免疫沉淀分析抗人DR5单克隆抗体激活白血病细胞caspase8/10 被引量：1

1

作者 都景芳 张舒曼 +2 位作者 刘广超 李淑莲 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1299-1305,共7页

目的:分析抗人死亡受体5(death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6对白血病细胞系Jurkat及U937细胞caspase8、caspase10激活变化。方法:采用Western blot方法检测mDRA-6对Jurkat及U937细胞caspase-8、caspase-10、caspase-3的激活改变;... 目的:分析抗人死亡受体5(death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6对白血病细胞系Jurkat及U937细胞caspase8、caspase10激活变化。方法:采用Western blot方法检测mDRA-6对Jurkat及U937细胞caspase-8、caspase-10、caspase-3的激活改变;免疫沉淀方法分析mDRA-6诱导的Jurkat及U937细胞DISC的caspase-8、caspase-10分子;定量-PCR检测Jurkat、U937细胞caspase-8、caspase-10 mRNA表达。MTT法检测caspase-8、caspase-10和caspase-3抑制剂对mDRA-6抑制Jurkat及U937细胞生长增殖的影响;AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测caspase-8、caspase-10抑制剂对mDRA-6诱导细胞凋亡作用的影响;结果:Western blot检测显示,mDRA-6作用Jurkat细胞,导致细胞caspase-8分子激活降解,但对caspase-10无激活改变;mDRA-6作用U937细胞,激活细胞caspase-10分子,但对caspase-8无激活表现;mDRA-6作用Jurkat和U937细胞,caspase-3及PARP均表现出激活降解。免疫沉淀检测发现,mDRA-6作用白血病细胞4h,Jurkat细胞DISC的caspase-8条带明显,caspase-10条带无明显显示;相反,U937细胞DISC的caspase-10条带出现,而caspase-8无明显条带显示。定量-PCR检测发现,Jurkat和U937细胞caspase-8 mRNA表达无明显差异,但U937细胞caspase-10 mRNA表达水平明显高于Jurkat细胞(P<0.01)。预先使用caspase-8、caspase-10、caspase-3抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6所致的Jurkat细胞生长抑制率分别降低了72.94%(t=20.27,P<0.01)、8.09%(t=1.82,P>0.05)和31.20%(t=8.06,P<0.01);mDRA-6所致U937细胞生长抑制率分别降低了4.53%(t=0.90,P>0.05)、69.09%(t=17.25,P<0.01)和50.20%(t=13.06,P<0.01)。AnnexinⅤ/PI双染流式细胞术检测发现,预先使用caspase-8、10抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡率分别降低了80.82%和8.34%;mDRA-6诱导的U937细胞凋亡率分别降低2.50%和48.47%。结论:mDRA-6激活不同起始caspase诱导细胞凋亡,激活caspase-8启动Jurkat细胞凋亡,激活caspase-10启动U937细胞凋亡;U937细胞caspase-10激活可能与细胞caspase-10mRNA高表达有关。 展开更多

关键词 凋亡 死亡受体5 单克隆抗体 半胱天冬酶 JURKAT细胞 U937细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)诱导Jurkat细胞凋亡活性研究 被引量：13

2

作者 李淑莲 张军 +4 位作者 刘广超 白慧玲 刘英杰 卢峰 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期65-67,71,共4页

目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体——mDRA-6对Jur- kat细胞的凋亡作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗人DR5单抗——mDRA-6;光镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细... 目的:观察抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单克隆抗体——mDRA-6对Jur- kat细胞的凋亡作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗人DR5单抗——mDRA-6;光镜下观察mDRA-6作用下Jurkat细胞形态变化;MTT方法计算mDRA-6不同浓度、不同作用时间对Jurkat细胞凋亡率影响。结果:mDRA-6致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成;MTT法显示mDRA-6具有明显的Jurkat细胞杀伤作用, 0．1μg/ml的mDRA-6即可使Jurkat细胞存活率降至77．2％;25．6μg/ml的mDRA-6作用8小时,可使Jurkat细胞存活率降至 28．4％;Annexin v及PI双染显示1 μg/ml的mDRA-6作用10小时,Jurkat细胞凋亡率达81．82％。结论:抗DR5单抗—— mDRA-6具有高效诱导Jurkat细胞凋亡的活性。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 凋亡 抗死亡受体5单克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

