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基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
李鹏
雷梦瑶
+9 位作者
冯丽丽
王振伟
管春晓
郑洪双
王俊茹
王利平
李炎锦
吴欣媛
刘兴友
金前跃
《河南农业科学》
北大核心
2024年第7期133-141,共9页
Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,...
Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,Penton蛋白最佳包被质量浓度为2μg/mL,血清稀释倍数为200倍,酶标抗体稀释倍数为1∶5000,阳性临界值为0.222,敏感性可达到1∶6400,与鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒均无交叉反应,特异性良好,批间批内重复性变异系数均<10%,在100份临床血清中阳性检出率为77%,与商品化试剂盒检出符合率可达98%。综上,建立的ELISA抗体检测方法可以用于禽腺病毒4型临床抗体检测。
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关键词
禽腺病毒血清4型
Penton蛋白
间接ELISA
抗体检测
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职称材料
基于二聚体核衣壳蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体iELISA检测方法建立
被引量：
1
2
作者
赵啸
乔松林
+3 位作者
孙亚宁
钱祁昇
李睿
张改平
《河南农业科学》
北大核心
2024年第11期135-146,共12页
为制备稳定性好、免疫反应性佳的核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N),设计表达二聚体N蛋白(N-dimer),并基于该蛋白质建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体间接酶联免疫吸附试验...
为制备稳定性好、免疫反应性佳的核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N),设计表达二聚体N蛋白(N-dimer),并基于该蛋白质建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体间接酶联免疫吸附试验(Indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)检测方法。首先选取当前PRRSV国内优势毒株NADC30-like N蛋白基因序列,通过(GGGGS)3linker将N蛋白基因序列串联,经密码子优化合成后构建N-dimer重组表达载体。利用原核表达系统进行诱导表达,并通过镍离子螯合亲和层析法进行纯化。Western-blot分析其与PRRSV阳性和阴性血清的反应性;冻融法比较N-dimer与单体N蛋白(N-monomer)的沉淀析出情况;ELISA法比较N-dimer与N-monomer的免疫反应性。以N-dimer作为包被抗原建立PRRSV抗体iELISA检测方法,对该方法的反应条件进行优化,验证其特异性、敏感性、重复性,并应用于临床血清样品检测。结果表明,在16℃、0.2 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷条件下诱导16 h,N-dimer获得大量可溶性表达。Western-blot结果表明,N-dimer能够与PRRSV阳性血清发生特异性反应;相较于N-monomer,N-dimer能够稳定保存,并且免疫反应性更佳。成功建立了基于N-dimer的PRRSV抗体iELISA检测方法,且该方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性;与商业试剂盒结果进行比较,其阳性符合率为96.88%,总符合率为96.86%,符合率高。综上,成功制备了稳定性好、免疫反应性佳的N-dimer,并基于N-dimer建立了PRRSV抗体iELISA检测方法。
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关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
核衣壳蛋白
二聚体
间接ELISA
临床检测
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职称材料
题名
基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立
被引量：
2
1
作者
李鹏
雷梦瑶
冯丽丽
王振伟
管春晓
郑洪双
王俊茹
王利平
李炎锦
吴欣媛
刘兴友
金前跃
机构
新乡
学院
生物工程
学院
河南
科技
学院
动物
科技
学院
