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犬细小病毒TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：2: 1; 作者刘毅吴志明 +7 位作者闫若潜赵明军王东方赵雪丽刘梅芬程俊贞薛晓李宁《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第6期68-73,共6页; 为建立一种特异、灵敏、快速检测犬细小病毒(CPV)的TaqMan MGB荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,本研究根据GenBank中CPV的VP2基因保守区域序列设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB荧光探针,经反应条件优化,建立了CPV TaqMan MGB FQ-PCR方法。对... 展开更多; 关键词犬细小病毒 TAQMAN MGB探针荧光定量PCR 建立应用; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪瘟病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：8: 2; 作者刘梅芬王淑娟 +5 位作者闫若潜王东方曹伟伟赵雪丽李勤楠李宁《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2285-2290,共6页; 为建立一种快速、特异、灵敏的检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)巢式RT-PCR(nested RTPCR)方法,本研究参照GenBank中公布的CSFVE2基因保守区域序列设计2对特异性引物,以CSFV总RNA为模板,优化反应条件,建立CSFV nested RT... 展开更多; 关键词猪瘟病毒巢式RT-PCR 检测建立应用; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立被引量：14: 3; 作者马震原王淑娟 +5 位作者闫若潜班付国赵雪丽谢彩华王华俊王东方《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期574-583,共10页; 为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备... 展开更多; 关键词猪伪狂犬病病毒 gB蛋白竞争化学发光酶联免疫定量; 在线阅读下载PDF 职称材料

猪伪狂犬病病毒变异毒株HeNZK-2014的分离鉴定及gE基因序列分析被引量：11: 4; 作者马震原李宁 +7 位作者闫若潜班付国王淑娟赵雪丽谢彩华王东方王华俊曹伟伟《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2086-2095,共10页; 为了解猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株的特点,本研究采集临床疑似PRV感染发病猪的淋巴结等组织样品进行PCR鉴定,选取仅PRV阳性的组织样品经研磨除菌后取上清接种于PK-15细胞进行病毒分离培养、蚀斑纯化、PCR和间接免疫荧光法(IFA)鉴定,采... 展开更多; 关键词猪伪狂犬病病毒变异毒株分离鉴定 GE基因遗传变异分析; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白对新城疫(LaSota株)活疫苗免疫增强作用研究被引量：5: 5; 作者刘梅芬李勤楠 +4 位作者马震原吴志明班付国闫若潜王华俊《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期590-599,共10页; 为探究重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对新城疫病毒(NDV)活疫苗(LaSota株)的免疫增强作用,本研究将90只SPF鸡随机分为6组,分别为PBS对照组、NDV弱毒苗对照组、rChIL-6-Linker-ChIL-2免疫增强组、rCh... 展开更多; 关键词 rChIL-6-Linker-ChIL-2 免疫增强作用淋巴细胞增殖活性 TH1/TH2型细胞因子抗体滴度; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名犬细小病毒TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：2: 1; 作者刘毅吴志明闫若潜赵明军王东方赵雪丽刘梅芬程俊贞薛晓李宁; 机构河南科技大学动物科技学院河南省动物疫病预防与控制中心许昌市动物疫病预防控制中心西南大学动物科技学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第6期68-73,共6页; 文摘为建立一种特异、灵敏、快速检测犬细小病毒(CPV)的TaqMan MGB荧光定量PCR(FQ-PCR)方法,本研究根据GenBank中CPV的VP2基因保守区域序列设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB荧光探针,经反应条件优化,建立了CPV TaqMan MGB FQ-PCR方法。对建立的TaqMan MGB FQ-PCR检测方法进行了灵敏度、特异性、重复性试验,对疑似CPV感染临床样品进行了应用检测,并与常规PCR方法进行了比对。