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重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性检测
1
作者
李斌
许晓亚
+3 位作者
杨刚刚
崔晴晴
杨亚娟
徐存拴
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期244-250,共7页
在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α(rh IL-1α),优化rh IL-1α的发酵工艺及纯化方法,以获得高表达、高纯度具有生物学活性的rh IL-1α。通过PCR扩增获得h IL-1α基因,构建其真核表达载体p PICZαA/h IL-1α,电转化至毕赤酵母X-...
在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α(rh IL-1α),优化rh IL-1α的发酵工艺及纯化方法,以获得高表达、高纯度具有生物学活性的rh IL-1α。通过PCR扩增获得h IL-1α基因,构建其真核表达载体p PICZαA/h IL-1α,电转化至毕赤酵母X-33,用PCR和SDS-PAGE方法筛选高效表达rh IL-1α的工程菌株并进行Western blot鉴定,DEAE弱阴离子离子交换层析一步纯化表达产物,并用MTT法初步检测其对人肝癌细胞7402的生物学作用。rh IL-1α在摇瓶规模下,经甲醇诱导4 d后表达量约为30 mg/L。Western blot检测rh IL-1α的特异性结合,获得纯度约95%,收率40%左右的rh IL-1α,并证明rh IL-1α能够抑制人肝癌细胞7402的增殖。构建了重组h IL-1α的基因工程菌,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为进一步研究其生物学活性和功能奠定了基础。
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关键词
重组人白细胞介素-1α
毕赤酵母
表达
纯化
人肝癌细胞
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职称材料
豹蛙抗瘤酶与人血清白蛋白融合蛋白的毕赤酵母高效表达与活性测定
被引量：
4
2
作者
杨刚刚
马诚凯
+9 位作者
史世会
张全义
王泽
吕中原
王绪洋
许晓亚
崔晴晴
张继红
丁一
徐存拴
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期222-229,共8页
豹蛙抗瘤酶(Onconase,ONC),又称豹蛙酶,对多种肿瘤细胞和实体瘤具有显著杀伤作用,为得到高表达的ONC,利用HSA在毕赤酵母系统中的表达优势,将HSA和ONC融合进行毕赤酵母表达并分离纯化。设计融合基因HSA-(Gly4Ser1)3-ONC,简称HSA-ONC,构建...
豹蛙抗瘤酶(Onconase,ONC),又称豹蛙酶,对多种肿瘤细胞和实体瘤具有显著杀伤作用,为得到高表达的ONC,利用HSA在毕赤酵母系统中的表达优势,将HSA和ONC融合进行毕赤酵母表达并分离纯化。设计融合基因HSA-(Gly4Ser1)3-ONC,简称HSA-ONC,构建至3种表达载体p PIC9、p PIC9K、p PICZα-A并分别转染X-33、GS115和SMD1168 3种宿主菌,在摇瓶和10L规模优化表达条件和双水相偶联柱层析分离纯化目的蛋白并测定其生物学活性。结果显示,在1 L摇瓶规模下,p PICZα-A/X-33/HSA-ONC组合的表达量优于其他组合,且在p H7,温度23℃条件下诱导10 d,表达量达到最高(235 mg/L)。在10 L规模进行不同培养基条件的发酵,r HSA-ONC于p H 7的低盐基础盐培养基(Low salt basic salt mediu m,LS-BSM),甲醇浓度0.25%条件下诱导10 d,表达量达到最高(2.02 g/L)。经双水相萃取偶联DEAE离子交换层析可得到纯度≥95%、收率高于70%的r HSA-ONC。生物活性检测发现,r HSA-ONC在体外能抑制多种癌细胞增殖。r HSA-ONC的表达量较r ONC提高1倍(同等摩尔量情况下),同时在体外抑制多种癌细胞增殖。
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关键词
豹蛙抗瘤酶
人血清蛋白
毕赤酵母高效表达
双水相萃取
癌细胞活性
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职称材料
题名
重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性检测
1
作者
李斌
许晓亚
杨刚刚
崔晴晴
杨亚娟
徐存拴
机构
河南
师范大学生命科学学院
河南省一科技部共建细胞分化国家重点实验室培育基地和河南省生物工程重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期244-250,共7页