交联抗人DR5单抗-YM366EC诱导Jurkat细胞凋亡机制研究 被引量：6

3

作者 白慧玲 杜耀武 +4 位作者 王雪垠 李淑莲 王靖 刘广超 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期789-792,797,共5页

目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MT... 目的:探讨抗肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)的死亡受体5(DR5)单抗-YM366EC引起Jurkat细胞凋亡信号传导通路,阐明抗DR5抗体的抗肿瘤效应机制,为相关肿瘤治疗提供依据。方法:光镜下观察交联366EC作用下Jurkat细胞形态变化,并利用MTT法检测Jurkat细胞的增殖,利用FITC-AnnexinV及PI标记流式细胞仪检测交联YM366EC对Jurkat细胞凋亡率影响。进一步用Western blot法检测交联YM366EC作用于Jurkat细胞2、4、6、8、10、12小时时Bcl-2、Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9的表达变化。结果:DR5抗体YM366EC单独应用无凋亡作用,但应用抗小鼠IgG交联366EC后可致Jurkat细胞染色质边集、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成,并可直接诱导TRAIL敏感的Jurkat细胞凋亡改变。Western blot检测到随着抗体诱导时间的延长Jurkat细胞Bcl-2蛋白表达减少;Cyt-C、Bax、有活性的caspase3和caspase9蛋白的表达增加。结论:交联抗DR5抗体YM366EC对Jurkat细胞增殖有明显的抑制作用,诱导的Jurkat细胞凋亡的分子机制涉及到Cyt-C、Bax、caspase3、caspase9。 展开更多

关键词 交联 JURKAT细胞 抗DR5抗体 凋亡 流式细胞术 免疫印迹

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗人DR5单克隆抗体——mDRA-6与顺铂协同杀伤白血病细胞HL-60作用研究 被引量：5

4

作者 李淑莲 马远方 +3 位作者 刘广超 张军 白慧玲 刘英杰 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期118-122,共5页

目的:观察抗死亡受体5(Death receptor5,DR5)单克隆抗体———mDRA-6与顺铂(DDP)对HL-60细胞的协同杀伤作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗DR5单抗———mDRA-6;流式细胞术测定顺铂对HL-60细胞表面DR5表... 目的:观察抗死亡受体5(Death receptor5,DR5)单克隆抗体———mDRA-6与顺铂(DDP)对HL-60细胞的协同杀伤作用。方法:DR5蛋白免疫BALB/c小鼠,融合筛选抗DR5杂交瘤细胞,制备抗DR5单抗———mDRA-6;流式细胞术测定顺铂对HL-60细胞表面DR5表达及细胞凋亡率;荧光显微镜下观察mDRA-6与顺铂协同作用下HL-60细胞形态变化;MTT法测定不同浓度的顺铂与mDRA-6对HL-60细胞存活的影响;琼脂糖凝胶电泳检测mDRA-6与顺铂联合对HL-60细胞DNA片段化的影响。结果:顺铂可诱导HL-60细胞表面DR5表达增加,mDRA-6与顺铂联用致HL-60细胞出现染色质浓缩、断裂,细胞出芽,凋亡小体形成等细胞凋亡形态学变化;250ng/ml的mDRA-6作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为16.61%;0.16μg/ml的DDP作用于HL-60细胞10小时,细胞凋亡率为2.35%;二者联合作用后,HL-60细胞凋亡率增至57.10%;mDRA-6与DDP联合作用HL-60细胞,DNA琼脂糖凝胶电泳显示明显“梯形”条带。结论:抗DR5单抗———mDRA-6与DDP对HL-60细胞具有强大的协同杀伤作用。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体 单克隆抗体 顺铂

在线阅读 下载PDF 职称材料

热疗和人抗DR5单克隆抗体致肿瘤细胞凋亡的协同作用 被引量：5

5

作者 席子明 张军 +3 位作者 李淑莲 王明丽 刘广超 马远方 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期500-501,共2页

