为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整...为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整齐、隆起的“煎蛋样”菌落形态;PCR可以扩增到16S r RNA基因目的条带,扩增产物测序后与NCBI中登录的ATCC 25204标准菌株16S r RNA基因序列比对,结果显示二者的同源性达99%以上,本实验共分离到5株MS。选择ZP-1株进行生物学特性研究,通过颜色变化单位(CCU)试验测定其生长滴度、采用试剂盒测定其代谢产生的H_(2)O_(2)水平。结果显示,在培养24 h~36 h后,ZP-1株的生长滴度最高可达10^(12)CCU/mL,具有生长速度快、滴度高的特点。在甘油存在的情况下,ZP-1株产生H_(2)O_(2)的相对水平极显著高于弱毒疫苗株(P<0.001)。将ZP-1株分别通过足垫和静脉注射感染SPF鸡,评估其致病性;利用该菌株制备灭活疫苗经皮下接种鸡后攻毒,分析ZP-1株的免疫保护效果。结果显示,该分离株可复制出MS典型症状及病变;利用该菌株制备的灭活疫苗对鸡的攻毒保护率可达80%,高于商品化疫苗,其降低MS关节组织定植水平和MS抗体水平与商品化疫苗一致。本研究获得了具有较高生长滴度(10^(12)CCU/mL)的MS分离株ZP-1,发现利用该MS分离株制备的灭活疫苗具有较好的免疫保护效果,为MS疫苗的研发奠定了基础。展开更多
文摘为分离鉴定鸡滑液囊支原体(MS),并评估其致病性和免疫保护效果,本实验无菌采集南阳市多家鸡场35份疑似MS发病鸡的关节腔粘液和关节组织,通过病原分离培养后观察菌落、PCR鉴定并测序。结果显示,在改良Friis固体培养基上可见圆形、边缘整齐、隆起的“煎蛋样”菌落形态;PCR可以扩增到16S r RNA基因目的条带,扩增产物测序后与NCBI中登录的ATCC 25204标准菌株16S r RNA基因序列比对,结果显示二者的同源性达99%以上,本实验共分离到5株MS。选择ZP-1株进行生物学特性研究,通过颜色变化单位(CCU)试验测定其生长滴度、采用试剂盒测定其代谢产生的H_(2)O_(2)水平。结果显示,在培养24 h~36 h后,ZP-1株的生长滴度最高可达10^(12)CCU/mL,具有生长速度快、滴度高的特点。在甘油存在的情况下,ZP-1株产生H_(2)O_(2)的相对水平极显著高于弱毒疫苗株(P<0.001)。将ZP-1株分别通过足垫和静脉注射感染SPF鸡,评估其致病性;利用该菌株制备灭活疫苗经皮下接种鸡后攻毒,分析ZP-1株的免疫保护效果。结果显示,该分离株可复制出MS典型症状及病变;利用该菌株制备的灭活疫苗对鸡的攻毒保护率可达80%,高于商品化疫苗,其降低MS关节组织定植水平和MS抗体水平与商品化疫苗一致。本研究获得了具有较高生长滴度(10^(12)CCU/mL)的MS分离株ZP-1,发现利用该MS分离株制备的灭活疫苗具有较好的免疫保护效果,为MS疫苗的研发奠定了基础。
