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重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性检测
1
作者
李斌
许晓亚
+3 位作者
杨刚刚
崔晴晴
杨亚娟
徐存拴
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期244-250,共7页
在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α(rh IL-1α),优化rh IL-1α的发酵工艺及纯化方法,以获得高表达、高纯度具有生物学活性的rh IL-1α。通过PCR扩增获得h IL-1α基因,构建其真核表达载体p PICZαA/h IL-1α,电转化至毕赤酵母X-...
在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α(rh IL-1α),优化rh IL-1α的发酵工艺及纯化方法,以获得高表达、高纯度具有生物学活性的rh IL-1α。通过PCR扩增获得h IL-1α基因,构建其真核表达载体p PICZαA/h IL-1α,电转化至毕赤酵母X-33,用PCR和SDS-PAGE方法筛选高效表达rh IL-1α的工程菌株并进行Western blot鉴定,DEAE弱阴离子离子交换层析一步纯化表达产物,并用MTT法初步检测其对人肝癌细胞7402的生物学作用。rh IL-1α在摇瓶规模下,经甲醇诱导4 d后表达量约为30 mg/L。Western blot检测rh IL-1α的特异性结合,获得纯度约95%,收率40%左右的rh IL-1α,并证明rh IL-1α能够抑制人肝癌细胞7402的增殖。构建了重组h IL-1α的基因工程菌,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为进一步研究其生物学活性和功能奠定了基础。
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关键词
重组人白细胞介素-1α
毕赤酵母
表达
纯化
人肝癌细胞
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职称材料
题名
重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性检测
1
作者
李斌
许晓亚
杨刚刚
崔晴晴
杨亚娟
徐存拴
机构
河南师范大学生命科学学院河南省一科技部共建细胞分化国家重点实验室培育基地和河南省生物工程重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第9期244-250,共7页
基金
国家"973"前期研究专项(2012CB722304)
河南省自然科学基金项目(142300413212
+1 种基金
132300413208)
河南省重大科技攻关项目(111100910600)
文摘
在毕赤酵母中分泌表达重组人白细胞介素-1α(rh IL-1α),优化rh IL-1α的发酵工艺及纯化方法,以获得高表达、高纯度具有生物学活性的rh IL-1α。通过PCR扩增获得h IL-1α基因,构建其真核表达载体p PICZαA/h IL-1α,电转化至毕赤酵母X-33,用PCR和SDS-PAGE方法筛选高效表达rh IL-1α的工程菌株并进行Western blot鉴定,DEAE弱阴离子离子交换层析一步纯化表达产物,并用MTT法初步检测其对人肝癌细胞7402的生物学作用。rh IL-1α在摇瓶规模下,经甲醇诱导4 d后表达量约为30 mg/L。Western blot检测rh IL-1α的特异性结合,获得纯度约95%,收率40%左右的rh IL-1α,并证明rh IL-1α能够抑制人肝癌细胞7402的增殖。构建了重组h IL-1α的基因工程菌,并在毕赤酵母中实现了高效表达,为进一步研究其生物学活性和功能奠定了基础。
关键词
重组人白细胞介素-1α
毕赤酵母
表达
纯化
人肝癌细胞
Keywords
recombinant human interleukin-1α
Pichia pastoris
expression
purification
Bel-7402 cell
分类号
R346 [医药卫生—基础医学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
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被引量
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1
重组人白细胞介素-1α在毕赤酵母中的表达、纯化及生物学活性检测
李斌
许晓亚
杨刚刚
崔晴晴
杨亚娟
徐存拴
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
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