2013年河南省猪伪狂犬野毒感染血清学调查 被引量：40

1

作者 解伟涛 乔松林 +5 位作者 王寅彪 郝慧芳 梁跃 张桂悦 郭成留 张改平 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第6期66-70,共5页

伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性... 伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性率31.3%,猪场阳性率83.6%。种猪群带毒率高,育肥阶段伪狂犬病毒感染情况尤其严重。但一些生产管理较好的规模化猪场通过采取强化免疫,不断补入阴性后备种猪,加强生物安全等综合措施,成功防控了伪狂犬疫情。本研究对于了解当前河南省伪狂犬疫情,制订正确的防控策略提供了依据。 展开更多

关键词 伪狂犬病毒 感染 血清学调查

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新霉素单克隆抗体的制备及其免疫学特性鉴定 被引量：8

2

作者 刘宣兵 滕蔓 +4 位作者 张改平 杨艳艳 邓瑞广 侯玉泽 杨继飞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第4期80-83,共4页

用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌NEOmAb细胞株... 用碳二亚胺(EDC)法将新霉素(NEO)偶联于载体蛋白BSA和OVA,合成免疫原BSA-NEO和包被原OVA-NEO,用红外扫描(IR)、SDS-PAGE进行鉴定;用BSA-NEO免疫BALB/c小鼠,间接ELISA和阻断ELISA选择细胞融合备用鼠;应用杂交瘤技术建立分泌NEOmAb细胞株,用体内诱生腹水法制备NEOmAb;对NEOmAb的效价、亲和性、敏感性和特异性等免疫学特性进行鉴定。结果表明,成功制备了BSA-NEO人工抗原;筛选出1E9、4E8、1G1共3株敏感特异的杂交瘤细胞,间接ELISA效价细胞培养上清分别为1∶2.56×103、1∶1.28×103、1∶5.12×103,腹水效价分别为1∶5.12×105、1∶2.56×105、1∶1.02×106,1G1亲和常数(Ka)为3.75×1010(L/mol);1G1株对NEO的IC50为2.57 ng/mL,NEO mAb对庆大霉素、链霉素、土霉素、环丙沙星、二氟沙星等无交叉反应。试验获得了抗NEO高价、敏感、特异的mAb,可用于NEO残留检测的免疫学试验。 展开更多

关键词 新霉素 单克隆抗体 免疫学特性

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河南地区NADC30-like PRRSV毒株的增殖特性与遗传进化分析 被引量：7

3

作者 王林建 郭振华 +2 位作者 乔松林 陈鑫鑫 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2017年第3期122-128,共7页

为研究河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点和遗传变异情况,采集河南省滑县地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场中的病料,经研磨、稀释、离心处理后将悬液上清接种于原代猪肺泡巨噬细胞,进行病毒分离培养,结果显示,PAM... 为研究河南地区猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的流行特点和遗传变异情况,采集河南省滑县地区猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)发病猪场中的病料,经研磨、稀释、离心处理后将悬液上清接种于原代猪肺泡巨噬细胞,进行病毒分离培养,结果显示,PAM出现典型细胞病变效应,将得到的分离株命名为HNhx。应用PRRSV N蛋白的特异抗体进行间接免疫荧光(IFA)试验,结果表明,接种HNhx分离株的PAM出现特异性荧光,证明该分离株为PRRSV。应用RT-PCR技术对Nsp2区进行扩增分析,根据扩增目的产物大小推测HNhx分离株为NADC30-like毒株。遗传分析发现,与其他参考毒株相比,HNhx毒株的ORF3、ORF4和ORF5基因与NADC30毒株的同源性最高。基于ORF3、ORF4和ORF5序列构建进化树,系统进化分析的结果表明,HNhx归于NADC30-like亚群。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 分离 鉴定 序列分析

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恩诺沙星单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其免疫学特性 被引量：5

4

作者 赵银丽 滕蔓 +3 位作者 邓瑞广 柴书军 刘庆堂 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第10期121-124,共4页

