Tfh细胞及其相关分子在早发性卵巢功能不全小鼠模型中的变化研究

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作者 麦尔哈巴·艾斯卡尔 朱玥洁 +4 位作者 张曼丽 张于念 王辉 巩晓芸 丁剑冰 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第10期2313-2317,共5页

目的:基于早发性卵巢功能不全(POI)小鼠模型探究滤泡辅助性T细胞(Tfh)及相关分子在POI中的变化特点。方法:选取30只BALB/c小鼠适应性喂养,每日08:00起对小鼠进行阴道脱落细胞学检测,连续10 d光镜下观察,筛选出动情周期规律的健康雌性小... 目的:基于早发性卵巢功能不全(POI)小鼠模型探究滤泡辅助性T细胞(Tfh)及相关分子在POI中的变化特点。方法:选取30只BALB/c小鼠适应性喂养,每日08:00起对小鼠进行阴道脱落细胞学检测,连续10 d光镜下观察,筛选出动情周期规律的健康雌性小鼠20只,按随机数字表法分为造模(POI)组和对照(HC)组,给予不同化学物质干预并在第21天进行处理并组织取材。造模开始至结束每天早上对小鼠进行阴道分泌物的细胞涂片,吉姆萨染色后于光学显微镜下观察。小鼠牺牲后取双侧卵巢组织制作卵巢石蜡切片,并对组织进行HE染色以观察小鼠卵巢病理改变。免疫组化检测卵巢Tfh相关分子CXCR5和BCL-6表达;流式细胞术检测小鼠脾脏中CD4^(+)CXCR5^(+)Tfh细胞和CD4^(+)ICOS^(+)Tfh细胞的频率;ELISA检测小鼠脾脏组织中IL-6和IL-21水平;qRT-PCR检测小鼠CXCR5和BCL-6 mRNA水平;相关性分析探究两组小鼠脾脏中CD4^(+)CXCR5^(+)Tfh和CD4^(+)ICOS^(+)Tfh细胞频率与小鼠脾脏中IL-6和IL-21水平的相关性。结果:POI组小鼠卵巢组织发生病理改变:原始卵泡及生长卵泡减少,闭锁卵泡增多。POI组小鼠卵巢组织中BCL-6和CXCR5高表达。POI小鼠脾脏中CD4^(+)CXCR5^(+)Tfh和CD4^(+)ICOS^(+)Tfh细胞频率高于HC组。POI组小鼠脾脏中IL-6和IL-21水平显著高于HC组,且与小鼠脾脏中CD4^(+)CXCR5^(+)Tfh和CD4^(+)ICOS^(+)Tfh细胞频率呈正相关。结论:在POI小鼠模型中Tfh细胞高表达,Tfh相关分子发生变化,为研究POI的发病机制提供基础参考。 展开更多

关键词 早发性卵巢功能不全 Tfh细胞 动物模型

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HER2靶向TRAC和B2M双基因敲除通用型CAR-T细胞的制备及对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用 被引量：3

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作者 宋源 李秧 +7 位作者 阎博 左百乐 赵丽君 赵晓娟 王鹏举 王依依 杨安钢 王向鹏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期432-438,共7页

目的利用同种异体健康人T细胞,制备靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的通用型嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。方法构建靶向HER2的人源化单链抗体P1h2 CAR慢病毒表达载体,包装慢病毒感染健康人T细胞获得CA... 目的利用同种异体健康人T细胞,制备靶向人表皮生长因子受体2(HER2)的通用型嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞,检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。方法构建靶向HER2的人源化单链抗体P1h2 CAR慢病毒表达载体,包装慢病毒感染健康人T细胞获得CAR-T细胞;利用成簇的规律间隔的短回文重复序列/Cas9核酸酶(CRISPR/Cas9)技术敲除CAR-T的T细胞受体(TCR)和人类白细胞抗原Ⅰ(HLA-Ⅰ),制备靶向HER2的通用型CAR-T细胞,CCK-8试验检测其对HER2阳性肿瘤细胞的杀伤能力。结果制备通用型CAR-T细胞,CAR阳性率为(67.1±1.46)%,TCR和HLA-Ⅰ类分子的敲除率为(86.31±1.78)%。体外杀伤试验显示通用型CAR-T细胞能够有效杀伤HER2阳性肿瘤细胞,其杀伤能力与CAR-T细胞无明显区别。结论成功制备能够靶向杀伤HER2阳性肿瘤细胞的通用型CAR-T细胞,为实现应用通用型同种异体CAR-T细胞治疗HER2阳性肿瘤患者奠定了基础。 展开更多

