鸡传染性法氏囊病病毒河南分离株HeYD VP2基因高变区基因克隆及序列分析 被引量：3

1

作者 鄂巍 张改平 +3 位作者 罗俊 滕蔓 王兴涛 王爱萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第3期149-153,共5页

为初步确定新分离的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)河南株HeYD的毒力,根据GenBank数据库中已报道的IBDV基因组序列,设计合成了1对VP2基因高变区特异性引物,应用RT-PCR方法对分离自河南省某发病鸡场的IBDV野毒株HeYD的VP2基因高变区进行了基... 为初步确定新分离的鸡传染性法氏囊病毒(IBDV)河南株HeYD的毒力,根据GenBank数据库中已报道的IBDV基因组序列,设计合成了1对VP2基因高变区特异性引物,应用RT-PCR方法对分离自河南省某发病鸡场的IBDV野毒株HeYD的VP2基因高变区进行了基因克隆及序列分析,并与其他参考毒株高变区进行了序列比对。序列分析结果表明,HeYD株的VP2基因高变区具有IBDV超强毒株典型的氨基酸序列特征,即222位(A)、256位(I)、294位(I)和299位(S),表明HeYD为超强毒株。利用VP2基因高变区序列构建基因进化树,发现HeYD株与国内超强毒株如xin-1、GX8-99以及国外超强毒株如日本的OKYM和欧洲的DV86毒株亲缘关系较近。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 VP2基因高变区 基因克隆 基因进化树

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口蹄疫抗体免疫层析试纸的临床应用及性能评价 被引量：2

2

作者 杨苏珍 杨继飞 +6 位作者 李清州 卢清侠 万博 鲍登克 刘运超 柴书军 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第10期148-152,共5页

为评价前期研制的猪口蹄疫O型抗体检测试纸的临床应用效果,检测了162头份口蹄疫病毒(FMDV)多肽疫苗免疫猪血清和87头份灭活疫苗免疫猪血清,并与UBI FMDV抗体检测ELISA和美国BioXL FMDV抗体检测ELISA做平行对比试验。结果显示,试纸与2种E... 为评价前期研制的猪口蹄疫O型抗体检测试纸的临床应用效果,检测了162头份口蹄疫病毒(FMDV)多肽疫苗免疫猪血清和87头份灭活疫苗免疫猪血清,并与UBI FMDV抗体检测ELISA和美国BioXL FMDV抗体检测ELISA做平行对比试验。结果显示,试纸与2种ELISA方法的符合率分别为95.06%和96.55%。说明该试纸可以用于猪FMDV O型抗体的临床检测,为评价口蹄疫疫苗免疫效果提供了快速、简便的方法。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 免疫层析试纸 ELISA

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动物病毒microRNA的研究进展 被引量：1

3

作者 薛白 王树芬 +2 位作者 鲍登克 邓瑞广 李学伍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第6期15-18,共4页

MicroRNAs(miRNAs)是一种含有约22～25个核苷酸的非编码单链RNA分子,广泛存在于人类及其他各种生物中。它通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对,引起靶mRNA降解或者抑制其翻译,从而调节基因的转录后表达水平。病毒microRNA是新发现的一类mi... MicroRNAs(miRNAs)是一种含有约22～25个核苷酸的非编码单链RNA分子,广泛存在于人类及其他各种生物中。它通过与靶mRNA特异性的碱基互补配对,引起靶mRNA降解或者抑制其翻译,从而调节基因的转录后表达水平。病毒microRNA是新发现的一类miRNA,综述了近年来病毒microRNA的产生、作用机制、生物学功能及其在动物上的研究进展。 展开更多

关键词 病毒 MICRORNA 基因调控 动物疾病

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缺失免疫抑制位点的人早孕因子重组蛋白的免疫原性

4

作者 王林林 张改平 +5 位作者 郭军庆 王丽 杜晓明 冯华 权凯 王爱萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期918-920,922,共4页

