C8基因在各组织中表现出广泛表达的特性,但在脂类代谢旺盛的器官如肝、肾、小肠(十二指肠、空肠、回肠)等器官中表达较高,且在肝中的表达水平随着性成熟而显著升高(P〈0.01);雌激素处理可显著提高鸡肝组织和体外培养的鸡胚胎肝原代细胞中CYP2C8的表达水平(P〈0.05),但雌激素受体ER-α拮抗剂MPP可完全抑制雌激素的作用(P〈0.05)。综上表明,鸡CYP2C8基因在不同组织中广泛表达,而以肝中的表达水平最高,且肝中CYP2C8基因的表达是受雌激素并通过ER-α调控。 展开更多
关键词 CYP2C8基因 表达调控 雌激素
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日粮添加苜蓿草粉对固始鸡血清生化指标和免疫器官发育的影响 被引量:11
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作者 刘记强 康相涛 +2 位作者 田亚东 卢冉 苏玲 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2010年第3期84-88,共5页
研究不同苜蓿草粉添加水平对固始鸡血清生化指标和免疫器官发育的影响,选取同批孵化的健康固始鸡慢羽纯系公母混雏1 152只,随机分为6组,每组设4个重复,每个重复48只,公母各半,分别饲喂添加0%、5%、10%、15%、20%、25%苜蓿草粉的日粮至8... 研究不同苜蓿草粉添加水平对固始鸡血清生化指标和免疫器官发育的影响,选取同批孵化的健康固始鸡慢羽纯系公母混雏1 152只,随机分为6组,每组设4个重复,每个重复48只,公母各半,分别饲喂添加0%、5%、10%、15%、20%、25%苜蓿草粉的日粮至8周龄。结果表明:在4周龄和8周龄时日粮苜蓿草粉添加水平对大部分血清生化指标没有显著影响(P>0.05)。除在4周龄时胸腺指数试验Ⅱ组与对照组间差异显著、在6周龄时法氏囊指数试验Ⅱ组与对照组间差异显著、在8周龄时脾脏指数试验Ⅱ组与对照组间差异显著(P<0.05)外,其余各周龄时试验组与对照组间免疫器官指数差异均不显著(P>0.05)。固始鸡能够从苜蓿草粉含量较高的饲粮中摄取充足的营养物质,维持自身的营养和能量需要,在为固始鸡配制日粮时可以添加较高水平的苜蓿草粉。 展开更多
关键词 固始鸡 苜蓿草粉 血清生化指标 免疫器官
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“豫粉1号”配套系商品代蛋鸡产蛋率曲线拟合及蛋品质分析 被引量:10
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作者 李鸿飞 宋亚伊 +4 位作者 田亚东 蒋瑞瑞 康相涛 孙桂荣 闫峰宾 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第6期1680-1687,共8页
为探索"豫粉1号"商品代的产蛋性能和蛋品质等生产特性的变化规律,采用Wood模型、杨宁模型和McMillan模型对产蛋率曲线进行拟合分析;并对32、36、40周蛋品质进行分析。结果显示,3种模型的非线性方程为:Wood模型:y_t=0.327×... 为探索"豫粉1号"商品代的产蛋性能和蛋品质等生产特性的变化规律,采用Wood模型、杨宁模型和McMillan模型对产蛋率曲线进行拟合分析;并对32、36、40周蛋品质进行分析。结果显示,3种模型的非线性方程为:Wood模型:y_t=0.327×2.2t×e^(-0.067t);McMillan模型:y_t=159.19×(1-e^(-0.199×(t-17.612)))×e^(-0.019t);杨宁模型:yt=0.284×e^(-0.284t)/(1+e^(-0.302×(t-20.779))),拟合度分别为0.885、0.987和0.991。与实际生产数据相比,杨宁模型拟合值与观测值最为接近,拟合效果最佳。蛋品质分析结果显示,"豫粉1号"商品代蛋品质的哈氏单位达到82.61,为AA级;蛋壳强度达到4.77kg/m^2,具有较高的强度;蛋黄颜色为8.72,色泽比普通鸡蛋深。在实际生产中可以利用杨宁模型对该品系产蛋率的变化规律进行估计与预测,为地方蛋鸡新品系的育种及管理提供参考,蛋品质可在后期配套系运用中进行优化。 展开更多
关键词 “豫粉1号”商品代 产蛋率 拟合曲线 蛋品质