关键词 同种异体 表皮生长因子受体2 嵌合抗原受体T(CAR-T)细胞 通用型CAR-T细胞

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二甲双胍与三氧化二砷对KG1a细胞增殖的抑制作用 被引量：2

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作者 黄李文惠 刘萌 +4 位作者 桂淑敏 冯明明 刘慧 司晓慧 牛新清 《中国实验血液学杂志》 CSCD 北大核心 2024年第1期66-70,共5页

目的:探讨二甲双胍协同三氧化二砷对急性髓系白血病KG1a细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:采用CCK-8法检测二甲双胍、三氧化二砷以及联合应用对KG1a细胞的杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测应用二甲双胍协同三氧化二砷... 目的:探讨二甲双胍协同三氧化二砷对急性髓系白血病KG1a细胞增殖的影响及其可能的机制。方法:采用CCK-8法检测二甲双胍、三氧化二砷以及联合应用对KG1a细胞的杀伤作用;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测应用二甲双胍协同三氧化二砷对KG1a细胞凋亡的影响;Western blot检测胞内凋亡、自噬相关蛋白的表达。结果:二甲双胍与三氧化二砷联合及单独应用均可抑制KG1a细胞增殖,诱导KG1a细胞凋亡,联合用药组增殖抑制率及凋亡率高于单独用药组(P<0.05)。联合用药诱导KG1a细胞中Caspase 8和P62蛋白表达上调且高于单药组(P<0.05)。结论:二甲双胍能协同三氧化二砷杀伤KG1a细胞,其作用机制可能与诱导凋亡和增强自噬有关。 展开更多

关键词 三氧化二砷 二甲双胍 急性髓系白血病 Caspase 8 P62

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S100A10对巨噬细胞介导的炎症及迁移的影响

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作者 李骄阳 刘晟男 +2 位作者 赵雨欣 高静涛 王辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期2257-2261,共5页

目的:探讨S100A10对巨噬细胞介导的炎症及迁移的影响。方法:建立S100A10-KO的C57BL/6J小鼠模型和S100A10-KO的RAW264.7细胞系。取小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)和骨髓巨噬细胞(BMDMs),复苏RAW264.7细胞系并收集细胞。采用qRT-PCR检测S100A10敲... 目的:探讨S100A10对巨噬细胞介导的炎症及迁移的影响。方法:建立S100A10-KO的C57BL/6J小鼠模型和S100A10-KO的RAW264.7细胞系。取小鼠腹腔巨噬细胞(PMs)和骨髓巨噬细胞(BMDMs),复苏RAW264.7细胞系并收集细胞。采用qRT-PCR检测S100A10敲除对巨噬细胞炎症因子分泌情况的影响;划痕实验和Transwell检测S100A10敲除对巨噬细胞迁移的影响;CCK8试剂盒检测S100A10敲除对RAW264.7细胞增殖的影响;qRT-PCR和Western blot检测基质金属蛋白酶9(MMP9)、非肌性肌球蛋白重链9(MYH9)的表达。结果:S100A10敲除后,RAW264.7、PMs、BMDMs分泌的炎症因子IL-6、IL-1β、MCP-1水平降低(P<0.05);细胞划痕和Transwell表明S100A10敲除抑制巨噬细胞的迁移;CCK8实验表明S100A10敲除后巨噬细胞的增殖能力减弱;qRT-PCR和Western blot实验表明迁移相关蛋白MMP9、MYH9在S100A10敲除后降低。结论:S100A10敲除后巨噬细胞分泌的炎症因子减少且巨噬细胞迁移和增殖的能力减弱。 展开更多

关键词 巨噬细胞 S100A10 炎症因子 迁移

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子宫颈鳞状细胞癌中DIAPH3表达对细胞迁移和侵袭的作用及分子机制

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作者 贺国洋 陈庆庆 +8 位作者 葛虹 常海敏 张静雨 孙媛 邓美静 王文鑫 孙瑞利 千新来 李巍 《临床与实验病理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第5期537-543,共7页