目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和X... 目的:构建缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因的原核表达载体pGEX6P-EPF11,诱导GST-EPF11融合蛋白在大肠杆菌中表达,并免疫小鼠,测定效价。方法:以pMD18T-HSPE1模板,PCR扩增缺失免疫抑制位点的人早孕因子基因片段,经限制性内切酶BamHI和XhoI双酶切后,连接到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建重组表达质粒pGEX6P-EPF11。将表达质粒转化大肠杆菌BL21,以1 mmol/L IPTG进行诱导表达GST-EPF11融合蛋白,Western blot鉴定。以表达的GST-EPF11融合蛋白作为免疫原免疫小鼠,抗体效价用ELISA检测。结果:在大肠杆菌中成功表达出相对分子质量约35 000的融合蛋白GST-EPF11。ELISA法检测免疫小鼠的抗体血清可达1∶12 800。结论:在大肠杆菌中成功表达出GST-EPF11融合蛋白,并免疫了小鼠,测定了抗体效价,为下步制备缺失免疫抑制位点的人早孕因子的单克隆抗体(mAb)奠定了基础。 展开更多

关键词 早孕因子 免疫抑制位点 原核表达 PCR

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猪流行性乙型脑炎病毒种猪精液分离株的鉴定及进化分析 被引量：10

5

作者 王兴涛 罗俊 +5 位作者 滕蔓 樊剑鸣 鄂巍 禹斌 刘力 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第5期152-157,共6页

利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠... 利用RT-PCR技术对河南省某规模化猪场乙脑疑似病例的种猪精液进行分析,从部分样本中扩增出与流行性乙型脑炎病毒(JEV)M基因和E基因具有高度同源性的预期产物。在3日龄乳鼠脑内接种种猪精液上清,10 d左右即出现典型神经症状,并且病死鼠脑组织RT-PCR结果均为阳性。用病死鼠脑组织研磨上清接种BHK-21细胞,感染60 h后用JEV单抗进行间接免疫荧光鉴定均为阳性,这表明分离毒株均为JEV流行毒株,分别命名为BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3。对新分离毒株进行体外细胞培养,BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3连续传代3次后病毒量均获得明显增加,最高分别可达104.5±0.1TCID50/mL和104.2±0.2TCID50/mL。用生物学软件MEGA 4.0分别构建JEV基因的系统进化树,发现BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3处于同一进化分支,均属于基因Ⅲ型。 展开更多

关键词 流行性乙型脑炎病毒 分离鉴定 M基因 E基因 系统进化树 基因Ⅲ型

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2,4-D的毒性与残留检测方法研究进展 被引量：15

6

作者 龚芳 席俊 +3 位作者 职爱民 胡骁飞 邓瑞广 陆启玉 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第8期40-43,共4页

2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)是常用的除草剂和植物生长调节剂,并被广泛应用于提高水果品质和延长保鲜时间,但其毒性和残留问题日益受到人们的重视。为了给2,4-D的检测提供方便,从免疫毒性、生殖毒性及其他毒性方面综述了其毒副作用,简要叙... 2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)是常用的除草剂和植物生长调节剂,并被广泛应用于提高水果品质和延长保鲜时间,但其毒性和残留问题日益受到人们的重视。为了给2,4-D的检测提供方便,从免疫毒性、生殖毒性及其他毒性方面综述了其毒副作用,简要叙述了其检测方法,如高效液相色谱法、气象色谱法、联用技术、免疫学检测方法等。 展开更多

关键词 2 4-二氯苯氧乙酸 毒性 残留检测方法

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抗猪FcγRⅡb多抗阻断猪繁殖与呼吸综合征病毒抗体依赖增强作用研究 被引量：6

7

作者 蒋志政 张改平 +6 位作者 刘明阳 乔松林 刘永晖 王蕊 万博 鲍登克 王爱萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第4期139-142,145,共5页