目的:探讨热疗和人抗DR5单克隆抗体(mAb)致肿瘤细胞凋亡的协同作用。方法:使用MTT法检测抗人DR5mAb单独或联合应用顺铂或热疗对肝癌SMMC-7721细胞体外增殖的抑制作用,以流式细胞术检测不同方案对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果:未热... 目的:探讨热疗和人抗DR5单克隆抗体(mAb)致肿瘤细胞凋亡的协同作用。方法:使用MTT法检测抗人DR5mAb单独或联合应用顺铂或热疗对肝癌SMMC-7721细胞体外增殖的抑制作用,以流式细胞术检测不同方案对SMMC-7721细胞凋亡率的影响。结果:未热处理细胞增殖抑制率分别为:顺铂组32%;m-DRA-6组22%;顺铂和m-DRA-6组37%。热处理细胞增殖抑制率分别为:顺铂组58.06%;m-DRA-6组14.52%;顺铂和m-DRA-6组91.13%。细胞凋亡的未热处理组:顺铂组13.53%;m-DRA-6组13.66%;顺铂和m-DRA-6组84.24%。热处理组:细胞仅热处理(不加任何药物)对照组9.41%;顺铂组30.27%%;m-DRA-6组57.52%;顺铂和m-DRA-6组91.33%。结论:热疗不仅能明显提高肿瘤细胞凋亡,而且能提高m-DRA-6和化疗药物的致肿瘤细胞凋亡作用。 展开更多

关键词 热疗 mAbDR5 肝癌细胞 SMMC-7721

在线阅读 下载PDF 职称材料

DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中的作用 被引量：10

6

作者 马远方 杨东亮 +1 位作者 陆士新 陈有海 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期332-334,共3页

目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆... 目的 :研究DR5在介导TRAIL凋亡信号中的作用。方法 :用含人DR5细胞外全长结构域重组DR5免疫BALB C小鼠 ,制备抗DR5单克隆抗体 ;流式细胞仪检测Jurkat细胞表面DR5表达水平 ;采用TRAIL凋亡检测试剂盒 ,检测Jurkat细胞凋亡率及抗DR5单克隆抗体对TRAIL诱导细胞凋亡的阻断率。结果 :DR5在Jurkat细胞表面的表达率为 94 83% ,TRAIL和抗TRAIL单克隆抗体能够诱导Jurkat细胞凋亡 ,呈现明显的剂量相关性 ,TRAIL浓度在 5 0～ 10 0ng ml时 ,杀伤率达 90 %以上。预先用抗DR5单克隆抗体与Jurkat细胞作用后 ,TRAIL对Jurkat细胞的杀伤功能几乎完全被mAb所阻断 ,其平均阻断率达90 4 9%。结论 :DR5在TRAIL诱导Jurkat细胞凋亡中起着十分关键的作用。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体 死亡受体5 凋亡 抗DR5单克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗人DR5抗体mDRA-6细胞毒作用机制分析 被引量：7

7

作者 刘广超 马远方 +4 位作者 张军 李淑莲 卢峰 白慧玲 赵粤萍 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期790-793,共4页

目的:探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mAb)mDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用及其机制。方法:以流式细胞术测定mAbmDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用和细胞凋亡作用,以及caspase8、9的抑制剂对mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡的影响。在荧光显微镜... 目的:探讨鼠抗人DR5单克隆抗体(mAb)mDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用及其机制。方法:以流式细胞术测定mAbmDRA-6对Jurkat细胞的细胞毒作用和细胞凋亡作用,以及caspase8、9的抑制剂对mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡的影响。在荧光显微镜下,观察mAbmDRA-6对Jurkat细胞形态的影响。以琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat细胞中的DNA片段化。结果:mAbmDRA-6对Jurkat细胞具有显著的细胞毒作用,并呈剂量和时间依赖性。经mAbmDRA-6处理后,Jurkat细胞可出现典型的细胞凋亡的形态特征:细胞膜皱缩,出泡,染色质浓缩,形成凋亡小体等。经mAbmDRA-6处理后,Jurkat细胞膜表面高表达丝氨酸磷脂,并可导致Jurkat细胞中的DNA片段化。caspase8的抑制剂可明显抑制mAbmDRA-6诱导的Jurkat细胞凋亡,caspase9的抑制剂的影响很小。结论:mAbmDRA-6可通过死亡受体信号传导途径诱导Jurakt细胞凋亡,对Jurkat细胞产生细胞毒作用,其在以TRAIL/DR5系统进行的肿瘤治疗和探讨DR5功能结构域方面具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 死亡受体 细胞凋亡 单克隆抗体