结果表明,成功建立了检测CPV的TaqMan MGB FQ-PCR方法,标准曲线的循环阈值(Ct值)与模板浓度有良好的线性关系,相关系数(R2)为0.9978;最低检出限为1×101拷贝/μL,是常规PCR的100倍;特异性高,对pGEM-T/CPV重组质粒扩增呈现阳性反应曲线,而对5个对照病原的扩增曲线均呈现阴性反应;对不同浓度的pGEM-T/CPV重组质粒分别重复检测3次结果良好;对46份临床疑似CPV感染样品进行了应用检测,阳性检出率为50%,高于常规PCR方法。本研究成功建立了CPV的TaqMan MGB FQ-PCR检测方法,可用于临床上犬细小病毒病的早期快速诊断。; 关键词犬细小病毒 TAQMAN MGB探针荧光定量PCR 建立应用; Keywords canine parvovirus TaqMan MGB probe FQ-PCR establishment application; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪瘟病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用被引量：8: 2; 作者刘梅芬王淑娟闫若潜王东方曹伟伟赵雪丽李勤楠李宁; 机构河南省动物疫病预防与控制中心河南科技大学动物科技学院; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第9期2285-2290,共6页; 基金河南省科技攻关项目"病死动物无害化处理技术及管理机制研究"(142102310224); 文摘为建立一种快速、特异、灵敏的检测猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)巢式RT-PCR(nested RTPCR)方法,本研究参照GenBank中公布的CSFVE2基因保守区域序列设计2对特异性引物,以CSFV总RNA为模板,优化反应条件,建立CSFV nested RT-PCR方法,对其进行特异性、敏感性和重复性试验;利用所建立的方法对35份临床疑似CSFV感染样品进行了应用检测,并对阳性PCR产物进行克隆测序鉴定。结果表明,本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法,能够特异性地扩增CSFV,但对ST正常细胞对照和其他8种病原对照未扩增出任何条带;稳定性和重复性好;敏感性高,最低检测病毒含量为1TCID50;自35份疑似CSFV感染样品中检出19份阳性样品,PCR阳性产物克隆测序结果表明均为CSFV E2基因片段。本研究成功建立了CSFV nested RT-PCR检测方法,可用于CSFV的快速检测,为CSF的早期检测诊断提供了特异、灵敏的方法。; 关键词猪瘟病毒巢式RT-PCR 检测建立应用; Keywords classical swine fever virus nested RT-PCR detection establishment application; 分类号 S852.651 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立被引量：14: 3; 作者马震原王淑娟闫若潜班付国赵雪丽谢彩华王华俊王东方; 机构河南省动物疫病预防与控制中心; 出处《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期574-583,共10页; 基金河南省科技创新人才计划项目(174200510003)。; 文摘为了建立一种快速定量检测猪伪狂犬病病毒(PRV)gB蛋白抗体的竞争化学发光酶联免疫检测方法,以大肠杆菌表达并纯化的猪伪狂犬病病毒gB重组蛋白作为包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的抗gB蛋白单克隆抗体作为酶标抗体,以国家参考品稀释制备的校准品绘制标准曲线实现定量检测,成功建立的PRV-gB-CLEIA在45 min内即可完成检测,可检测到最大稀释倍数为1∶2 048稀释的国家参考品;与猪瘟等其他5种病毒抗原的标准阳性血清无交叉反应;批内变异系数为1.13%~9.47%,批间变异系数为2.43%~14.07%,重复性和稳定性较好。通过对采集的180份临床血清检测结果进行比较,该方法与中和试验阳性符合率为94.00%,阴性符合率为96.92%,总符合率为96.11%,明显优于商品化ELISA试剂盒。本研究建立的PRV-gB-CLEIA检测方法可以用于PRV gB抗体的快速定量检测。; 关键词猪伪狂犬病病毒 gB蛋白竞争化学发光酶联免疫定量; Keywords pseudorabies virus gB protein competitive chemiluminescent enzyme immunoassay quantify; 分类号 S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名猪伪狂犬病病毒变异毒株HeNZK-2014的分离鉴定及gE基因序列分析被引量：11: 4; 作者马震原李宁闫若潜班付国王淑娟赵雪丽谢彩华王东方王华俊曹伟伟; 机构河南省动物疫病预防与控制中心广东永顺生物制药股份有限公司; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第7期2086-2095,共10页; 基金河南省科技创新人才计划项目(174200510003); 文摘为了解猪伪狂犬病病毒(PRV)变异毒株的特点,本研究采集临床疑似PRV感染发病猪的淋巴结等组织样品进行PCR鉴定,选取仅PRV阳性的组织样品经研磨除菌后取上清接种于PK-15细胞进行病毒分离培养、蚀斑纯化、PCR和间接免疫荧光法(IFA)鉴定,采用Reed-Muench法测定PRV的TCID50,接种小鼠并观察临床症状,对纯化的PRV和死亡小鼠脑组织样品进行gE基因PCR扩增及测序分析。