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全收粪和指示剂法测定固始鸡粗纤维消化率的差异性比较 被引量:6
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作者 刘记强 曹向阳 +2 位作者 亢娟娟 田亚东 康相涛 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期173-175,共3页
选用26只体重基本一致的成年固始公鸡分别采用全收粪法、外源指示剂(TiO2)法、内源指示剂(4N-AIA)法测定粗纤维消化率,并比较其差异性。试验结果表明:3种方法之间有差异,内源指示剂(4N-AIA)法的测定值高于全收粪法,全收粪法的测定值高... 选用26只体重基本一致的成年固始公鸡分别采用全收粪法、外源指示剂(TiO2)法、内源指示剂(4N-AIA)法测定粗纤维消化率,并比较其差异性。试验结果表明:3种方法之间有差异,内源指示剂(4N-AIA)法的测定值高于全收粪法,全收粪法的测定值高于外源指示剂(TiO2)法。全收粪法、外源指示剂(TiO2)法和内源指示剂(4N-AIA)法3种方法的测定值之间差异均不显著(P>0.05)。采用全收粪法测得TiO2回收率平均为97.2%;AIA回收率平均为102.7%。 展开更多
关键词 粗纤维消化率 全收粪法 指示剂法 固始鸡
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卢氏绿壳鸡蛋的品质评价 被引量:12
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作者 高素敏 康相涛 +2 位作者 田亚东 韩瑞丽 孙桂荣 《广东农业科学》 CAS CSCD 2008年第6期97-99,共3页
选取100枚卢氏绿壳鸡蛋进行品质测定,结果表明:卢氏绿壳鸡蛋的蛋重为49.15 g,蛋比重为1.09,蛋形指数为1.31,蛋壳厚度为356.8μm,蛋黄占全蛋比例为33.16%,蛋黄的粗脂肪含量为54.35%,蛋黄的胆固醇含量为14.27mg/g,全蛋胆固醇含量为197.38 ... 选取100枚卢氏绿壳鸡蛋进行品质测定,结果表明:卢氏绿壳鸡蛋的蛋重为49.15 g,蛋比重为1.09,蛋形指数为1.31,蛋壳厚度为356.8μm,蛋黄占全蛋比例为33.16%,蛋黄的粗脂肪含量为54.35%,蛋黄的胆固醇含量为14.27mg/g,全蛋胆固醇含量为197.38 mg,蛋黄的SOD含量为6.33 U/mgprot,卢氏绿壳鸡蛋不但在蛋比重、蛋壳厚度、蛋黄相对重等方面优于普通鸡蛋,而且蛋黄粗脂肪含量、胆固醇含量等指标均明显优于其他品种的鸡蛋。 展开更多
关键词 卢氏绿壳鸡蛋:品质
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生物安全现状与管理对策 被引量:4
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作者 田亚东 康相涛 孙国宝 《广东农业科学》 CAS CSCD 2007年第9期111-114,共4页
生物安全是指与生物有关的各种因素对国家社会、经济、人民健康及生态环境所产生的危害或潜在风险,目前已成为世界关注的焦点。阐述了危害生物安全的三大因素包括致病有害生物、外来生物入侵和转基因生物等,以及当前全球对生物安全管理... 生物安全是指与生物有关的各种因素对国家社会、经济、人民健康及生态环境所产生的危害或潜在风险,目前已成为世界关注的焦点。阐述了危害生物安全的三大因素包括致病有害生物、外来生物入侵和转基因生物等,以及当前全球对生物安全管理和立法监管的现状,并提出我国现阶段应采取的对策。 展开更多
关键词 生物安全 影响因素 立法 对策
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影响益生素安全性的因素 被引量:1
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作者 田亚东 康相涛 《广东农业科学》 CAS CSCD 2007年第5期85-87,共3页
益生素作为抗生素的替代品,引起了人们的极大关注。从病原性和感染性、代谢活性和毒性、黏附特性、免疫偏移和免疫刺激以及抗药性和抗药因子转移等方面探讨了影响益生菌安全性的因素,以期加强对益生素安全性评价的重视。