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗人DR5单抗与阿霉素联合对人肝癌细胞SMMC-7721协同杀伤效应 被引量：5

8

作者 张军 马远方 +2 位作者 刘广超 李淑莲 卢锋 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期133-136,共4页

目的:探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用,及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法:常规培养肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst 33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化;MTT法检测细胞毒性作用... 目的:探讨mDRA-6对肝癌细胞系SMMC-7721致凋亡作用,及阿霉素与mDRA-6联合协同杀伤效应与机制。方法:常规培养肝癌细胞SMMC-7721,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率。Hoechst 33258染色观察SMMC-7721细胞形态变化;MTT法检测细胞毒性作用;流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:(1)mDRA-6能够诱导SMMC-7721细胞凋亡,在1.89μg/m l浓度下可杀伤36%的细胞,增加mDRA-6浓度,凋亡作用无明显增加;(2)SMMC-7721细胞对阿霉素敏感,存在浓度依赖性;(3)阿霉素与mDRA-6联合对SMMC-7721细胞具有协同杀伤作用,2μg/m l的mDRA-6与40 ng/m l的阿霉素联合杀伤60%SMMC-7721,Hoechst 33258染色和Annexin V/PI染色证实杀伤作用是通过细胞凋亡实现的。结论:mDRA-6能够诱导肝癌细胞SMMC-7721凋亡,阿霉素与mDRA-6联合具有协同作用。 展开更多

关键词 抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6) 阿霉素 协同杀伤作用 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

Foxp3对肺癌细胞增殖及成瘤的影响 被引量：5

9

作者 刘瑞敏 晁玮霞 +4 位作者 王少龙 王明丽 贾彩云 白慧玲 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第10期1481-1484,共4页

目的:研究转录因子Foxp3在肺癌细胞中的高表达对肺癌细胞增殖及成瘤的影响。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株。MTT法观测NCIH-h Foxp3及对照细胞的增殖。ELISA法检测NCIHh Foxp3及对照细胞IL-8、IL-1... 目的:研究转录因子Foxp3在肺癌细胞中的高表达对肺癌细胞增殖及成瘤的影响。方法:利用脂质体转染法建立稳定高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株。MTT法观测NCIH-h Foxp3及对照细胞的增殖。ELISA法检测NCIHh Foxp3及对照细胞IL-8、IL-10的分泌。建立移植瘤小鼠模型,观察成瘤情况。结果:成功建立高表达Foxp3的NCIH-h Foxp3肺癌细胞株;与阴性对照相比,NCIH-h Foxp3细胞增殖减慢,但成瘤能力强。NCIH-h Foxp3细胞培养上清IL-8表达量减低,IL-10表达量升高。结论:高表达Foxp3的肺癌细胞可能通过表达细胞因子改变局部生长的微环境,逃逸免疫监视,而促进肿瘤细胞的成瘤和发展。 展开更多

关键词 FOXP3 高表达 增殖 成瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

死亡受体5在肝癌细胞系及肝细胞系表面的表达 被引量：5

10

作者 张军 马远方 +1 位作者 刘广超 吴雄文 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期287-289,共3页

目的:利用抗死亡受体5(DeathReceptor5)单克隆抗体(mAb),检测DR5在肝癌细胞系的表达。方法:sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR... 目的:利用抗死亡受体5(DeathReceptor5)单克隆抗体(mAb),检测DR5在肝癌细胞系的表达。方法:sDR5免疫BALB/c小鼠,小鼠脾细胞与SP2/0-Ag14细胞在50%PEG条件下融合,获得能够分泌抗DR5单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用杂交瘤细胞株分泌的抗DR5特异性单克隆抗体,采用流式细胞仪技术测定抗DR5mAb结合至细胞表面的量来分析死亡受体DR5在肝癌细胞系及肝细胞表面的表达情况。结果:不同细胞表面DR5的表达水平分别为:人肝癌SMMC7721细胞95%、人肝细胞癌HepG2细胞40%,人正常肝细胞HL-770220.3%。结论:抗DR5mAb能够特异性与DR5结合。DR5在人肝癌SMMC7721细胞高水平表达,人肝细胞癌HepG2细胞中度表达,人正常肝细胞HL-7702细胞低表达。该特异性mAb在研究TRAIL受体的生物功能上是一种有用的工具,对研究DR5在组织和细胞系表达十分有价值。 展开更多