结果显示,PRV阳性病料接种于PK-15细胞24h后出现典型细胞病变(CPE),经3轮蚀斑纯化后PCR和IFA鉴定结果均为阳性,分离株命名为HeNZK-2014,其TCID50为10-9.77/0.1mL;以1×108个TCID50病毒悬液接种小鼠22h后可引起小鼠出现奇痒、撕咬、死亡等典型猪伪狂犬病症状,死亡小鼠脑组织样品PRV PCR检测结果为阳性;纯化病毒和死亡小鼠脑组织样品gE基因核苷酸序列同源性为100.0%,与GenBank中2011年以前登录的经典毒株位于不同分支,与2011年之后中国流行毒株位于同一分支,在第48和496位各有1个天冬氨酸(D)的插入,具有变异毒株的典型特征。本研究成功分离了1株PRV变异毒株,为进一步开展针对PRV变异毒株的疫苗及其防控研究奠定了基础。; 关键词猪伪狂犬病病毒变异毒株分离鉴定 GE基因遗传变异分析; Keywords pig pseudorabies virus（PRV） variant isolation identification gE gene genetic variation analysis; 分类号 S852.65 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白对新城疫(LaSota株)活疫苗免疫增强作用研究被引量：5: 5; 作者刘梅芬李勤楠马震原吴志明班付国闫若潜王华俊; 机构河南省动物疫病预防与控制中心洛阳莱普生信息科技有限公司河南省兽药饲料监察所; 出处《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2019年第2期590-599,共10页; 基金河南省科技创新人才计划项目(豫科人组[2011]1号); 文摘为探究重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白(rChIL-6-Linker-ChIL-2,重组融合蛋白)对新城疫病毒(NDV)活疫苗(LaSota株)的免疫增强作用,本研究将90只SPF鸡随机分为6组,分别为PBS对照组、NDV弱毒苗对照组、rChIL-6-Linker-ChIL-2免疫增强组、rChIL-6蛋白免疫增强组、rChIL-2蛋白免疫增强组及rChIL-6+rChIL-2混合蛋白免疫增强组,将鸡白细胞介素重组融合蛋白水剂与LaSota株联合接种于SPF鸡,分别采用MTS法、流式细胞术、ELISA和HA/HI法检测接种前后不同时间各组鸡外周血及脾淋巴细胞增殖活性、鸡外周血中CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量、血清中Th1/Th2型细胞因子表达水平及免疫抗体水平等指标。结果显示,接种后7～21d时,与NDV弱毒苗对照组相比,同时接种重组融合蛋白组鸡淋巴细胞增殖活性、外周血CD3+CD4+/CD3+CD8+T淋巴细胞的百分含量比值及血清中重组鸡IL-4蛋白(rChIL-4)、ChIL-6、ChIL-2、重组鸡IFN-α蛋白(ChIFN-α)、ChIFN-γTh1/Th2型细胞因子表达水平明显提升;HI免疫抗体较NDV弱毒苗对照组提高了1.0～1.9个滴度,较单一rChIL-6、rChIL-2对照组分别提高了0.2～0.7、0.2～1.1个抗体滴度。综上所述,rChIL-6-Lin-ker-ChIL-2融合蛋白对NDV(LaSota株)活疫苗在鸡体内具有明显的免疫增强效果。; 关键词 rChIL-6-Linker-ChIL-2 免疫增强作用淋巴细胞增殖活性 TH1/TH2型细胞因子抗体滴度; Keywords rChIL-6-Linker-ChIL-2 immunopotentiation effect proliferation activity of lymphocytes Th1/Th2-type cytokines antibody titer; 分类号 S852.4 [农业科学—基础兽医学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	犬细小病毒TaqMan MGB荧光定量PCR检测方法的建立及应用	刘毅吴志明闫若潜赵明军王东方赵雪丽刘梅芬程俊贞薛晓李宁	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2014	2	在线阅读下载PDF 职称材料
2	猪瘟病毒巢式RT-PCR检测方法的建立与应用	刘梅芬王淑娟闫若潜王东方曹伟伟赵雪丽李勤楠李宁	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2016	8	在线阅读下载PDF 职称材料
3	猪伪狂犬病病毒gB蛋白抗体竞争化学发光酶联免疫检测方法的建立	马震原王淑娟闫若潜班付国赵雪丽谢彩华王华俊王东方	《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心	2020	14	在线阅读下载PDF 职称材料
4	猪伪狂犬病病毒变异毒株HeNZK-2014的分离鉴定及gE基因序列分析	马震原李宁闫若潜班付国王淑娟赵雪丽谢彩华王东方王华俊曹伟伟	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2017	11	在线阅读下载PDF 职称材料
5	重组鸡白细胞介素-6/2融合蛋白对新城疫(LaSota株)活疫苗免疫增强作用研究	刘梅芬李勤楠马震原吴志明班付国闫若潜王华俊	《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心	2019	5	在线阅读下载PDF 职称材料