为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同... 为验证猪FcγRⅡb在抗体依赖增强(ADE)作用中的功能,从猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)阳性血清中提取IgG并制备F(ab′)2片段,将104 TCID50的PRRSV病毒与80μg/mL的F(ab′)2片段或抗PRRSV阳性血清(中和效价1/5.9,经128倍稀释)混合,共同感染猪肺泡巨噬细胞(PAM)和Marc-145细胞,发现亚中和滴度的阳性血清能显著增强病毒对PAM的感染,但不能增强病毒对Marc-145细胞的感染;而F(ab′)2片断不能增强病毒感染;用兔抗猪FcγRⅡb多抗孵育PAM细胞,再用上述病毒与阳性血清复合物感染PAM,结果阳性血清对病毒感染的增强作用受到明显抑制。表明猪FcγRⅡb能够介导PRRSV ADE作用。 展开更多

关键词 抗体依赖增强(ADE) 阻断 IgGFc受体 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 感染

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可视化LAMP快速检测猪伪狂犬病毒 被引量：10

8

作者 王树芬 王德国 +3 位作者 薛白 李学伍 赵东 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第6期140-143,共4页

为快速检测猪伪狂犬病毒(PRV),利用PRV DBP基因上的一段序列设计并合成3对LAMP引物,采用一种新的荧光染料——罗丹明B衍生物作指示剂,该指示剂在反应前加到反应缓冲液里,通过优化反应条件,建立了可视化LAMP快速检测PRV的方法。结果表明... 为快速检测猪伪狂犬病毒(PRV),利用PRV DBP基因上的一段序列设计并合成3对LAMP引物,采用一种新的荧光染料——罗丹明B衍生物作指示剂,该指示剂在反应前加到反应缓冲液里,通过优化反应条件,建立了可视化LAMP快速检测PRV的方法。结果表明,63℃下恒温反应40min可得到肉眼可视结果,颜色变成蓝色判定为阳性,仍然保持紫色判定为阴性,可视化LAMP结果与电泳结果一致。建立的可视化LAMP方法可以快速、直观、准确地检测PRV。 展开更多

关键词 猪伪狂犬病毒(PRV) 环介导等温扩增技术(LAMP) 罗丹明B衍生物指示剂

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A型口蹄疫病毒VP1蛋白间接ELISA检测方法的建立 被引量：6

9

作者 卢清侠 刘畅 +4 位作者 郭官鹏 邢广旭 刘运超 邓瑞广 张改平 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期30-35,共6页

以原核表达经纯化复性制备的A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白代替传统病毒抗原包被,建立快速、安全、有效的A型FMDV抗体ELISA检测方法。对前期制备的A型VP1蛋白进行Western-Blot检测,结果表明,VP1蛋白能够特异性识别A型FMDV阳性牛血清,可作... 以原核表达经纯化复性制备的A型口蹄疫病毒(FMDV)VP1蛋白代替传统病毒抗原包被,建立快速、安全、有效的A型FMDV抗体ELISA检测方法。对前期制备的A型VP1蛋白进行Western-Blot检测,结果表明,VP1蛋白能够特异性识别A型FMDV阳性牛血清,可作为检测抗原建立检测A型FMDV抗体的方法。以最佳质量浓度1mg/L VP1蛋白为检测抗原,方阵滴定法确定最佳检测血清稀释度为1∶50[V(血清)∶V(封闭液)],最佳的酶标二抗稀释度为1∶2 000[V(酶标二抗)∶V(封闭液)],建立A型FMDV抗体ELISA检测方法。该方法的敏感性为94.32%,特异性为99.09%,批内与批间重复试验变异系数均小于8%。采用该方法检测201份临床血清,与液相阻断ELISA试剂盒的符合率达92.54%。研制的VP1-ELISA试剂盒特异、敏感、稳定、操作简便,可用来监控A型口蹄疫抗体水平。 展开更多

关键词 A型口蹄疫病毒 VP1蛋白 间接ELISA

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A型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的表达纯化及活性检测 被引量：2

10

作者 刘畅 卢清侠 +5 位作者 杨继飞 王世红 王寅彪 郭官鹏 邓瑞广 张改平 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期7-12,共6页