关键词 死亡受体5 单克隆抗体 表达

在线阅读 下载PDF 职称材料

食管癌细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系 被引量：4

11

作者 刘广超 都景芳 +4 位作者 马远方 王秀英 高荣 高萍 刘世贵 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期817-821,共5页

目的:探讨食管癌鳞癌EC9706细胞系细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系。方法:免疫细胞化学技术分析食管癌EC9706细胞的DR5表达分布;流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5的表达及细胞的凋亡率。结果:DR5分布在食管癌EC9706细胞的细... 目的:探讨食管癌鳞癌EC9706细胞系细胞表面DR5的表达分布与细胞铺展状态的关系。方法:免疫细胞化学技术分析食管癌EC9706细胞的DR5表达分布;流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5的表达及细胞的凋亡率。结果:DR5分布在食管癌EC9706细胞的细胞质和细胞膜表面,主要在细胞质,但在细胞核没有DR5分布,而且在悬浮的食管癌细胞表面DR5表达高于铺展者。悬浮的食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性高于铺展者。结论:食管癌细胞表面DR5的表达与细胞铺展状态具有密切的关系,细胞铺展状态的变化直接影响细胞表面DR5的表达分布以及对抗DR5功能性抗体诱导的细胞凋亡敏感性。该研究结果对进一步探讨DR5表达分布的机制以及TRAIL和DR5的功能性抗体的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义。 展开更多

关键词 DR5 功能性抗体 TRAIL 细胞凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗人DR5单克隆抗体诱导Jurkat和U937细胞凋亡的线粒体信号通路 被引量：2

12

作者 李淑莲 蔡静 +2 位作者 张舒曼 刘广超 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第12期1068-1072,共5页

目的:探讨抗人死亡受体5(Death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6诱导Jurkat和U937细胞凋亡的线粒体信号通路。方法:MTT法检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞生长增殖的影响,以及caspase-9、3抑制剂对mDRA-6抑制Jur-kat和U937细胞生长增殖的... 目的:探讨抗人死亡受体5(Death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6诱导Jurkat和U937细胞凋亡的线粒体信号通路。方法:MTT法检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞生长增殖的影响,以及caspase-9、3抑制剂对mDRA-6抑制Jur-kat和U937细胞生长增殖的影响;琼脂糖凝胶电泳检测Jurkat和U937细胞DNA片段化降解;Western blot检测mDRA-6对Jurkat和U937细胞bax、bcl-2、bcl-xl、Cyt c及caspase-9、3的激活改变。结果:mDRA-6呈时间、浓度依赖性地抑制Jurkat和U937细胞的生长增殖,10 mg/L的mDRA-6作用6、8和10小时,Jurkat细胞增殖抑制率分别达59.38%、72.56%和76.28%,U937细胞增殖抑制率分别达38.67%、47.54%和50.59%。琼脂糖凝胶电泳显示,10 mg/L的mDRA-6作用6小时,Jurkat和U937细胞均呈现凋亡细胞特有的DNA梯形条带;Western blot检测结果发现,随着mDRA-6作用时间延长,Jurkat和U937细胞内促凋亡分子bax增多,抗凋亡分子bcl-2及bcl-xl减少,Cyt c释放明显增多,同时caspase-9、caspase-3也显示明显的激活表现。预先使用caspase-9抑制剂孵育细胞1小时,mDRA-6所致Jurkat和U937细胞生长抑制率分别降低了24.36%(t=5.44,P﹤0.01)和20.82%(t=4.29,P﹤0.01),mDRA-6所致Jurkat和U937细胞凋亡率分别降低了32.89%和23.97%。结论:线粒体信号通路激活是抗人死亡受体5(Death receptor 5,DR5)单克隆抗体mDRA-6诱导Jurkat和U937细胞凋亡的途径之一。 展开更多