将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对... 将恩诺沙星(ENR)偶联于载体蛋白BSA,形成完全抗原(BSA-ENR)并免疫BALB/c小鼠,应用细胞融合技术制备分泌抗恩诺沙星的杂交瘤细胞株,用体内诱生腹水法生产ENR单克隆抗体。结果筛选出4G1-B3,4G1-G1和4G1-B9 3株敏感特异的杂交瘤。3株单抗对ENR的半数抑制浓度(IC50)分别为1.04 ng/mL,2.44 ng/mL,4.24 ng/mL。4G1-B3与环丙沙星有0.02%的交叉反应,与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%;4G1-G1和4G1-B9与其他竞争物的交叉反应率均小于0.01%。 展开更多

关键词 恩诺沙星 杂交瘤 单克隆抗体 免疫学特性

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猪繁殖与呼吸综合征免疫学研究进展 被引量：3

5

作者 冯丽丽 张改平 +1 位作者 乔松林 张丽萍 《江西农业学报》 CAS 2009年第1期112-114,共3页

综述了近年来PRRSV感染后免疫学方面的最新研究进展。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后,机体能产生快速强烈的体液免疫反应,但早期产生的抗体不仅不能产生免疫保护,反而会通过介导抗体依赖增强作用产生危害,而具有中和作用的抗体产... 综述了近年来PRRSV感染后免疫学方面的最新研究进展。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染后,机体能产生快速强烈的体液免疫反应,但早期产生的抗体不仅不能产生免疫保护,反而会通过介导抗体依赖增强作用产生危害,而具有中和作用的抗体产生缓慢。在PRRSV的免疫应答中,体液免疫和细胞免疫反应都很特别。 展开更多

关键词 PRRSV 细胞免疫 体液免疫 免疫调节 毒力变异 疫苗研究

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河南商品蛋鸡群马立克氏病病毒流行株的分离与鉴定 被引量：2

6

作者 余祖华 丁轲 +2 位作者 滕蔓 宿靖伟 罗俊 《河南科技大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2014年第1期67-70,6,共4页

2011年～2012年，河南省多个地区养殖场鸡群爆发了马立克氏病，应用外周血淋巴细胞培养分离技术对流行毒株分离并进行了PCR鉴定，最终分离到17个马立克氏病毒毒株，这些病毒株感染鸡胚成纤维细胞3～5d后均能形成典型的病毒蚀斑，从感染... 2011年～2012年，河南省多个地区养殖场鸡群爆发了马立克氏病，应用外周血淋巴细胞培养分离技术对流行毒株分离并进行了PCR鉴定，最终分离到17个马立克氏病毒毒株，这些病毒株感染鸡胚成纤维细胞3～5d后均能形成典型的病毒蚀斑，从感染细胞总DNA中均能扩增出132bp重复序列的特异性条带，且各毒株间132bp重复序列扩增产物的拷贝数存在明显差异，分离鉴定表明：河南鸡群中可能存在不同毒力马立克氏病毒野毒株的共流行。 展开更多

关键词 马立克氏病病毒 分离 鉴定 132 bp重复序列

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胶体金免疫层析快速检测技术及其在水产养殖业中的应用前景 被引量：10

7

作者 王蔚芳 李青梅 +1 位作者 郭军庆 雷霁霖 《渔业科学进展》 CSCD 北大核心 2010年第3期113-118,共6页

建立快速、准确、简便易行的病害早期快速检测技术,是从事动物疫病防控研究工作者和产业界人士的迫切愿望。自从开辟免疫分析技术以来,越来越多更灵敏、更便捷的免疫分析方法被开发出来,以胶体金免疫层析法为基础建立起来的快速检测试纸... 建立快速、准确、简便易行的病害早期快速检测技术,是从事动物疫病防控研究工作者和产业界人士的迫切愿望。自从开辟免疫分析技术以来,越来越多更灵敏、更便捷的免疫分析方法被开发出来,以胶体金免疫层析法为基础建立起来的快速检测试纸,被认为是当前最快捷、高敏感的一种免疫学检测技术。该项技术真正实现了快速简易检测靶目标,并已在畜牧业中得到普及应用,成为当前畜禽病害早期防控的最有效方法之一。本文就该项技术在畜牧兽医领域的研究进展、应用现状、发展前景进行了介绍、分析和讨论,旨在为水产养殖动物病害的早期诊断提供借鉴,以期获得一种适用于水产动物病害的、专用的快速检测新技术和新产品。 展开更多