为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,... 为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29ku。通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,结果表明,在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大。Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别。ELISA检测结果显示,VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性。 展开更多

关键词 A型口蹄疫病毒 VP1蛋白 原核表达 蛋白纯化 活性鉴定

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五味子及其提取物在养殖业中的应用研究进展 被引量：2

11

作者 魏凤仙 胡骁飞 +4 位作者 徐彬 李绍钰 冯长松 焦玉萍 孙全友 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第10期17-19,23,共4页

五味子含有多种营养成分和生物活性物质,能提高动物生产性能、增强机体免疫力、改善畜禽产品品质,是一种良好的抗生素替代品。综述了五味子及其提取物的理化性质、药理功能及其在畜牧养殖业中的应用研究进展,并展望了其应用前景。

关键词 五味子 养殖业 抗生素 生产性能 免疫功能

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IBDV VP2蛋白P22表位多肽的原核表达及初步鉴定 被引量：2

12

作者 王倩倩 张改平 +4 位作者 王选年 宋幸辉 卢清侠 王世红 王爱萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期150-153,共4页

为了进一步了解传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白P22多肽抗原表位的功能,根据IBDVVP2蛋白的三维结构,设计合成编码P22多肽的基因序列,通过大肠杆菌密码子优化,并将基因序列P22串联二次合成并转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。用IPTG诱导P22基... 为了进一步了解传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白P22多肽抗原表位的功能,根据IBDVVP2蛋白的三维结构,设计合成编码P22多肽的基因序列,通过大肠杆菌密码子优化,并将基因序列P22串联二次合成并转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株。用IPTG诱导P22基因的表达。表达纯化后的P22多肽经SDS-PAGE电泳和Western-blot分析及传染性法氏囊病毒快速检测试纸条检测。结果表明,P22表位多肽的分子质量约为16kD,并能被His单抗识别,用试纸条检测纯化的P22多肽,呈阳性反应结果。提示IBDV VP2蛋白P22多肽能与IBDV单抗特异性反应。 展开更多

关键词 法氏囊病毒 P22抗原表位 SDS-PAGE 多肽 检测

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猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

13

作者 王蕊 张改平 +5 位作者 乔松林 刘永晖 蒋志政 万博 鲍登克 王爱萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期137-140,144,共5页

为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反... 为建立猪IFN-β及IRF-3基因实时荧光定量PCR检测方法,依据GenBank中IFN-β和IRF-3基因的保守序列,设计并合成各自特异性引物,并以β-actin为内参基因,采用SYBR Green-Ⅰ为染料,建立实时荧光定量检测方法。提取猪肺泡巨噬细胞总RNA,经反转录得cDNA,用特异性引物经PCR扩增得到IFN-β和IRF-3基因,将其克隆至pMD-19T载体,经测序鉴定后得重组质粒,依次10倍稀释做为标准品,建立标准曲线及溶解曲线。结果表明,β-actin基因、IFN-β基因和IRF-3基因标准曲线线性关系较好,R2≥0.997;溶解曲线为特异性单峰,无非特异性扩增,检测下限可达100个拷贝/μL。建立的猪IFN-β和IRF-3基因实时荧光定量RT-PCR检测方法,特异性强、重复性好,为从分子水平上研究猪的免疫应答奠定了基础。 展开更多

关键词 猪 实时荧光定量PCR IFN-β基因 IRF-3基因

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刺五加提取物在饲料中的应用研究进展 被引量：7

14

作者 魏凤仙 陈亮 +2 位作者 胡骁飞 封元 张建勇 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2010年第9期138-140,共3页

对刺五加及其提取物的主要活性成分、药理功效及在畜禽生产中的应用效果等方面进行了综述,为在饲料生产中应用刺五加及其提取物提供参考。

关键词 刺五加 提取物 免疫功能

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猪繁殖与呼吸综合征病毒nsp7蛋白的表达与纯化 被引量：2

15

作者 刘永晖 张改平 +6 位作者 乔松林 刘明阳 蒋志政 王蕊 万博 鲍登克 王爱萍 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第5期141-144,共4页