目的探讨Diaphanous相关成蛋白3(diaphanous-related formin 3,DIAPH3)对子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法收集30例CSCC石蜡包埋组织及配对癌旁组织,应用生物信息学与... 目的探讨Diaphanous相关成蛋白3(diaphanous-related formin 3,DIAPH3)对子宫颈鳞状细胞癌(cervical squamous cell carcinoma,CSCC)细胞迁移和侵袭的作用及其分子机制。方法收集30例CSCC石蜡包埋组织及配对癌旁组织,应用生物信息学与免疫组化分析CSCC组织中DIAPH3的表达,并进行临床病理相关性分析。采用分子生物学与肿瘤迁移相关实验分析DIAPH3对CSCC细胞迁移和侵袭的作用及机制。结果仙桃学术数据库分析显示:DIAPH3 mRNA在CSCC组织(2.37)中表达比癌旁组织(0.25)明显升高(P<0.05);DIAPH3高表达患者的无复发生存率明显降低(P=0.031)。免疫表型:CSCC组织中DIAPH3的阳性率为70.00%(21/30),高于癌旁组织(30%,9/30);DIAPH3的阳性率在不同肿瘤分化程度(P=0.032)和有无淋巴结转移(P=0.018)组间差异有统计学意义。siRNA干扰DIAPH3组:CSCC细胞的迁移率(28.33%,P=0.002)、穿过小室的细胞数(207.67,P=0.001)及p-ERK(P=0.001)、MMP-2(P=0.003)、MMP-9(P=0.002)蛋白表达量均明显降低。过表达DIAPH3组:CSCC细胞的迁移率(79.00%,P=0.0004)和穿过小室的细胞数(224.33,P=0.0003)及p-ERK(P=0.001)、MMP-2(P=0.001)、MMP-9(P=0.002)蛋白表达量均明显升高。DIAPH3+U0126组:CSCC细胞的迁移率(46.00%,P=0.0001)和穿过小室的细胞数(106.33,P=0.0003)及p-ERK(P=0.001)、MMP-2(P=0.002)、MMP-9(P=0.004)蛋白表达量均明显降低。结论DIAPH3在CSCC组织中高表达,与肿瘤分化程度和淋巴结转移密切相关,且通过ERK1/2通路促进CSCC细胞的迁移和侵袭。 展开更多

关键词 子宫颈肿瘤 鳞状细胞癌 DIAPH3 迁移 侵袭 免疫组织化学

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Ku70对HTLV-1阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响

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作者 宋迪 马玲玲 +5 位作者 郭志祥 刘月 崔钰晗 关宇鹤 杨波 王洁 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2261-2266,共6页

目的:探讨Ku70对人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响。方法:Western blot实验检测不同的HTLV-1阳性T细胞系中Ku70的表达水平;构建Ku70基因沉默siRNA并通过Western blot实验检测其敲减Ku70表达的效率;采用si... 目的:探讨Ku70对人嗜T淋巴细胞病毒1(HTLV-1)阳性T细胞中HTLV-1病毒蛋白表达的影响。方法:Western blot实验检测不同的HTLV-1阳性T细胞系中Ku70的表达水平;构建Ku70基因沉默siRNA并通过Western blot实验检测其敲减Ku70表达的效率;采用siRNA在HTLV-1阳性的T细胞中敲减Ku70表达后,通过real-time PCR和Western blot实验分别检测HTLV-1病毒蛋白在mRNA和蛋白水平上的表达量,并通过real-time PCR实验检测干扰素和促炎因子的表达量。结果:HTLV-1阳性T细胞系MT2、MT4及C8166中的Ku70均呈高表达;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中的HTLV-1病毒蛋白表达量上升;采用siRNA敲减Ku70的表达后,MT2细胞及MT4细胞中干扰素α、干扰素γ及肿瘤坏死因子α的表达下降。结论:Ku70在HTLV-1阳性T细胞中高表达;在HTLV-1阳性T细胞中,Ku70促进干扰素和促炎因子的表达,抑制HTLV-1病毒蛋白的表达。 展开更多

关键词 Ku70蛋白 人嗜T淋巴细胞病毒1 干扰素 肿瘤坏死因子Α

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猪繁殖与呼吸综合征病毒细胞受体功能研究进展 被引量：5

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作者 王向鹏 陈璐 张赟 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期655-659,共5页

猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以妊娠母猪繁殖障碍和各年龄段猪呼吸道症状为主要特征的传染病，该病严重危害世界养猪业。PRRSV属套式病毒目... 猪繁殖与呼吸综合征（Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的以妊娠母猪繁殖障碍和各年龄段猪呼吸道症状为主要特征的传染病，该病严重危害世界养猪业。PRRSV属套式病毒目，动脉炎病毒科，动脉炎病毒属，为单股、正链、不分节段的RNA病毒。病毒基因组长度约15kb，有9个相互重叠的开放阅读框（ORF）。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 体功能 细胞 母猪繁殖障碍 呼吸道症状 PRRSV RNA病毒 病毒基因组

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CD200与CD4+CD25+CD127lowTreg在强直性脊柱炎中的意义 被引量：10

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作者 宋琛 孙亚洲 +4 位作者 李强 宋旭恒 冯龙 王志银 张晨光 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期215-221,共7页

目的:研究强直性脊柱炎(AS)患者外周血淋巴细胞中CD200的表达水平,分析CD200及Treg与IL-6、SAA的相关性,探讨CD200与AS免疫功能的关系以及诊断效能,为辅助AS的诊断、免疫评估提供帮助。方法:从74例AS患者和50例健康志愿者中收集外周血... 目的:研究强直性脊柱炎(AS)患者外周血淋巴细胞中CD200的表达水平,分析CD200及Treg与IL-6、SAA的相关性,探讨CD200与AS免疫功能的关系以及诊断效能,为辅助AS的诊断、免疫评估提供帮助。方法:从74例AS患者和50例健康志愿者中收集外周血。流式细胞术检测淋巴细胞亚群、Treg的百分率及CD200的表达率,并用ELISA法检测血清中CD200的浓度,上转发光法测定IL-6的浓度,胶乳免疫比浊法测定SAA的浓度。结果:与对照组相比,AS活动组CD4^+T细胞、CD19^+B细胞的百分率均增高(P<0.05),CD8^+T细胞、Treg的百分率均减低(P<0.05),CD3^+T细胞的百分率无明显差异;稳定组CD4^+T细胞、CD8^+T细胞、CD19^+B细胞、Treg的百分率与对照组均无显著差异。与对照组比较,活动组(CD3^+、CD4^+、CD8^+)T细胞中CD200的表达率和血清中CD200的浓度以及稳定组(CD3^+、CD4^+)T细胞中CD200的表达率和血清中CD200的浓度均减低(P<0.05);而稳定组CD8^+T细胞、CD19^+B细胞中CD200的表达率及活动组CD19^+B细胞中CD200的表达率无显著差异。与对照组比较,活动组血清中IL-6、SAA的浓度明显升高(P<0.05);而稳定组IL-6的浓度轻度升高(P<0.05),SAA的浓度无差异。活动组CD3^+T淋巴细胞中CD200的表达率与Treg呈正相关,与IL-6呈负相关,但与SAA不相关;Treg的百分率与IL-6负相关,与SAA不相关。CD200对AS的诊断优于Treg、SAA,而与IL-6的诊断效能相当。结论:AS活动期患者存在淋巴细胞亚群紊乱,CD200和Treg的表达率降低,两者可能参与了AS的发病,为辅助AS的诊断和免疫功能的判断提供理论依据。 展开更多

关键词 强直性脊柱炎 CD200 TREG细胞

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ILC2在炎症性疾病中作用的研究进展 被引量：6

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作者 毋梦林 牛志国 +1 位作者 曹旗(指导) 黄青松(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第21期2672-2676,2680,共6页

2型固有淋巴细胞(ILC2)是最近发现的新型固有淋巴细胞群体,主要存在于肺、肠道、皮肤及黏膜组织,在IL-25和IL-33等刺激下能够产生IL-4、IL-5、IL-9和IL-13等Th2型细胞因子,在自身免疫病、抗感染和体内免疫平衡中发挥重要作用。本文综述... 2型固有淋巴细胞(ILC2)是最近发现的新型固有淋巴细胞群体,主要存在于肺、肠道、皮肤及黏膜组织,在IL-25和IL-33等刺激下能够产生IL-4、IL-5、IL-9和IL-13等Th2型细胞因子,在自身免疫病、抗感染和体内免疫平衡中发挥重要作用。本文综述了ILC2在炎症性疾病发展过程中的免疫学特性及其发挥的作用,及脏器局部微环境改变对ILC2的影响,为进一步了解ILC2参与的炎症性疾病发病机制及相关治疗提供理论依据。 展开更多