关键词 胶体金 免疫层析 病害检测 水产养殖

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旋毛虫南阳猪体分离株的生物学特性研究 被引量：3

8

作者 肖治军 张改平 +6 位作者 邓瑞广 李学伍 杨艳艳 柴书军 赵东 邢广旭 杨继飞 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2008年第2期114-117,共4页

观测了旋毛虫南阳猪体分离株的形态大小,测定了其在小鼠和猪体中的繁殖力指数、雌虫体外产新生幼虫的能力和对低温的耐受性。测得该虫株雄成虫、雌成虫和发育充分的肌幼虫的长宽度分别为(1.415±0.164)mm×(0.048±0.014)mm... 观测了旋毛虫南阳猪体分离株的形态大小,测定了其在小鼠和猪体中的繁殖力指数、雌虫体外产新生幼虫的能力和对低温的耐受性。测得该虫株雄成虫、雌成虫和发育充分的肌幼虫的长宽度分别为(1.415±0.164)mm×(0.048±0.014)mm,(2.627±0.246)mm×(0.056±0.018)mm和(1.112±0.185)mm×(0.038±0.013)mm;其在昆明小白鼠和三元杂交猪体中的繁殖力指数分别为(112.0±59.65)和142.5;平均每条雌虫体外产新生幼虫(56.76±5.13)条;在猪肉中的感染性肌幼虫置-32℃36 h或-22℃60 h即全部死亡。结果表明,该旋毛虫南阳猪体分离株的上述生物学特性与猪旋毛虫(T.spiralis)的特性相似。 展开更多

关键词 猪 旋毛虫 特性 测定

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大菱鲆免疫球蛋白M(IgM)单克隆抗体的制备与特性鉴定 被引量：3

9

作者 王蔚芳 李青梅 +4 位作者 柴书军 甘玲玲 洪磊 郭军庆 雷霁霖 《中国工程科学》 北大核心 2014年第9期16-20,共5页

应用细胞工程技术研制大菱鲆免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)的单克隆抗体并分析其免疫学特性。小鼠骨髓瘤细胞NS0与经IgM免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,经过反复有限稀释法克隆,筛选获得4株抗大菱鲆IgM的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别... 应用细胞工程技术研制大菱鲆免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)的单克隆抗体并分析其免疫学特性。小鼠骨髓瘤细胞NS0与经IgM免疫的BALB/C小鼠脾细胞融合,经过反复有限稀释法克隆,筛选获得4株抗大菱鲆IgM的单克隆抗体杂交瘤细胞株,分别为B1D1、D5C2、E1B2和F4A1。经小鼠腹水扩大生产后,单抗效价为1∶1.024×106检测灵敏度为32 ng/mL。Western blot分析表明,获得的单抗与IgM重链区特异性结合。交叉结果显示,单抗与大菱鲆血清呈强阳性反应,与褐牙鲆、红鳍东方鲀、许氏平鲉、六线鱼、鲈鱼均呈微弱阳性反应,而与半滑舌鳎、鲤鱼、鲫鱼、草鱼、鳙鱼的血清无交叉反应。本研究制备的大菱鲆IgM单克隆抗体效价高、灵敏度高、特异性强,适合用于大菱鲆免疫学相关研究和生产实际应用。 展开更多

关键词 大菱鲆 免疫球蛋白M 单克隆抗体 BALB/C小鼠

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猪繁殖与呼吸综合征病毒不同毒株感染对猪外周血免疫细胞含量的影响 被引量：1

10

作者 万博 乔松林 +2 位作者 张改平 叶晓敏 肖志军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期1695-1698,共4页

采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株HN07-01和经典美洲株BJ-4人工感染2月龄仔猪,通过观察发病情况、检测外周血免疫细胞和PRRSV特异血清抗体水平,研究了不同毒株PRRSV的致病特性。结果表明:PRRSV变异株感染后能够引起高热症状;变... 采用猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)变异株HN07-01和经典美洲株BJ-4人工感染2月龄仔猪,通过观察发病情况、检测外周血免疫细胞和PRRSV特异血清抗体水平,研究了不同毒株PRRSV的致病特性。结果表明:PRRSV变异株感染后能够引起高热症状;变异株HN07-01株感染后引起的外周血各类免疫细胞下降速度和下降程度显著高于BJ-4株。提示PRRSV变异株引起机体的免疫抑制明显强于BJ-4株;PRRSV特异血清抗体结果表明:变异株和BJ-4株均能快速诱导机体产生抗体。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征 白细胞 抗体 体温