鹤壁职业技术
学院
河南
农业
大
学
动物
医
学院
河南省农业科学院动物疫病防控研究所/动物免疫学重点实验室
出处
《河南农业科学》
北大核心
2024年第7期133-141,共9页
基金
河南省农业科学院杰出青年科技基金项目(2024JQ01)。
文摘
Penton蛋白是构成禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)衣壳的主要结构蛋白,具备高度保守性与良好的免疫原性。以纯化的Penton蛋白为包被抗原,建立一种基于禽腺病毒血清4型Penton蛋白的间接ELISA抗体检测方法。结果显示,Penton蛋白最佳包被质量浓度为2μg/mL,血清稀释倍数为200倍,酶标抗体稀释倍数为1∶5000,阳性临界值为0.222,敏感性可达到1∶6400,与鸡传染性支气管炎病毒、鸡传染性法氏囊病病毒、鸡传染性喉气管炎病毒均无交叉反应,特异性良好,批间批内重复性变异系数均<10%,在100份临床血清中阳性检出率为77%,与商品化试剂盒检出符合率可达98%。综上,建立的ELISA抗体检测方法可以用于禽腺病毒4型临床抗体检测。
关键词
禽腺病毒血清4型
Penton蛋白
间接ELISA
抗体检测
Keywords
Fowl adenovirus serotype 4
Penton protein
Indirect ELISA
Antibody detection
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
基于二聚体核衣壳蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体iELISA检测方法建立
被引量：
1
2
作者
赵啸
乔松林
孙亚宁
钱祁昇
李睿
张改平
机构
西北农林科技大
学
动物
医
学院
河南省农业科学院动物疫病防控研究所/动物免疫学重点实验室
出处
《河南农业科学》
北大核心
2024年第11期135-146,共12页
基金
河南省重大科技专项(221100110600-03)
国家生猪产业技术体系项目(CARS-35)
河南省现代农业(生猪)产业技术体系项目(HARS-22-12-S)。
文摘
为制备稳定性好、免疫反应性佳的核衣壳蛋白(Nucleocapsid protein,N),设计表达二聚体N蛋白(N-dimer),并基于该蛋白质建立猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)抗体间接酶联免疫吸附试验(Indirect enzyme-linked immunosorbent assay,iELISA)检测方法。首先选取当前PRRSV国内优势毒株NADC30-like N蛋白基因序列,通过(GGGGS)3linker将N蛋白基因序列串联,经密码子优化合成后构建N-dimer重组表达载体。利用原核表达系统进行诱导表达,并通过镍离子螯合亲和层析法进行纯化。Western-blot分析其与PRRSV阳性和阴性血清的反应性;冻融法比较N-dimer与单体N蛋白(N-monomer)的沉淀析出情况;ELISA法比较N-dimer与N-monomer的免疫反应性。以N-dimer作为包被抗原建立PRRSV抗体iELISA检测方法,对该方法的反应条件进行优化,验证其特异性、敏感性、重复性,并应用于临床血清样品检测。结果表明,在16℃、0.2 mmol/L异丙基硫代半乳糖苷条件下诱导16 h,N-dimer获得大量可溶性表达。Western-blot结果表明,N-dimer能够与PRRSV阳性血清发生特异性反应;相较于N-monomer,N-dimer能够稳定保存,并且免疫反应性更佳。成功建立了基于N-dimer的PRRSV抗体iELISA检测方法,且该方法具有良好的特异性、灵敏性、重复性;与商业试剂盒结果进行比较,其阳性符合率为96.88%,总符合率为96.86%,符合率高。综上,成功制备了稳定性好、免疫反应性佳的N-dimer,并基于N-dimer建立了PRRSV抗体iELISA检测方法。
关键词
猪繁殖与呼吸综合征病毒
核衣壳蛋白
二聚体
间接ELISA
临床检测
Keywords
PRRSV
N protein
Dimer
iELISA
Clinical detection
分类号
S858.28 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于Penton蛋白禽腺病毒血清4型间接ELISA抗体检测方法的建立
李鹏
雷梦瑶
冯丽丽
王振伟
管春晓
郑洪双
王俊茹
王利平
李炎锦
吴欣媛
刘兴友
金前跃
《河南农业科学》
北大核心
2024
2
在线阅读
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职称材料
2
基于二聚体核衣壳蛋白的猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体iELISA检测方法建立
赵啸
乔松林
孙亚宁
钱祁昇
李睿
张改平
《河南农业科学》
北大核心
2024
1
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