关键词 死亡受体5 单克隆抗体 凋亡 线粒体

在线阅读 下载PDF 职称材料

去黏附化增强抗DR5抗体介导食管癌细胞凋亡及其作用机制 被引量：1

13

作者 刘广超 马远方 +3 位作者 都景芳 张军 李淑莲 白慧玲 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期961-963,共3页

目的:探讨去黏附化对抗死亡受体5(DR5)抗体诱导的食管癌鳞癌EC9706细胞系凋亡的影响及作用机制。方法:用EDTA消化对蓝菌素A预处理或未处理的贴壁生长的食管癌细胞,制备悬浮细胞;利用流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5表达及人抗DR5功能... 目的:探讨去黏附化对抗死亡受体5(DR5)抗体诱导的食管癌鳞癌EC9706细胞系凋亡的影响及作用机制。方法:用EDTA消化对蓝菌素A预处理或未处理的贴壁生长的食管癌细胞,制备悬浮细胞;利用流式细胞术检测食管癌细胞表面DR5表达及人抗DR5功能抗体诱导的细胞凋亡;利用免疫荧光技术观察食管癌EC9706细胞DR5表达分布。结果:悬浮食管癌细胞对抗DR5的功能性抗体诱导的细胞凋亡的敏感性明显高于铺展者;未经蓝菌素A预处理制备的悬浮食管癌细胞的表面DR5表达明显高于经蓝菌素A处理制备的悬浮者。在铺展的食管癌EC9706细胞,DR5分布于细胞质和细胞膜表面,主要在细胞质,在细胞核没有DR5分布,但在悬浮的食管癌细胞表面DR5表达明显增强。结论:去黏附化增强食管癌细胞对抗DR5功能性抗体诱导细胞凋亡的敏感性,该作用是通过去黏附化增强DR5向细胞表面转运实现的,DR5的膜转运与高尔基体有关。该研究结果对进一步探讨DR5表达分布的机制以及TRAIL和DR5的功能性抗体的抗肿瘤临床应用有一定的指导意义。 展开更多

关键词 DR5 功能性抗体 TRAIL 细胞凋亡 细胞黏附

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗人DR5单克隆抗体对白血病U937细胞凋亡的作用 被引量：1

14

作者 王靖 李淑莲 +3 位作者 马远方 刘广超 杜耀武 王雪银 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期417-420,共4页

目的:研究鼠抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对白血病细胞U937的凋亡诱导作用。方法:光镜下观察mDRA-6作用后U937细胞的形态变化;流式细胞术检测U937细胞表面DR5表达率;MTT法检测mDRA-6对U937细胞生长的影响;An-nexinV-FITC/PI双染法流式细... 目的:研究鼠抗人DR5单克隆抗体(mDRA-6)对白血病细胞U937的凋亡诱导作用。方法:光镜下观察mDRA-6作用后U937细胞的形态变化;流式细胞术检测U937细胞表面DR5表达率;MTT法检测mDRA-6对U937细胞生长的影响;An-nexinV-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;琼脂糖凝胶电泳检测U937细胞DNA的片段化降解;JC-1单染流式细胞仪检测细胞线粒体膜电位改变。结果:mDRA-6作用U937细胞后呈现典型的细胞凋亡特征;MTT法检测显示mDRA-6作用U937细胞24小时死亡率为61·09%,并呈时间、浓度依赖性;流式细胞仪检测显示10mg/L的mDRA-6作用4小时,U937细胞凋亡率为79·12%;琼脂糖凝胶电泳显示DNA呈现明显梯状带型;mDRA-6作用U937细胞后线粒体膜电位明显下降。结论:mDRA-6能够诱导白血病U937细胞凋亡,是具有诱导细胞凋亡活性的功能性抗体。 展开更多

关键词 DR5 单克隆抗体 白血病细胞 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗人DR5抗体mDRA-6诱导EC109细胞自噬和凋亡 被引量：1

15

作者 贾彩云 赵粤萍 +1 位作者 刘广超 马远方 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期303-306,322,共5页