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基于免疫层析试纸的猪O型FMDV抗体水平监测 被引量：1

11

作者 卢清侠 杨继飞 +5 位作者 金前跃 杨苏珍 柴书军 万博 郝慧芳 张改平 《河南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期558-561,567,共5页

为了应用免疫层析试纸评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,对50头试验仔猪进行免疫注射,并在首次免疫后28 d及2次免疫后20 d采血,通过试纸定量测定结果来监测试验猪抗体水平变化,同时对比猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试... 为了应用免疫层析试纸评价猪口蹄疫O型合成肽疫苗的免疫效果,对50头试验仔猪进行免疫注射,并在首次免疫后28 d及2次免疫后20 d采血,通过试纸定量测定结果来监测试验猪抗体水平变化,同时对比猪口蹄疫病毒VP1结构蛋白抗体酶联免疫吸附试验诊断试剂盒的检测结果.结果表明,猪口蹄疫O型合成肽疫苗能快速诱导产生高水平的抗体,首次免疫抗体阳性率达88%,2次免疫抗体阳性率高达100%.试纸定量测定结果表明,2次免疫后猪群免疫抗体水平整体显著提升,并保持在较高水平.与ELISA试剂盒比较二者具有相同的敏感性和特异性,符合率为100%. 展开更多

关键词 FMDV 免疫抗体水平 免疫层析试纸 定量测定 ELISA

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乙脑病毒Henan-09-03株E蛋白结构与功能生物信息学分析 被引量：2

12

作者 张二芹 滕蔓 +4 位作者 罗俊 王瑞宁 许倩茹 邓瑞广 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2015年第5期36-40,共5页

利用生物信息学软件对Henan-09-03株乙型脑炎病毒(JEV)病毒E蛋白(囊膜蛋白)进行生物信息学分析、预测,为研究JEV的E蛋白基因工程疫苗提供依据。结果表明:E蛋白的分子质量为53 k Da,等电点是7.75,消光系数是66 515,不稳定系数为27.05,疏... 利用生物信息学软件对Henan-09-03株乙型脑炎病毒(JEV)病毒E蛋白(囊膜蛋白)进行生物信息学分析、预测,为研究JEV的E蛋白基因工程疫苗提供依据。结果表明:E蛋白的分子质量为53 k Da,等电点是7.75,消光系数是66 515,不稳定系数为27.05,疏水平均值为-0.007,无信号肽,有2个跨膜区、27个蛋白修饰位点、5个二硫键、15个蛋白质结合位点,二级结构为α-β混合型、三级结构以同源四聚体形式存在。 展开更多

关键词 乙型脑炎病毒 E蛋白 生物信息学分析

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大菱鲆疾病早期快速检测方法--胶体金免疫层析试纸的研制与建立 被引量：2

13

作者 王蔚芳 柴书军 +5 位作者 刘庆堂 雷霁霖 丁福红 洪磊 刘新富 苏柯 《中国工程科学》 北大核心 2012年第2期8-13,共6页

使用成分单一的牛血清白蛋白(BSA)为模拟病原,以胶体金标记兔抗血清(即大菱鲆免疫球蛋白多抗)作为检测示踪物,并分别将BSA和葡萄球菌A蛋白印记到硝酸纤维素膜上制成检测线和对照线,通过一系列工艺创制与组装配套,首次成功制备了一套完... 使用成分单一的牛血清白蛋白(BSA)为模拟病原,以胶体金标记兔抗血清(即大菱鲆免疫球蛋白多抗)作为检测示踪物,并分别将BSA和葡萄球菌A蛋白印记到硝酸纤维素膜上制成检测线和对照线,通过一系列工艺创制与组装配套,首次成功制备了一套完整的大菱鲆抗体快速检测试纸。采用大菱鲆抗BSA血清作为阳性样本,以健康大菱鲆血清作为阴性样本,用以检验试纸的性能,并与酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测结果相比较。结果表明:本试纸检测抗体的特异性与敏感性均很高,与ELISA方法相当,而且使用方便,不需专业技能和额外的试剂与辅助仪器设备,5 min内即可用裸眼获得观察结果,很适合于基层生产操作及户外调研使用。以该实验为基础建立起来的抗体检测试纸,亦可推广应用于其他病害抗体的检测,可为鱼类疾病早期发生提供简易、快捷和操作性强的诊断方法。 展开更多