关键词 2型固有淋巴细胞 炎症 TH2型细胞因子

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蓝萼甲素通过cyclinB1/CDK1途径诱导DU145细胞G2/M期阻滞 被引量：4

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作者 朱琳琳 徐祉轩 张明明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第18期2235-2239,共5页

目的:研究蓝萼甲素(GLA)调节DU145细胞周期信号通路的表达,探讨GLA阻滞DU145细胞周期的作用机制。方法:不同浓度(1、2.5、5μg/ml)GLA分别刺激培养DU145细胞24 h,CCK8检测细胞增殖;流式检测细胞周期与凋亡;qRT-PCR与Western blot分别检... 目的:研究蓝萼甲素(GLA)调节DU145细胞周期信号通路的表达,探讨GLA阻滞DU145细胞周期的作用机制。方法:不同浓度(1、2.5、5μg/ml)GLA分别刺激培养DU145细胞24 h,CCK8检测细胞增殖;流式检测细胞周期与凋亡;qRT-PCR与Western blot分别检测细胞周期蛋白p21、cyclinB1、CDK1 mRNA与蛋白水平的表达;免疫荧光检测cyclinB1、CDK1在细胞中的定位表达。结果:5μg/ml GLA刺激培养DU145细胞24 h,细胞中p21表达升高,cyclinB1、CDK1表达降低,细胞周期显著阻滞于G2/M期,且细胞凋亡增加。结论:GLA能够通过cyclinB1/CDK1途径诱导DU145细胞周期阻滞于G2/M期,且作用效果与剂量密切相关。 展开更多

关键词 蓝萼甲素 细胞周期蛋白B1 细胞周期蛋白依赖性激酶1

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蓝萼甲素通过HMGB1信号通路调节滋养细胞炎症反应 被引量：4

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作者 朱琳琳 贺晓丹 徐祉轩 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期404-408,共5页

目的:研究蓝萼甲素(GLA)对JAR细胞HMGB1炎症信号通路的调节作用,探讨GLA与HMGB1相互作用的机制。方法:不同浓度GLA(0. 01、0. 1、1、10μg/ml)刺激培养JAR细胞48 h后,qRT-PCR与Western blot分别检测HMGB1RNA与蛋白水平的表达;荧光素酶... 目的:研究蓝萼甲素(GLA)对JAR细胞HMGB1炎症信号通路的调节作用,探讨GLA与HMGB1相互作用的机制。方法:不同浓度GLA(0. 01、0. 1、1、10μg/ml)刺激培养JAR细胞48 h后,qRT-PCR与Western blot分别检测HMGB1RNA与蛋白水平的表达;荧光素酶报告基因检测NF-κB表达活性;激光共聚焦检测HMGB1在细胞中的分布情况; ELISA检测培养液HMGB1的含量。结果:0. 1μg/ml GLA刺激培养JAR细胞,HMGB1表达与NF-κB活性升高最显著,随着GLA浓度的增加,两者表达水平反而下降; GLA刺激培养JAR细胞可引起HMGB1从胞核转移入胞浆,进而分泌到胞外。结论:GLA通过HMGB1信号通路调节JAR细胞炎症反应,且作用效果与剂量密切相关。 展开更多

关键词 蓝萼甲素 高迁移率簇蛋白B1 滋养细胞

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T淋巴细胞对高脂饮食引起的肠道炎症的影响

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作者 余璐 刘世博 +1 位作者 董莉君 王辉 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期534-538,共5页