关键词 益生素 安全性 影响因素
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固始白鹅遗传多样性微卫星标记分析
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作者 范佳英 孙桂荣 +5 位作者 康相涛 张艳芳 孙宜梅 亢娟娟 马新红 白义春 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第34期16773-16774,共2页
[目的]对固始白鹅的遗传多样性进行微卫星标记分析。[方法]利用11个微卫星标记对固始白鹅进行遗传检测,筛选出多态性较好的微卫星位点,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析这11个微卫星位点在固始白鹅中的遗传变异,计算了微卫星位点的等位... [目的]对固始白鹅的遗传多样性进行微卫星标记分析。[方法]利用11个微卫星标记对固始白鹅进行遗传检测,筛选出多态性较好的微卫星位点,用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳法分析这11个微卫星位点在固始白鹅中的遗传变异,计算了微卫星位点的等位基因频率、杂合度、多态信息含量和有效等位基因数。[结果]8个位点在固始白鹅上有较好的多态性,平均每个座位检测到4.25(3~6)个等位基因,平均杂合度为0.597(0.273~0.695),平均多态信息含量为0.635(0.530~0.769),平均有效等位基因数为3.3447(2.3830~4.9840)。[结论]为固始白鹅的保种和选育工作提供参考依据。 展开更多
关键词 微卫星标记 固始白鹅 等位基因频率 多态信息含量 基因杂合度
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玉米赤霉烯酮降解菌的筛选及其活性检测 被引量:6
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作者 魏单平 刘玉洁 +4 位作者 孙向丽 闫峰宾 蒋瑞瑞 康相涛 王彦彬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期761-768,共8页
玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是危害动物健康的重要真菌毒素之一,笔者旨在筛选出能够有效降解ZEN的微生物,并对其降解特性以及降解产物的致毒活性进行检测,以期筛选出高效降解ZEN的菌株。以ZEN为唯一碳源进行初筛,以菌株发酵液对ZEN... 玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)是危害动物健康的重要真菌毒素之一,笔者旨在筛选出能够有效降解ZEN的微生物,并对其降解特性以及降解产物的致毒活性进行检测,以期筛选出高效降解ZEN的菌株。以ZEN为唯一碳源进行初筛,以菌株发酵液对ZEN的降解率为复筛指标,对降解率最高的菌株进行16SrRNA基因测序分析;并对筛选出的菌株对ZEN的降解特性进行研究,对其降解产物在MCF-7细胞上进行活性检测。初筛获得40株能生长良好的细菌,复筛筛选出降解率最高H6菌株,经16SrRNA基因测序分析,该菌株为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)。在37℃、180r·min-1、72h时,该菌株发酵液对1μg·mL^(-1) ZEN的降解率为95.6%,其上清液和菌悬液的降解率分别为68.93%和28.70%,对20μg·mL^(-1) ZEN的降解率为85.8%;菌株上清液经蛋白酶K、蛋白酶K+SDS和热处理后,其降解活性明显降低;该菌株ZEN的降解产物在MCF-7细胞上的增殖率显著降低。结果表明,本研究筛选出能有效降解ZEN的菌株H6,经鉴定判断为解淀粉芽孢杆菌(B.amyloliquefaciens),该菌株分泌的胞外酶能够降解ZEN,使其类雌激素毒性显著降低。 展开更多
关键词 真菌毒素 玉米赤霉烯酮 解淀粉芽孢杆菌 生物降解
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多重PCR法在微卫星标记中的效果观察 被引量:3