关键词 大菱鲆 抗体 试纸 现场快速检测 胶体金免疫层析 疾病

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猪细小病毒病毒样颗粒疫苗研究进展 被引量：12

14

作者 刘运超 陈玉梅 +4 位作者 姬鹏超 赵宝磊 王聚财 邓瑞广 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第10期12-16,共5页

猪细小病毒(PPV)感染可导致母猪繁殖障碍、断奶仔猪多系统衰弱综合征和肠炎性腹泻等疾病,给养猪业造成巨大的经济损失。临床防控以接种疫苗为主,常用的疫苗有弱毒疫苗和灭活疫苗。随着生物技术的发展,新型PPV疫苗的研究工作成绩显著。VP... 猪细小病毒(PPV)感染可导致母猪繁殖障碍、断奶仔猪多系统衰弱综合征和肠炎性腹泻等疾病,给养猪业造成巨大的经济损失。临床防控以接种疫苗为主,常用的疫苗有弱毒疫苗和灭活疫苗。随着生物技术的发展,新型PPV疫苗的研究工作成绩显著。VP2蛋白是PPV主要的衣壳蛋白,对研究新型PPV疫苗至关重要,综述了猪细小病毒VP2蛋白及病毒样颗粒疫苗的研究进展,以期为新型PPV疫苗的研究提供参考。 展开更多

关键词 猪 猪细小病毒 VLP 疫苗 VP2蛋白

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黄曲霉毒素的危害及检测方法研究进展 被引量：16

15

作者 王磊 侯玉泽 +4 位作者 胡骁飞 邓瑞广 职爱民 张改平 孙亚宁 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第2期123-127,共5页

黄曲霉毒素(AFT)是迄今发现的毒性最强的一类生物毒素,有AFB1、AFB2、AFG1、AFG2等多种形式,对人和动物有强烈的毒性,为对AFT的检测工作提供方便,特对AFT的危害及目前的检测方法进行了综述。

关键词 黄曲霉毒素 危害 检测方法

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脂多糖对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β及TNF-α的影响 被引量：11

16

作者 冯丽丽 张丽萍 +4 位作者 张改平 乔松林 田晓辉 万博 王秋霞 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2009年第3期106-109,共4页

研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，... 研究了脂多糖的浓度、刺激时间对猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α的影响。分别用不同浓度的脂多糖和不同的刺激时间处理猪肺泡巨噬细胞，收集细胞，提取RNA，用实时荧光定量PCR方法检测IL-1、TNF-αmRNA表达水平；同时收集培养上清，用ELISA检测试剂盒检测IL-1β、TNF-α蛋白表达水平。结果表明，脂多糖浓度（1-1000ng／mL）对IL-1β、TNF-α影响显著（P％0．05）；刺激时间（1-24h）对IL-1β、TNF-α影响显著（P〈0．05），且蛋白的表达水平迟于mRNA的表达水平。脂多糖诱导猪肺泡巨噬细胞分泌IL-1β、TNF-α具有剂量、时间依赖性。 展开更多

关键词 脂多糖 猪肺泡巨噬细胞 白细胞介素-1Β 肿瘤坏死因子-Α

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6×His-tag在抗菌肽表达纯化中的应用及其对抗菌肽活性的影响 被引量：8

17

作者 牛明福 李翔 +2 位作者 邢广旭 张红梅 宫强 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2008年第12期121-124,共4页

为方便抗菌肽的体外表达和纯化,以蝎子防御素为对象,在其编码基因末端加入6×His-tag,在酵母表达系统中表达,获得有活性的防御素Sd和融合蛋白Sd-His。进一步纯化、体外抑菌活性及热酸稳定性等试验发现,6×His-tag不但没有降低... 为方便抗菌肽的体外表达和纯化,以蝎子防御素为对象,在其编码基因末端加入6×His-tag,在酵母表达系统中表达,获得有活性的防御素Sd和融合蛋白Sd-His。进一步纯化、体外抑菌活性及热酸稳定性等试验发现,6×His-tag不但没有降低防御素的抑菌活性,反而有稍微的增强趋势。结果表明,6×His-tag可用于抗菌肽的融合表达且不影响其活性,为抗菌肽的表达纯化提供了一个更简便有效的方法。 展开更多

