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肉制品中鸡源性成分重组酶介导等温扩增检测方法的建立及应用 被引量:15
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作者 苗丽 张秀平 +4 位作者 王建昌 王永亮 程奇 徐超 张璐 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第4期954-959,共6页
为了快速准确检测出肉制品中的鸡源性成分,本研究基于鸡线粒体细胞色素B基因(CytB),设计特异性引物和exo探针,建立了实时荧光重组酶介导等温扩增(RAA)方法,进行特异性、灵敏性和稳定性分析,并通过检测市售肉制品对所建立RAA方法的准确... 为了快速准确检测出肉制品中的鸡源性成分,本研究基于鸡线粒体细胞色素B基因(CytB),设计特异性引物和exo探针,建立了实时荧光重组酶介导等温扩增(RAA)方法,进行特异性、灵敏性和稳定性分析,并通过检测市售肉制品对所建立RAA方法的准确性和适用性进行分析。结果表明,该方法可以快速实现对高山鸡肉、乌鸡肉、芦花鸡肉、白羽鸡肉和野鸡肉基因组DNA的特异性扩增,而对猪肉、牛肉、羊肉等的DNA均没有扩增,可稳定检出的鸡源性成分最低质量分数为0.1%。在9份标识有鸡肉成分的市售样品中,7份检出鸡源性成分,有2份样品的鸡源性成分检测结果为阴性。本研究建立的实时荧光RAA方法操作简单,反应迅速,特异性强,灵敏度高,为肉制品中鸡源性成分的检测提供了技术保障。 展开更多
关键词 重组酶介导等温扩增 细胞色素B基因 鸡源性成分
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微滴数字PCR法对肉制品中牛源和猪源成分的定量分析 被引量:52
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作者 苗丽 张秀平 +3 位作者 陈静 李轲 王永杰 白杰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第8期187-191,共5页
为准确检测肉及肉制品中肉源成分的含量,实验基于微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)技术,建立了定量检测肉及肉制品中牛肉和猪肉含量的方法。由dd PCR结果可知,在一定范围内生鲜肉质量与DNA含... 为准确检测肉及肉制品中肉源成分的含量,实验基于微滴数字聚合酶链式反应(droplet digital polymerase chain reaction,dd PCR)技术,建立了定量检测肉及肉制品中牛肉和猪肉含量的方法。由dd PCR结果可知,在一定范围内生鲜肉质量与DNA含量、DNA含量与DNA拷贝数之间均呈现明显的线性关系,并以DNA含量为中间值计算出DNA拷贝数(C)与生鲜肉质量之间的换算公式M_(牛)=0.062C-0.943,M_(猪)=0.045C-1.72。应用建立的数字dd PCR方法对已知目标肉种含量的混合肉样进行检测,结果表明测量值和真实值基本一致,且不受外源物种的干扰。通过对市售样品的检测,能够准确检测出不同样品中牛肉和猪肉的含量,并发现存在掺假现象,说明该检测方法具有良好的市场应用前景。本实验建立的dd PCR方法在肉及肉制品中牛肉和猪肉含量的定量检测方面具有较大的应用潜力,可为肉制品真伪鉴别日常检测提供有力的科学依据。 展开更多
关键词 微滴数字PCR 肉制品 DNA拷贝数 掺杂使假
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肉制品中羊源性成分微滴数字PCR法定量检测方法的研究 被引量:31
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作者 苗丽 张秀平 +3 位作者 陈静 李轲 王永杰 白杰 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期73-76,共4页
为准确定量肉及肉制品中羊源性成分的含量,建立了微滴数字PCR定量检测系统。结果显示在一定范围内羊肉质量与DNA含量、DNA含量与DNA拷贝数之间均呈现明显的线性关系,选择DNA含量作为中间换算值,计算出羊肉的质量与拷贝数之间的关系为M_... 为准确定量肉及肉制品中羊源性成分的含量,建立了微滴数字PCR定量检测系统。结果显示在一定范围内羊肉质量与DNA含量、DNA含量与DNA拷贝数之间均呈现明显的线性关系,选择DNA含量作为中间换算值,计算出羊肉的质量与拷贝数之间的关系为M_羊=0.03C+0.69。应用建立的微滴数字PCR定量检测方法对已知质量分数的羊肉模拟混合样品进行检测,发现无论在两两混合还是多肉样混合的情况下,其含量偏差最大为1.52%,具有较强的抗干扰能力。通过对市售样品的检测,显示该方法能够准确检测出不同样品中羊肉的含量,并发现可能存在掺假现象,说明该检测方法具有良好的市场应用前景。本实验建立的微滴数字PCR定量方法在肉及肉制品中羊源性成分检测方面具有较大的应用潜力,为肉制品日常检测及是否掺假提供有力的科学依据。 展开更多
关键词 微滴数字PCR 定量 羊源成分 掺杂
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实时荧光PCR定量测定肉制品中羊源性成分 被引量:4
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作者 张秀平 苗丽 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第7期119-123,130,共6页