目的：探讨鼠抗人D1L5单克隆抗体（mAb）mDRA-6对ECl09细胞自噬和凋亡诱导作用。方法：MTY法检测mDRA-6细胞毒性；MDC染色和Hoechst33258染色，观察mDRA-6诱导细胞自噬、凋亡形态学变化；流式细胞术定量分析mDRA-6诱导细胞自噬率和凋亡... 目的：探讨鼠抗人D1L5单克隆抗体（mAb）mDRA-6对ECl09细胞自噬和凋亡诱导作用。方法：MTY法检测mDRA-6细胞毒性；MDC染色和Hoechst33258染色，观察mDRA-6诱导细胞自噬、凋亡形态学变化；流式细胞术定量分析mDRA-6诱导细胞自噬率和凋亡率。结果：mDRA-6具有细胞毒性，0．024～25mg／LmDRA-6作用细胞呈时间剂量依赖性．各组间差异具有统计学意义（P〈0．01），10h的IC50值为0．78mg／L；经mDRA-6处理ECl09细胞出现核固缩、染色质边缘化和形成凋亡小体等；同时细胞浆中出现自噬体；流式细胞术测定结果显示，2．0mg／LmDRA-6作用细胞10h，细胞自噬率和凋亡率分别为19．44％和54．88％。结论：mDRA-6可引起ECl09细胞自噬和凋亡；mDRA-6通过诱导ECl09细胞自噬和凋亡抑制细胞生长。 展开更多

关键词 抗DR5单克隆抗体(mDRA6) EC109细胞 自噬 凋亡

在线阅读 下载PDF 职称材料

维生素E琥珀酸酯增强DR5抗体对Raji和K562细胞的凋亡作用

16

作者 李淑莲 王赟 +1 位作者 都景芳 马远方 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2011年第15期878-881,共4页

目的:探讨VES增强抗DR5单抗mDRA-6诱导白血病细胞凋亡作用及可能机制。方法:MTT法检测VES及mDRA-6对白血病细胞Raji和K562细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染分析白血病细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR5表达;免疫印迹技术检... 目的:探讨VES增强抗DR5单抗mDRA-6诱导白血病细胞凋亡作用及可能机制。方法:MTT法检测VES及mDRA-6对白血病细胞Raji和K562细胞的生长抑制作用;Annexin V-FITC/PI双染分析白血病细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR5表达;免疫印迹技术检测细胞DR5蛋白表达。结果:MTT检测表明,浓度为10μg/mL的mDRA-6作用12h,Raji及K562细胞死亡率分别为21.98%和5.23%,而5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L的VES分别与mDRA-6共同作用于Raji或K562细胞,Raji细胞死亡率分别增加至24.67%(P>0.05)、35.65%(P<0.01)和40.22%(P<0.01),K562细胞死亡率分别增加至6.00%(P>0.05)、7.89%(P<0.01)、8.67%(P<0.01)。Annexin V/PI双染检测2μg/mL的mDRA-6单独作用Raji及K562细胞12h,细胞凋亡率分别为20.79%和7.74%,2μg/mL的mDRA-6与10μmol/L的VES共同作用Raji及K562细胞12h,细胞凋亡率分别增至43.18%和16.99%。Raji和K562细胞表面DR5自然表达分别为42.35%和14.92%;10μmol/L的VES作用Raji、K562细胞12h后,细胞膜DR5表达率分别增加至70.08%和16.38%。免疫印迹技术检测显示,不同浓度的VES均可增加Raji和K562细胞DR5蛋白表达。结论:VES增强mDRA-6对白血病细胞系Raji和K562细胞的凋亡诱导作用,可能是VES增加了Raji和K652细胞膜DR5表达及细胞DR5蛋白表达所致。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体 死亡受体5 单克隆抗体 凋亡 维生素E琥珀酸酯

在线阅读 下载PDF 职称材料

mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞的杀伤效应

17

作者 刘英杰 马远方 +4 位作者 张军 赵粤萍 李淑莲 刘广超 白慧玲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期522-525,共4页