基金
国家"973"前期研究专项(2012CB722304)
河南省自然科学基金项目(142300413212
+1 种基金
132300413208)
河南省重大科技攻关项目(111100910600)
文摘
在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α(rh IL-1α),优化rh IL-1α的发酵工艺及纯化方法,以获得高表达、高纯度具有生物学活性的rh IL-1α。通过PCR扩增获得h IL-1α基因,构建其真核表达载体p PICZαA/h IL-1α,电转化至毕赤酵母X-33,用PCR和SDS-PAGE方法筛选高效表达rh IL-1α的工程菌株并进行Western blot鉴定,DEAE弱阴离子离子交换层析一步纯化表达产物,并用MTT法初步检测其对人肝癌细胞7402的生物学作用。rh IL-1α在摇瓶规模下,经甲醇诱导4 d后表达量约为30 mg/L。Western blot检测rh IL-1α的特异性结合,获得纯度约95%,收率40%左右的rh IL-1α,并证明rh IL-1α能够抑制人肝癌细胞7402的增殖。构建了重组h IL-1α的基因工程菌,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为进一步研究其生物学活性和功能奠定了基础。
关键词
重组人白细胞介素-1α
毕赤酵母
表达
纯化
人肝癌细胞
Keywords
recombinant human interleukin-1α
Pichia pastoris
expression
purification
Bel-7402 cell
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
豹蛙抗瘤酶与人血清白蛋白融合蛋白的毕赤酵母高效表达与活性测定
被引量：
4
2
作者
杨刚刚
马诚凯
史世会
张全义
王泽
吕中原
王绪洋
许晓亚
崔晴晴
张继红
丁一
徐存拴
机构
河南
师范大学生命科学学院
河南省一科技部共建细胞分化国家重点实验室培育基地和河南省生物工程重点实验室
河南
新乡华星药厂
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第10期222-229,共8页
基金
国家"973"前期研究专项(2012CB722304)
河南省自然科学基金项目(142300413212
+1 种基金
132300413208)
河南省重大科技攻关项目(111100910600)
文摘
豹蛙抗瘤酶(Onconase,ONC),又称豹蛙酶,对多种肿瘤细胞和实体瘤具有显著杀伤作用,为得到高表达的ONC,利用HSA在毕赤酵母系统中的表达优势,将HSA和ONC融合进行毕赤酵母表达并分离纯化。设计融合基因HSA-(Gly4Ser1)3-ONC,简称HSA-ONC,构建至3种表达载体p PIC9、p PIC9K、p PICZα-A并分别转染X-33、GS115和SMD1168 3种宿主菌,在摇瓶和10L规模优化表达条件和双水相偶联柱层析分离纯化目的蛋白并测定其生物学活性。结果显示,在1 L摇瓶规模下,p PICZα-A/X-33/HSA-ONC组合的表达量优于其他组合,且在p H7,温度23℃条件下诱导10 d,表达量达到最高(235 mg/L)。在10 L规模进行不同培养基条件的发酵,r HSA-ONC于p H 7的低盐基础盐培养基(Low salt basic salt mediu m,LS-BSM),甲醇浓度0.25%条件下诱导10 d,表达量达到最高(2.02 g/L)。经双水相萃取偶联DEAE离子交换层析可得到纯度≥95%、收率高于70%的r HSA-ONC。生物活性检测发现,r HSA-ONC在体外能抑制多种癌细胞增殖。r HSA-ONC的表达量较r ONC提高1倍(同等摩尔量情况下),同时在体外抑制多种癌细胞增殖。
关键词
豹蛙抗瘤酶
人血清蛋白
毕赤酵母高效表达
双水相萃取
癌细胞活性
Keywords
onconase
human serum albumin
Pichia pastoris efficient expression
aqueous two-phase extraction
activity of tumor cells
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性检测
李斌
许晓亚
杨刚刚
崔晴晴
杨亚娟
徐存拴
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
0
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职称材料
2
豹蛙抗瘤酶与人血清白蛋白融合蛋白的毕赤酵母高效表达与活性测定
杨刚刚
马诚凯
史世会
张全义
王泽
吕中原
王绪洋
许晓亚
崔晴晴
张继红
丁一
徐存拴
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
4
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