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幽门螺杆菌脂蛋白基因的重组表达和免疫活性鉴定
被引量：
1
1
作者
张荣光
段广才
+1 位作者
范清堂
郗园林
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期903-906,共4页
目的制备幽门螺杆菌(Hp)Lpp20重组蛋白(rLpp20),鉴定其免疫活性,为Hp疫苗和免疫诊断研究提供候选抗原。方法采用基因克隆技术将Hplpp20基因克隆到表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化E.coliTB1。采用IPTG诱导lpp20基因与麦芽糖结合蛋白(M...
目的制备幽门螺杆菌(Hp)Lpp20重组蛋白(rLpp20),鉴定其免疫活性,为Hp疫苗和免疫诊断研究提供候选抗原。方法采用基因克隆技术将Hplpp20基因克隆到表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化E.coliTB1。采用IPTG诱导lpp20基因与麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)基因融合表达,用多糖树脂亲和层析方法纯化表达的融合蛋白(MBP-rLpp20)。将MAP-rLpp20用蛋白因子FactorXa酶切,得到不带MBP的rLpp20。分别用MAP-rLpp20、rLpp20和Hp全菌抗原免疫小鼠,用Western blot检测MBP-rLpp20和rLpp20的抗原活性。结果表达的MBP-rLpp20的相对分子质量为60×103,表达量占菌体总蛋白的34.1%,占可溶性蛋白的14.2%。经酶切和纯化得到的rLpp20的相对分子质量为15×103。纯化制备的MBP-Lpp20和rLpp20的纯度分别为90.4%和91.2%,且与相应免疫小鼠血清及Hp全菌抗原免疫小鼠血清均能发生阳性反应。结论该研究成功制备了纯度较高的MAP-Lpp20和rLpp20蛋白;这两种重组蛋白均具有免疫活性,对Hp疫苗和免疫诊断研究具有应用价值。
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关键词
幽门螺杆菌
抗原
疫苗
基因
蛋白
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职称材料
幽门螺杆菌脂蛋白基因的克隆和生物信息学分析
被引量：
1
2
作者
张荣光
段广才
范清堂
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第12期1135-1138,共4页
目的完成幽门螺杆菌（Hp）郑州分离株MEL-HP27脂蛋白（lipoprotein）基因lpp20的克隆和测序；分析该基因序列的变异性和表达蛋白的化学及免疫学特征，为Hp疫苗抗原的筛选奠定基础。方法用PCR方法从MEL-HP27的染色体DNA中扩增Ipp20基因...
目的完成幽门螺杆菌（Hp）郑州分离株MEL-HP27脂蛋白（lipoprotein）基因lpp20的克隆和测序；分析该基因序列的变异性和表达蛋白的化学及免疫学特征，为Hp疫苗抗原的筛选奠定基础。方法用PCR方法从MEL-HP27的染色体DNA中扩增Ipp20基因片段，将其与载体pNEB193连接后，用于转化大肠杆菌JM109，通过酶切和测序鉴定重组质粒。应用生物信息学软件Omiga2．0、GeneDoc2．3和GenBank、Swiss-port数据库对7个Hp菌株（MEL-HP27、60190、Chongqing、CH-CTX1、J99、17874、26695）的lpp20基因序列进行同源性比较，并对该基因编码蛋白的主要化学特征和抗原结构域进行分析。结果Hplpp20基因的核苷酸序列长度为528bp，不同菌株间的同源性为96．0％～98．1％。lpp20基因编码的氨基酸序列长度为175aa，不同菌株间的同源性为98．3％～100％。MEL-HP27lpp20表达蛋白的分子量为19．122kDa，等电点为9．950，具有2个抗原性结构域。结论Hplpp20基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列均具有较高的保守性，但保守性低于100％，采用该基因表达蛋白作为疫苗和诊断抗原时，有必要考虑人群感染的优势菌株的遗传特征，以提高免疫保护的覆盖率和免疫诊断的敏感性。Hplpp20基因编码的蛋白具有典型抗原分子的结构特征，有望成为Hp疫苗候选抗原。
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关键词
幽门螺杆菌
序列分析
脂蛋白
疫苗
同源性
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职称材料
题名
幽门螺杆菌脂蛋白基因的重组表达和免疫活性鉴定
被引量：
1
1
作者
张荣光
段广才
