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猪流行性腹泻病毒N蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及单克隆抗体制备
1
作者
柴茂
马震原
+8 位作者
杨海波
王淑娟
刘影
王东方
赵雪丽
王翠
谢彩华
王华俊
闫若潜
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第2期124-131,共8页
利用昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并制备单克隆抗体。构建PEDV N基因重组穿梭质粒pFastBac-N,转化至感受态细胞DH10Bac中获取重组杆粒Bacmid-N,将Bacmid-N转染至SF9昆虫细胞中制备重组蛋白。将重组蛋白...
利用昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并制备单克隆抗体。构建PEDV N基因重组穿梭质粒pFastBac-N,转化至感受态细胞DH10Bac中获取重组杆粒Bacmid-N,将Bacmid-N转染至SF9昆虫细胞中制备重组蛋白。将重组蛋白免疫小鼠,经融合、筛选、纯化出单克隆抗体,并测定单克隆抗体相关特性。获得重组杆状病毒rBV-N,获得大小为59 kDa重组N蛋白(rN),制备出抗N蛋白单克隆抗体3C8E3,该单克隆抗体为IgG1亚类,效价为1∶1.024×10^(5),效价高、特异性强、稳定性好,更具实用性。本研究为PEDV抗原/抗体诊断试剂盒、PEDV亚单位疫苗研究奠定了基础。
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关键词
昆虫杆状病毒表达系统
猪流行腹泻病毒
单克隆抗体
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职称材料
鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究
被引量：
1
2
作者
赵雪丽
闫若潜
+8 位作者
王华俊
王淑娟
马震原
谢彩华
柴茂
杨海波
王翠
刘影
王东方
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024年第2期165-173,共9页
建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性...
建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。
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关键词
猪圆环病毒2型
rep基因
猪圆环病毒3型
cap基因
双重TaqMan
MGB
FQ-PCR
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职称材料
题名
猪流行性腹泻病毒N蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及单克隆抗体制备
1
作者
柴茂
马震原
杨海波
王淑娟
刘影
王东方
赵雪丽
王翠
谢彩华
王华俊
闫若潜
机构
河南省动物疫病预防控制中心、河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室
出处
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025年第2期124-131,共8页
基金
2022年度河南省重点研发与推广专项(222102110227,222102110121,222102110289)
2022年度河南省重大科技专项(221100110600)
+1 种基金
河南省现代农业产业技术体系(HARS-22-12-T)
河南省重点研发专项(231111111300)。
文摘
利用昆虫杆状病毒表达系统(BEVS)表达猪流行性腹泻病毒(PEDV)N蛋白,并制备单克隆抗体。构建PEDV N基因重组穿梭质粒pFastBac-N,转化至感受态细胞DH10Bac中获取重组杆粒Bacmid-N,将Bacmid-N转染至SF9昆虫细胞中制备重组蛋白。将重组蛋白免疫小鼠,经融合、筛选、纯化出单克隆抗体,并测定单克隆抗体相关特性。获得重组杆状病毒rBV-N,获得大小为59 kDa重组N蛋白(rN),制备出抗N蛋白单克隆抗体3C8E3,该单克隆抗体为IgG1亚类,效价为1∶1.024×10^(5),效价高、特异性强、稳定性好,更具实用性。本研究为PEDV抗原/抗体诊断试剂盒、PEDV亚单位疫苗研究奠定了基础。
关键词
昆虫杆状病毒表达系统
猪流行腹泻病毒
单克隆抗体
Keywords
Baculovirus expression vector system
Porcine epidemic diarrhea virus
monoclonal antibody
分类号
S852.651 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究
被引量：
1
2
作者
赵雪丽
闫若潜
王华俊
王淑娟
马震原
谢彩华
柴茂
杨海波
王翠
刘影
王东方
机构
河南省动物疫病预防控制中心、河南省重大动物疫病监测预警及防控重点实验室
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024年第2期165-173,共9页
基金
2022年度河南省重大科技专项(221100110600)
2023年河南省重点研发专项(231111111300)
河南省现代农业产业技术体系(HARS-22-12-T)。
文摘
建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。
关键词
猪圆环病毒2型
rep基因
猪圆环病毒3型
cap基因
双重TaqMan
MGB
FQ-PCR
Keywords
Porcine circovirus 2
rep gene
porcine circovirus 3
cap gene
duplex TaqMan MGB FQ-PCR
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪流行性腹泻病毒N蛋白在昆虫杆状病毒系统中的表达及单克隆抗体制备
柴茂
马震原
杨海波
王淑娟
刘影
王东方
赵雪丽
王翠
谢彩华
王华俊
闫若潜
《中国动物传染病学报》
北大核心
2025
0
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职称材料
2
鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究
赵雪丽
闫若潜
王华俊
王淑娟
马震原
谢彩华
柴茂
杨海波
王翠
刘影
王东方
《中国动物传染病学报》
CAS
北大核心
2024
1
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