目的:探讨mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞有无杀伤作用及二者有无协同效应。方法:常规培养Jurkat细胞,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率,MTT法检测细胞毒性作用,Hoechst33258染色观察Jurkat细胞核形态变化,流式细胞术定量分析凋亡细胞... 目的:探讨mDRA-6与尼美舒利对Jurkat细胞有无杀伤作用及二者有无协同效应。方法:常规培养Jurkat细胞,流式细胞术检测细胞表面DR5的表达率,MTT法检测细胞毒性作用,Hoechst33258染色观察Jurkat细胞核形态变化,流式细胞术定量分析凋亡细胞率。结果:①Jurkat细胞表面DR5的表达率为84.83%。②mDRA-6与尼美舒利均能杀伤Jurkat细胞,存在浓度依赖性。400μmol/L的尼美舒利作用细胞10小时,细胞凋亡率为11.51%;0.5ng/ml与1ng/ml的mDRA-6作用细胞10小时,细胞凋亡率分别为3.67%和6.3%;③二者联合具有较好的协同促凋亡作用,400μmol/L的尼美舒利联合0.5ng/ml与1ng/ml的mDRA-6作用细胞10小时,细胞凋亡率分别为50.38%和63.79%。结论:mDRA-6与尼美舒利均有杀伤Jurkat细胞的作用,二者具有较强的协同作用,杀伤作用是通过诱导凋亡实现的。 展开更多

关键词 抗人DR5单克隆抗体 MDRA-6 尼美舒利 凋亡 JURKAT细胞

在线阅读 下载PDF 职称材料

抗死亡受体-5单克隆抗体的制备及特性鉴定 被引量：11

18

作者 白慧玲 赵粤萍 +1 位作者 刘广超 马远方 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期514-516,520,共4页

目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jur... 目的：研制抗DR5单克隆抗体（mAb），并鉴定其特性。方法：以纯化的DR5免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗DR5mAb。用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗DR5mAb的亚类。用ELISA法测定sDR5对抗DR5 mAb与DR5结合的阻断作用及流式细胞术检测与Jurkat细胞膜上DR5结合的阻断作用。以鉴定mAb的特异性。用间接ELISA法检测腹水mAb的效价、亲和常数并进行表位分析。结果：获得4株可分泌抗DR5 mAb的的杂交瘤细胞系YM366EC、YM366ED、YM369F5和YM369E6。4株mAb的Ig亚类均为IgG1；腹水mAb效价为1×10^-4-5×10^-6；亲和常数为1×10^9水平，4株mAb可识别2种不同的抗原表位。结论：获得4株抗DR5的mAb，为进一步用于临床诊断和实验研究创造了条件。 展开更多

关键词 DR5 单克隆抗体 特性鉴定 亲和常数

在线阅读 下载PDF 职称材料

生物功能化纳米SiO_2微球的构建及对谷胱甘肽S-转移酶的捕获分离 被引量：3

19

作者 邹雪艳 褚留杰 +2 位作者 董烁 赵彦保 李宾杰 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1394-1400,共7页

采用巯基丙基三甲氧基硅烷(MPS)一步水解法制备了表面带有巯基(—SH)的纳米SiO2微球(nSiO2-SH),探讨了水/醇体积比、反应温度、MPS初始浓度及反应时间对nSiO2-SH微球形貌的影响,并分析了反应机理.制备的nSiO2-SH微球进一步与还原型谷胱... 采用巯基丙基三甲氧基硅烷(MPS)一步水解法制备了表面带有巯基(—SH)的纳米SiO2微球(nSiO2-SH),探讨了水/醇体积比、反应温度、MPS初始浓度及反应时间对nSiO2-SH微球形貌的影响,并分析了反应机理.制备的nSiO2-SH微球进一步与还原型谷胱甘肽(GSH)中的—SH反应生成双硫键(—S—S—),在微球表面键合上GSH分子,得到了生物功能化的纳米nSiO2-GSH微球.通过扫描电子显微(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和热重分析仪(TG)对样品的表面形貌、尺寸和组成等进行了表征.利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测样品对谷胱甘肽S-转移酶(GST)的分离效果,结果表明,nSiO2-GSH微球能从混合蛋白中特异性吸附GST,达到了分离GST的目的. 展开更多

关键词 巯基纳米SiO2 生物功能化 特异性吸附 谷胱甘肽S-转移酶分离

在线阅读 下载PDF 职称材料

人精子膜抗原的制备及其在人精子抗体检测中的应用 被引量：3

20

作者 黄红莹 马远方 +1 位作者 刘广超 许国强 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期772-773,共2页

关键词 人精子膜抗原 制备方法 人精子抗体检测 胶体金免疫渗滤法

在线阅读 下载PDF 职称材料