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作者 张艳芳 孙宜梅 +2 位作者 康相涛 韩瑞丽 靳明明 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第10期4411-4413,共3页
通过建立一种同时检测3个位点(MCW0083、MCW0037、LEI0166)的多重PCR方法,在同一样品中同时扩增这3个微卫星位点。混合扩增产物与各位点单引物PCR法扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,用BandScan软件分析各微卫星位点的等位基因大小... 通过建立一种同时检测3个位点(MCW0083、MCW0037、LEI0166)的多重PCR方法,在同一样品中同时扩增这3个微卫星位点。混合扩增产物与各位点单引物PCR法扩增产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,用BandScan软件分析各微卫星位点的等位基因大小。多重PCR方法扩增出的DNA片段与单PCR扩增的结果表明,每个个体标记等位基因的片段大小差异不大,初步认为该方法是可行的。 展开更多
关键词 微卫星 多重PCR 标记
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鸡FKBP5基因的克隆、生物信息学及组织表达谱分析 被引量:1
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作者 唐贺贺 张真真 +5 位作者 张献珍 蒋瑞瑞 李国喜 田亚东 康相涛 韩瑞丽 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第1期35-43,共9页
本研究旨在对鸡FK506结合蛋白5(FK506 binding protein 5,FKBP5)基因进行克隆和生物信息学分析,并检测其在鸡不同组织中的表达量。以鸡脾脏cDNA为模板,通过PCR方法扩增和克隆鸡FKBP5基因完整CDS区序列,并进行同源性比对及系统进化树构建... 本研究旨在对鸡FK506结合蛋白5(FK506 binding protein 5,FKBP5)基因进行克隆和生物信息学分析,并检测其在鸡不同组织中的表达量。以鸡脾脏cDNA为模板,通过PCR方法扩增和克隆鸡FKBP5基因完整CDS区序列,并进行同源性比对及系统进化树构建;使用在线软件分析FKBP5蛋白的理化性质、疏水性、跨膜结构、信号肽、二级结构和三级结构;利用实时荧光定量PCR检测其在肢体内外翻畸形(valgus-varus deformity,VVD)组肉鸡和正常组肉鸡组织中的表达量,并绘制组织表达谱。结果显示,鸡FKBP5基因CDS区序列全长1350 bp,编码449个氨基酸;同源性比对和进化树分析表明,鸡FKBP5基因氨基酸序列与鹌鹑、鸭、壁虎、中华鳖、小鼠、人、猪、斑马鱼的同源性分别为98.4%、96.2%、85.8%、87.4%、81.1%、85.2%、86.1%和61.2%,与鹌鹑、鸭的亲缘关系最近,爬行类和哺乳类动物次之,与斑马鱼(鱼类)亲缘关系最远。鸡FKBP5蛋白分子质量为50.43 ku,理论等电点(pI)为5.94,半衰期为30 h,肽链N端为蛋氨酸(Met),不稳定系数为23.80,属于稳定蛋白;跨膜区和信号肽预测结果显示,FKBP5蛋白不属于跨膜蛋白和分泌型蛋白。结构域分析结果表明,该蛋白包括2个FKBP型肽基脯氨酰异构酶(FKBP-type peptidylprolyl isomerases)、3个四肽重复(TPR)序列,主要包含α-螺旋(46.77%)、延伸链(12.47%)和无规则卷曲(40.76%),且该蛋白与HSPA2、PPID、STIP1、HSP90AA1和HSP90AB1等互作蛋白具有很强的相关性。实时荧光定量PCR结果显示,FKBP5基因在鸡各组织中广泛表达,其中在软骨和法氏囊中表达量较高,在发病组肉鸡组织中的表达量均高于正常组肉鸡,且在心脏、腿肌、法氏囊、胸腺、软骨中表达量差异显著(P<0.05),在脾脏中表达量差异极显著(P<0.01)。本试验结果可为肉鸡骨骼疾病及腿部健康选育提供参考。 展开更多
关键词 FKBP5基因 克隆 生物信息学分析 组织表达分析
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