为了解nsp7重组蛋白的免疫学活性,采用RT-PCR的方法从猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)BJ-4毒株中扩增得到nsp7基因,将基因连接到pET-28a载体并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,利用Ni-NTA进行亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对... 为了解nsp7重组蛋白的免疫学活性,采用RT-PCR的方法从猪繁殖与呼吸道综合症病毒(PRRSV)BJ-4毒株中扩增得到nsp7基因,将基因连接到pET-28a载体并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达,利用Ni-NTA进行亲和纯化,通过SDS-PAGE和Western-blot对重组蛋白进行分析和鉴定,通过间接ELISA方法研究了重组蛋白的免疫学活性。结果表明,成功制备了nsp7重组蛋白,间接ELISA结果表明,重组蛋白具有良好的免疫活性,为建立nsp7特异性抗体的间接ELSIA检测方法及PRRS诊断试剂盒的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合症病毒 nsp7蛋白 BJ-4病毒 原核表达

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口蹄疫3D蛋白N端T细胞表位重组蛋白的表达、纯化及鉴定 被引量：1

16

作者 卢清侠 王世红 +3 位作者 金前跃 李清州 郝慧芳 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2012年第9期133-137,共5页

为获得具有抗原性的口蹄疫病毒(FMDV)3D蛋白N端T细胞表位的重组表达蛋白,根据FMDV3D蛋白前115位氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET-28a中,构建原核表达质粒pET28a-115,并将重组质粒转化至BL21(DE3)细胞。经IPT... 为获得具有抗原性的口蹄疫病毒(FMDV)3D蛋白N端T细胞表位的重组表达蛋白,根据FMDV3D蛋白前115位氨基酸序列,设计优化并人工合成相应的核酸序列,将其克隆至pET-28a中,构建原核表达质粒pET28a-115,并将重组质粒转化至BL21(DE3)细胞。经IPTG诱导后,收集菌液进行SDS-PAGE和Western-bolt鉴定,结果显示,在16kD处有一条明显的蛋白表达条带。对表达产物进行可溶性分析,结果表达蛋白50%为可溶性蛋白,经Ni-NTA亲和层析纯化后获得了较高浓度和纯度的目的蛋白。研究结果表明,含FMDV 3D蛋白前115位氨基酸的重组蛋白在大肠杆菌中得到了高效可溶性表达,并具有较好的抗原活性,为开发口蹄疫诊断试剂和基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 口蹄疫 3D聚合酶 T细胞表位重组蛋白 原核表达 疫苗佐剂

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moFcγRⅢ、γ链真核表达载体的构建及其共转染稳定细胞系的建立

17

作者 席俊 唐志鹏 +3 位作者 张利娜 宋爱宾 王少兵 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第8期190-193,共4页

将moFcγRⅢ、γ链编码区cDNA分别亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3moRⅢ、pc3moγ;用PvuⅠ线性化重组质粒,以线性化重组质粒共转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测moFcγRⅢ在转染细胞表面的表达... 将moFcγRⅢ、γ链编码区cDNA分别亚克隆到真核表达载体pcDNA3的巨细胞病毒启动子下游,构建了重组表达质粒pc3moRⅢ、pc3moγ;用PvuⅠ线性化重组质粒,以线性化重组质粒共转染COS-7细胞,用玫瑰花环试验检测moFcγRⅢ在转染细胞表面的表达,通过G418抗性筛选和单细胞克隆,在转染细胞表面稳定表达了moFcγRⅢ受体分子。稳定转染细胞系的建立和moFcγRⅢ受体分子基因的表达,为进一步研究moFcγRⅢ的功能提供了基础。 展开更多

关键词 moFcγRⅢ COS-7细胞 玫瑰花环试验 真核表达 共转染

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猪FcγRⅠ真核表达载体的构建及稳定表达细胞系的建立

18

作者 史平玲 邬成业 +5 位作者 乔松林 张改平 王爱萍 肖治军 祁艳华 卜丹 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第7期909-914,共6页