范清堂
郗园林
机构
郑州大学基础
医学
院寄生虫学教研
室
郑州大学公共卫生学院流行病学教研
室
河南省分子医学重点开放室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第9期903-906,共4页
基金
河南省医学创新人才基金(2000-04)
郑州大学青年骨干教师资助项目(2004)
文摘
目的制备幽门螺杆菌(Hp)Lpp20重组蛋白(rLpp20),鉴定其免疫活性,为Hp疫苗和免疫诊断研究提供候选抗原。方法采用基因克隆技术将Hplpp20基因克隆到表达载体pMAL-c2X中,用重组质粒转化E.coliTB1。采用IPTG诱导lpp20基因与麦芽糖结合蛋白(Maltose binding protein,MBP)基因融合表达,用多糖树脂亲和层析方法纯化表达的融合蛋白(MBP-rLpp20)。将MAP-rLpp20用蛋白因子FactorXa酶切,得到不带MBP的rLpp20。分别用MAP-rLpp20、rLpp20和Hp全菌抗原免疫小鼠,用Western blot检测MBP-rLpp20和rLpp20的抗原活性。结果表达的MBP-rLpp20的相对分子质量为60×103,表达量占菌体总蛋白的34.1%,占可溶性蛋白的14.2%。经酶切和纯化得到的rLpp20的相对分子质量为15×103。纯化制备的MBP-Lpp20和rLpp20的纯度分别为90.4%和91.2%,且与相应免疫小鼠血清及Hp全菌抗原免疫小鼠血清均能发生阳性反应。结论该研究成功制备了纯度较高的MAP-Lpp20和rLpp20蛋白;这两种重组蛋白均具有免疫活性,对Hp疫苗和免疫诊断研究具有应用价值。
关键词
幽门螺杆菌
抗原
疫苗
基因
蛋白
Keywords
Helicobacter pylori
antigen
vaccines gene
protein
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
幽门螺杆菌脂蛋白基因的克隆和生物信息学分析
被引量：
1
2
作者
张荣光
段广才
范清堂
机构
郑州大学寄生虫学教研
室
郑州大学流行病学教研
室
河南省分子医学重点开放室
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第12期1135-1138,共4页
基金
河南省医学创新人才基金(2000-04)
郑州大学青年骨干教师资助项目(2004)
文摘
目的完成幽门螺杆菌（Hp）郑州分离株MEL-HP27脂蛋白（lipoprotein）基因lpp20的克隆和测序；分析该基因序列的变异性和表达蛋白的化学及免疫学特征，为Hp疫苗抗原的筛选奠定基础。方法用PCR方法从MEL-HP27的染色体DNA中扩增Ipp20基因片段，将其与载体pNEB193连接后，用于转化大肠杆菌JM109，通过酶切和测序鉴定重组质粒。应用生物信息学软件Omiga2．0、GeneDoc2．3和GenBank、Swiss-port数据库对7个Hp菌株（MEL-HP27、60190、Chongqing、CH-CTX1、J99、17874、26695）的lpp20基因序列进行同源性比较，并对该基因编码蛋白的主要化学特征和抗原结构域进行分析。结果Hplpp20基因的核苷酸序列长度为528bp，不同菌株间的同源性为96．0％～98．1％。lpp20基因编码的氨基酸序列长度为175aa，不同菌株间的同源性为98．3％～100％。MEL-HP27lpp20表达蛋白的分子量为19．122kDa，等电点为9．950，具有2个抗原性结构域。结论Hplpp20基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列均具有较高的保守性，但保守性低于100％，采用该基因表达蛋白作为疫苗和诊断抗原时，有必要考虑人群感染的优势菌株的遗传特征，以提高免疫保护的覆盖率和免疫诊断的敏感性。Hplpp20基因编码的蛋白具有典型抗原分子的结构特征，有望成为Hp疫苗候选抗原。
关键词
幽门螺杆菌
序列分析
脂蛋白
疫苗
同源性
Keywords
Helicobacter pylori
sequence analysis
lipoprotein
vaccines homology
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
幽门螺杆菌脂蛋白基因的重组表达和免疫活性鉴定
张荣光
段广才
范清堂
郗园林
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
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职称材料
2
幽门螺杆菌脂蛋白基因的克隆和生物信息学分析
张荣光
段广才
范清堂
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
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