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猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化
1
作者
连凯琪
周玲玲
+3 位作者
王英杰
李翠
宋玉伟
张明亮
《江苏农业科学》
2019年第15期91-94,共4页
为了探索猪IgG1-Fc(pIgG1-Fc)基因在大肠杆菌中的高效表达,首先通过反转录PCR(RT-PCR)扩增pIgG1-Fc基因,并构建重组表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度...
为了探索猪IgG1-Fc(pIgG1-Fc)基因在大肠杆菌中的高效表达,首先通过反转录PCR(RT-PCR)扩增pIgG1-Fc基因,并构建重组表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、菌体培养温度及菌体培养时间,实现pIgG1-Fc重组蛋白的高效表达。结果表明,成功克隆了pIgG1-Fc的基因666bp,共编码222个氨基酸;重组原核表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc经过酶切和测序证明构建正确,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达,表达的融合蛋白分子量约为36ku。其最佳表达条件如下:在25℃条件下加入终浓度为1mmol/L的IPTG诱导6h可形成大量包涵体蛋白。pIgG1-Fc基因被成功克隆并原核表达,为进一步研究该蛋白的功能及实现其他蛋白与pIgG1-Fc融合后原核表达奠定了基础,为制备能与猪IgG1结合的二抗提供了材料。
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关键词
FC
原核表达
包涵体
融合蛋白
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职称材料
题名
猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化
1
作者
连凯琪
周玲玲
王英杰
李翠
宋玉伟
张明亮
机构
河南省动物疫病防控与营养免疫院士工作站/河南省兽用生物制品研发与应用国际联合实验室/安阳工学院生物与食品工程学院
出处
《江苏农业科学》
2019年第15期91-94,共4页
基金
安阳工学院博士科研启动基金(编号:BSJ2016008)
文摘
为了探索猪IgG1-Fc(pIgG1-Fc)基因在大肠杆菌中的高效表达,首先通过反转录PCR(RT-PCR)扩增pIgG1-Fc基因,并构建重组表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行原核表达,然后通过优化异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导浓度、菌体培养温度及菌体培养时间,实现pIgG1-Fc重组蛋白的高效表达。结果表明,成功克隆了pIgG1-Fc的基因666bp,共编码222个氨基酸;重组原核表达质粒pET30a(+)-pIgG1-Fc经过酶切和测序证明构建正确,重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中能够表达,表达的融合蛋白分子量约为36ku。其最佳表达条件如下:在25℃条件下加入终浓度为1mmol/L的IPTG诱导6h可形成大量包涵体蛋白。pIgG1-Fc基因被成功克隆并原核表达,为进一步研究该蛋白的功能及实现其他蛋白与pIgG1-Fc融合后原核表达奠定了基础,为制备能与猪IgG1结合的二抗提供了材料。
关键词
FC
原核表达
包涵体
融合蛋白
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪IgG1-Fc基因的克隆、原核表达及表达条件优化
连凯琪
周玲玲
王英杰
李翠
宋玉伟
张明亮
《江苏农业科学》
2019
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