为准确定量肉制品中羊源性成分的含量,以羊单拷贝基因为扩增靶基因,设计合成羊源的引物、探针,制备羊源和脊椎动物通用基因的重组质粒以构建标准曲线,通过方程算出各自的拷贝数,根据拷贝数的比值计算样品中羊肉源成分占总肉成分的百分... 为准确定量肉制品中羊源性成分的含量,以羊单拷贝基因为扩增靶基因,设计合成羊源的引物、探针,制备羊源和脊椎动物通用基因的重组质粒以构建标准曲线,通过方程算出各自的拷贝数,根据拷贝数的比值计算样品中羊肉源成分占总肉成分的百分比含量,建立荧光定量PCR检测体系,并对已知目标肉含量的混合肉样进行定量检测。结果显示,该方法具有良好的特异性和灵敏度,最低检测到羊的DNA含量为0.02 ng/μL。对已知目标肉含量的混合肉样进行定量检测发现,羊肉掺入量为90%、50%时所得结果相对准确,相对标准偏差分别为5.69%和10.82%,且不受外源物种的干扰。本试验建立的定量PCR方法能够准确检测出不同样品中羊肉的含量,并发现存在掺假现象。 展开更多
关键词 实时荧光PCR 羊源性成分 肉制品 掺假
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肉制品中牛源性成分荧光定量聚合酶链式反应方法的建立与应用 被引量:8
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作者 苗丽 李志娟 +2 位作者 王珊 张秀平 陈静 《肉类研究》 北大核心 2015年第9期30-33,共4页
为了能够快速准确检测出市场中掺假牛肉制品,采用Taq Man探针法,建立一种用于快速有效检测牛肉制品中牛源性成分的荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。选择Gen Bank中牛β-actin基因的保守序列,设计并合成特... 为了能够快速准确检测出市场中掺假牛肉制品,采用Taq Man探针法,建立一种用于快速有效检测牛肉制品中牛源性成分的荧光定量聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)方法。选择Gen Bank中牛β-actin基因的保守序列,设计并合成特异性引物及Taq Man探针,以构建的p MD-18T-96-beef质粒为标准品,优化反应条件。结果表明:重组质粒标准品经PCR、测序和酶切鉴定正确,建立的标准曲线Ct值与模板拷贝数对数值之间呈良好的线性关系,相关系数为0.98,斜率为-3.345,敏感度为46.1 copies/μL。特异性实验表明,用该方法检测猪肉、羊肉、鸡肉、鸭肉、鹅肉等非牛肉制品结果均为阴性。批内重复实验变异系数均小于0.98%,批间重复实验变异系数均小于0.33%,表明该方法重复性良好。用建立的荧光定量PCR方法与SN/T 2051—2008《食品、化妆品和饲料中牛羊猪源性成分检测方法实时PCR法》同时对市场上40份牛肉加工品进行检测,结果显示,本方法检测有3份样品为牛源成分阴性,与SN/T 2051—2008方法检测结果相同。可见,本实验建立的荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速的特点,适用于检测市场中肉类掺假的行为。 展开更多
关键词 肉制品 牛源性成分 荧光定量PCR 肉类掺假
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HPLC法测定粮谷中赭曲霉毒素A含量结果的不确定度评定 被引量:7
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作者 李万鹏 弓丽华 付爽 《郑州轻工业学院学报(自然科学版)》 CAS 2015年第3期20-25,共6页
通过建立HPLC法测定粮谷中赭曲霉毒素A(OTA)含量的不确定度评定方法,计算测定过程中各分量的标准不确定度和扩展不确定度,对测定结果的不确定度来源及相对贡献进行比较与评定.结果表明:测定结果的不确定度来源于校准不确定度、样品称量... 通过建立HPLC法测定粮谷中赭曲霉毒素A(OTA)含量的不确定度评定方法,计算测定过程中各分量的标准不确定度和扩展不确定度,对测定结果的不确定度来源及相对贡献进行比较与评定.结果表明:测定结果的不确定度来源于校准不确定度、样品称量不确定度和体积不确定度、前处理过程样品回收率(Rec)不确定度和仪器测定过程中的不确定度,其中,校准不确定度中标准溶液配制不确定度的相对贡献最多,体积不确定度最小;当粮谷中OTA的含量为3.17μg/kg时,其扩展不确定度为0.476μg/kg(包含因子k=2).因此,检测人员应严格按照规范配制标准溶液,同时把握好前处理过程中提取、净化、洗脱等步骤的关键控制点,从而将测定结果的不确定度控制在可接受的范围内. 展开更多
关键词 HPLC法 粮谷 赭曲霉毒素A 不确定度
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实时荧光聚合酶链式反应检测肉制品中的鸭源性成分 被引量:2
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作者 张秀平 苗丽 《肉类研究》 北大核心 2018年第7期37-41,共5页
通过鸭的肌动蛋白β-actin保守基因设计可特异检测鸭肉成分的引物和探针,建立实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测鸭肉的方法,并通过模拟肉样和市售样品检测方法的准确性和适用性。结果表明:该方法可以特异... 通过鸭的肌动蛋白β-actin保守基因设计可特异检测鸭肉成分的引物和探针,建立实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术检测鸭肉的方法,并通过模拟肉样和市售样品检测方法的准确性和适用性。结果表明:该方法可以特异性检测出麻鸭和草鸭成分,而对猪、牛、羊、鸡等DNA均没有扩增,检测灵敏度可达到1 pg DNA;通过模拟肉样检测确定最低质量分数检测限为0.01%;市售样品的检测结果表明,该方法能很好地应用于市场,满足市场检测需求。 展开更多
关键词 实时荧光聚合酶链式反应 鸭肉 灵敏度 检测限
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