本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA,并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300μg.mL-1)... 本研究旨在建立稳定表达猪FcγRⅠ的Marc-145细胞系。从猪肺泡巨噬细胞中提取总RNA,应用RT-PCR技术获得猪FcγRⅠ和γ链cDNA,并分别构建PIREShyg3-γ和pcDNA3.1-FcγRⅠ真核表达质粒;用脂质体共转染Marc-145细胞,经潮霉素B(300μg.mL-1)和G418(400μg.mL-1)共筛选获得稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系;运用RT-PCR、玫瑰花环和流式细胞术对细胞系进行鉴定。结果表明成功构建了猪FcγRⅠ和γ链真核表达载体,建立了稳定表达猪FcγRⅠ的细胞系,且表达于转染细胞表面的poFcγRⅠ受体分子能与猪IgG特异结合。本研究为进一步研究奠定了基础。 展开更多

关键词 猪FcγRⅠ受体 共转染 MARC-145细胞

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DT40细胞sIgMλ轻链基因的克隆鉴定及原核表达

19

作者 罗俊 樊剑鸣 +5 位作者 滕蔓 王方雨 王丽 叶世同 孙玉梅 张改平 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期472-475,共4页

本研究利用RT-PCR技术,从鸡法氏囊淋巴瘤细胞系DT40中扩增sIgMλ轻链基因并在E.coli中进行了表达。序列分析结果表明,sIgMλ轻链基因全长852nt,含有一个长度为657nt的ORF及长度为195nt的3'-UTR,该基因与鸡Igλ基因的序列同源性为95%... 本研究利用RT-PCR技术,从鸡法氏囊淋巴瘤细胞系DT40中扩增sIgMλ轻链基因并在E.coli中进行了表达。序列分析结果表明,sIgMλ轻链基因全长852nt,含有一个长度为657nt的ORF及长度为195nt的3'-UTR,该基因与鸡Igλ基因的序列同源性为95%,差异位点主要存在于λ轻链的可变区。氨基酸序列预测结果表明,DT40sIgMλ蛋白与鸡Igλ蛋白的序列同源性为92.6%。构建的原核表达载体pET-λ在E.coliBL21(DE3)中成功的获得大量表达。本实验为进一步研究sIgM在IBDV感染法氏囊B淋巴细胞中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 传染性法氏囊病病毒 DT40细胞 sIgM λ轻链基因

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稳定表达靶向BVDV shRNA细胞系的建立及其对BVDV复制的影响

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作者 范璐 王丽 +3 位作者 史西保 樊剑鸣 王爱萍 张改平 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2014年第12期134-139,共6页

为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对BVDV复制的影响,利用脂质体介导法将BVDV shRNA真核表达质粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及对照质粒pSGH1转染MDBK细胞,通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDV shRNA单克隆细胞系subclonepSG... 为研究靶向牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的shRNA对BVDV复制的影响,利用脂质体介导法将BVDV shRNA真核表达质粒pSGH1-sh1083和pSGH1-sh8235及对照质粒pSGH1转染MDBK细胞,通过G418抗性以及有限稀释法筛选获得BVDV shRNA单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235及对照细胞系subclonepshmock。通过观察其细胞病变效应(CPE)、测定TCID50及RT-PCR、流式细胞术检测BVDV shRNA细胞系对BVDV复制的影响。结果表明,与阴性对照组相比,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV 72h后CPE不明显,其TCID50低于阴性对照组;RT-PCR结果显示,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235的细胞在感染BVDV后病毒E2基因的表达减弱;流式细胞术检测不同细胞系接毒24h后的结合率,单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235与病毒结合率分别为11.37%和11.51%,与对照组(20.25%)相比有所降低。综上,稳定转染BVDV shRNA的单克隆细胞系subclonepSGH1-1083和subclonepSGH1-8235对BVDV的复制具有抑制作用。 展开更多

关键词 RNA干扰 牛病毒性腹泻病毒 短发夹RNA 单克隆细胞系 复制

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