关键词 6×His—tag 抗菌肽 表达纯化 抑菌活性 热酸稳定性

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猪圆环病毒2型SYBRGreen Real-time qPCR检测方法的建立 被引量：9

18

作者 冯华 刘运超 +2 位作者 陈玉梅 魏蔷 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期98-103,共6页

为了建立一种基于SYBRGreen的猪圆环病毒2型(PCV2)荧光定量PCR诊断方法,以PCV2 ORF2基因序列为研究对象,构建p MD19T-ORF2重组质粒作为阳性标准品,设计特异性引物,对该方法的最适引物浓度、退火进行了优化,并对该方法的灵敏度、特异性... 为了建立一种基于SYBRGreen的猪圆环病毒2型(PCV2)荧光定量PCR诊断方法,以PCV2 ORF2基因序列为研究对象,构建p MD19T-ORF2重组质粒作为阳性标准品,设计特异性引物,对该方法的最适引物浓度、退火进行了优化,并对该方法的灵敏度、特异性、可重复性以及临床样品检出率进行了评价。结果表明,该方法引物的最佳终浓度为0. 2 mol/L,最适退火温度为55℃;检测限可达到3. 0×10~2个拷贝/mL,而普通PCR检测限在3. 0×10~4个拷贝/mL;溶解曲线分析显示,在77~79℃有单一的溶解峰出现,并与CSFV、PPV、PRRSV、PRV没有交叉反应;组内重复性变异系数为0. 29%~0. 32%,组间变异系数为0. 32%~0. 36%;此外,该方法对临床样品的检出率为81. 5%(31/38),而常规PCR为68. 4%(26/38)。因此,相比常规PCR,该方法更为快速、灵敏、特异、稳定,更适合PCV2临床样品的检测,可为该PCV2早期感染的快速检测提供新方法。 展开更多

关键词 猪圆环病毒2型 PCV2 ORF2 SYBRGreen REAL-TIME qPCR

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猪囊尾蚴排泄分泌抗原Ts8B1蛋白原核表达条件的优化 被引量：13

19

作者 王秋霞 张美英 +5 位作者 张改平 王选年 宁长申 鲁琨 张龙现 菅复春 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期59-63,共5页

研究了培养基、温度、诱导时间I、PTG和氨苄青霉素终浓度以及诱导前后温度变化等不同条件对重组菌菌体生长和融合蛋白表达量的影响,以期获得猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)Ts8B1蛋白基因在大肠杆菌中的最大表达量。结果显示,使用TB培养基... 研究了培养基、温度、诱导时间I、PTG和氨苄青霉素终浓度以及诱导前后温度变化等不同条件对重组菌菌体生长和融合蛋白表达量的影响,以期获得猪囊尾蚴排泄分泌抗原(ES Ag)Ts8B1蛋白基因在大肠杆菌中的最大表达量。结果显示,使用TB培养基于37℃培养3 h后,采用终浓度为0.2mmol/L的IPTG和200mmol/L的氨苄青霉素在32℃过夜诱导培养,pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白表达量最大,表达的融合蛋白约占菌体总蛋白的33%。SDS-PAGE表明pGEX-6p-1/Ts8B1融合蛋白大小约为33 kDa,与预计的分子量大小一致,Western blot分析表明其能与猪囊尾蚴多克隆抗体起特异性反应,并获得最大产量的融合蛋白。为研究其在猪囊尾蚴病检测中的应用价值奠定了基础。 展开更多

关键词 猪囊尾蚴 排泄分泌抗原 Ts8B1蛋白 原核表达

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肉鸡舍内有害气体控制技术研究进展 被引量：15

20

作者 魏凤仙 胡骁飞 +2 位作者 李绍钰 徐彬 孙全友 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期231-234,共4页

鸡舍内有害气体超标是引起鸡呼吸道疾病的关键因素,作者就鸡舍内的主要有害气体种类及对鸡危害作一概述,并详细阐述了控制鸡舍内有害气体的技术措施。

关键词 肉鸡 肉鸡舍 有害气体 控制技术

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