目的:探讨T淋巴细胞在高脂饮食导致的肠道炎症中所起的作用。方法:采用了T淋巴细胞缺失(CD3ε敲除)的小鼠模型,C57BL/6J野生型小鼠作对照,高脂喂养16周。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠组织中的炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染... 目的:探讨T淋巴细胞在高脂饮食导致的肠道炎症中所起的作用。方法:采用了T淋巴细胞缺失(CD3ε敲除)的小鼠模型,C57BL/6J野生型小鼠作对照,高脂喂养16周。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测结肠组织中的炎性因子水平,苏木精-伊红(HE)染色直接观察肠道形态,检测肠道肌层厚度,同时通过免疫组织化学技术(IHC)观察肠道组织中免疫细胞的浸润情况。结果:高脂饮食饲喂小鼠16周后,小鼠体重明显增加。qRT-PCR检测显示,与正常饮食的野生型小鼠组相比,高脂饮食的野生型小鼠结肠组织中IL-1β(P<0. 01)、IL-5(P<0. 05)、TNF-α(P<0. 05)、IFN-γ(P<0. 05)以及IL-6(P<0. 05)表达水平明显上调; HE染色显示高脂饮食组结肠肌层明显变薄,同时免疫组化的结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润增强。以高脂饮食野生型小鼠为对照,高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠的结肠组织中IL-1β(P<0. 01)、IL-6(P<0. 05)、IFN-γ(P<0. 05)、IL-5(P<0. 05)以及TNF-α(P<0. 01)基因水平下调; HE染色显示高脂饮食的T淋巴细胞缺失小鼠结肠肌层增厚,同时免疫组化结果显示结肠组织中巨噬细胞浸润减少。结论:T淋巴细胞对高脂饮食导致的肠道炎症有促进作用。 展开更多

关键词 高脂饮食 肥胖 肠道 炎症 CD3ε T淋巴细胞

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TNFAIP8在小鼠肠道组织及肠道炎症中的表达及意义

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作者 韩美娟 牛凯 +1 位作者 娄运伟 王辉(指导) 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第4期385-389,共5页

目的:探讨TNFAIP8(TIPE)在小鼠正常肠道组织和结肠炎症组织中的表达及意义。方法:选择8~10周龄的C57BL/6野生型(WT)雄性小鼠3只并取其结肠组织,进行研磨破碎后用TRIzol试剂提取结肠总RNA,聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量聚合酶链反应(q... 目的:探讨TNFAIP8(TIPE)在小鼠正常肠道组织和结肠炎症组织中的表达及意义。方法:选择8~10周龄的C57BL/6野生型(WT)雄性小鼠3只并取其结肠组织,进行研磨破碎后用TRIzol试剂提取结肠总RNA,聚合酶链反应(PCR)和实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)检测结肠中TIPE家族成员mRNA表达情况。选择8~10周龄的WT雄性小鼠5只,分离其十二指肠、空肠、回肠和结肠的上皮细胞后,提取细胞总蛋白和总RNA,Western blot和qPCR检测十二指肠、空肠、回肠和结肠上皮细胞中TIPE蛋白及mRNA的表达。选择8~10周龄的WT雄性小鼠18只,分成6组,每组3只,用含3.0%DSS的饮用水饲养小鼠,在不同的时间点处理小鼠并提取其结肠上皮细胞,qPCR检测DSS诱导肠炎后结肠上皮细胞中TIPE的表达变化。选择8~10周龄的WT雄性小鼠9只,分成3组,每组3只,为了检测感染效率,将小鼠进食8 h后,然后用2×109 CFU的Citrobacter rodentium给小鼠灌胃,在不同的时间点处理小鼠并提取其结肠上皮细胞,qPCR检测Citrobacter rodentium诱导肠炎后结肠上皮细胞中TIPE的表达变化。结果:在WT小鼠结肠组织中,TIPE家族成员都有相应的表达,但TIPE在结肠组织中的表达最高。和十二指肠、空肠和回肠相比,TIPE在结肠上皮细胞中的表达最高。DSS诱导肠炎后,TIPE在结肠上皮细胞中的表达上调(P<0.05)。Citrobacter rodentium诱导肠炎后,TIPE在结肠上皮细胞中的表达上调(P<0.05)。结论:与其他TIPE家族成员相比,TIPE在小鼠结肠组织中和结肠上皮细胞中高表达。DSS及Citrobacter rodentium诱导肠炎后,TIPE在结肠上皮细胞中表达上调。TIPE在肠道组织中特殊的表达方式提示TIPE可能在肠道免疫稳态和肠道炎症过程中发挥一定的作用。 展开更多

关键词 肠道组织 TIPE 肠炎 肠道上皮细胞

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一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法

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作者 郭果 李赛超 +3 位作者 王丽 刘璐 卢燎勋 黄蓉 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2018年第8期101-107,共7页

目的建立一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法。方法构建针对小鼠Vav1基因的特异性打靶载体,利用脂质体转染法转染B16小鼠黑色素瘤细胞,使用流式细胞仪对GFP阳性单细胞进行分选,对得到的GFP阳性单克隆细胞使用直接裂解法获取基因... 目的建立一种快速获得Vav1基因敲除稳定细胞系的方法。方法构建针对小鼠Vav1基因的特异性打靶载体,利用脂质体转染法转染B16小鼠黑色素瘤细胞,使用流式细胞仪对GFP阳性单细胞进行分选,对得到的GFP阳性单克隆细胞使用直接裂解法获取基因组DNA,将其用于荧光PCR,产物通过毛细管电泳和分析后即可快速获知其基因型。结果使用以上方法在短时间内得到了大量GFP阳性单克隆细胞,从中随机挑选16个,通过荧光PCR检测其基因型,结果表明敲除效率为87.5%;通过测序对部分荧光PCR结果进行验证,发现其基因型结果完全正确。结论将CRISPR/Cas9基因编辑系统、流式细胞仪单克隆分选、荧光PCR和大批量DNA样本处理技术结合,可以短时间内在B16小鼠黑色素瘤细胞中获得大量Vav1基因敲除稳定单克隆细胞。 展开更多

关键词 CRISPR/Cas9 基因敲除 Vav1基因 流式细胞仪分选 荧光PCR

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ATPIF1通过调节糖酵解能力影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性研究

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作者 刘彪 龚雪 +2 位作者 胡璧梁 郭春磊 钟根深 《细胞与分子免疫学杂志》 2025年第10期865-874,共10页

目的探究ATP合酶抑制因子1(ATPIF1)对于嵌合抗原受体(CAR)-NK92细胞抗肿瘤活性的影响。方法构建靶向HER2的ATPIF1过表达和敲低的CAR-NK92细胞;流式细胞术检查CAR阳性表达率;CCK-8法检测细胞增殖能力;Seahorse分析细胞糖酵解能力;线粒体... 目的探究ATP合酶抑制因子1(ATPIF1)对于嵌合抗原受体(CAR)-NK92细胞抗肿瘤活性的影响。方法构建靶向HER2的ATPIF1过表达和敲低的CAR-NK92细胞;流式细胞术检查CAR阳性表达率;CCK-8法检测细胞增殖能力;Seahorse分析细胞糖酵解能力;线粒体膜电位探针(JC-1)法检测细胞线粒体膜电位水平;萤火虫荧光素酶报告基因检测法检测靶细胞裂解率;流式细胞术检测细胞CD107a、自然杀伤细胞组2成员D(NKG2D)、颗粒酶B(GzmB)、穿孔素(perforin)、白细胞介素2(IL-2)表达水平;实时荧光定量PCR检测细胞干扰素诱导蛋白与四肽重复1(IFIT1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、ATPIF1、己糖激酶1(HK1)表达;2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)抑制糖酵解,检测对CAR-NK92细胞抗肿瘤能力影响。结果成功制备靶向HER2的对照组CAR-NK92细胞以及ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞;ATPIF1过表达的CAR-NK92细胞靶细胞裂解率、NKG2D和CD107a的表达水平、GzmB和IL-2分泌能力、IFIT1和TNF-α的mRNA表达水平显著上调,ATPIF1敲低表达后结果相反。ATPIF1过表达引起CAR-NK92细胞代谢重编程,线粒体膜电位(Δψm)显著降低,HK1的mRNA表达水平显著上调,基础糖酵解和糖酵解能力增强。2-DG(5μmol/L)抑制糖酵解后,ATPIF1过表达和敲低表达的CAR-NK92细胞与对照组相比,NKG2D和CD107a表达水平无显著差异。结论ATPIF1通过调节糖酵解代谢能力来影响CAR-NK92细胞抗肿瘤活性,通过过表达ATPIF1可以增强CAR-NK92细胞的抗肿瘤活性。 展开更多

关键词 CAR-NK NK92 ATPIF1 糖酵解 肿瘤

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