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SV40PolyA顺式活化基因元件中不完整茎环结构的发现和序列研究
被引量：
1
1
作者
王红钢
马欢
+4 位作者
李珠
张彬
景向阳
张媛
吕占军
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期337-346,共10页
研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45...
研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45R(2F2R 5′端的45 bp)、30R和22R可以活化基因,且二串连体活化基因作用高于单体。Secloop(2F2R近中部的22 bp)和Poly4(2F2R 3′端的30 bp)不能活化基因。30R与Poly4用9碱基连接形成30R-Poly4,其活化基因作用低于2F2R,两个22R之间连接碱基数对活化GFP基因作用没有明显的影响。22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′)含有不完整的回文序列,可以形成不完整的茎环结构,包括一个3碱基loop、3 bp第一茎、2碱基泡和3 bp第二茎。改变22R茎环结构的碱基突变明显影响其活化GFP基因的作用,过多互补和过少互补的茎环结构均不利于活化基因,提示适当的不完整茎环结构与活化基因有关。
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关键词
非编码序列
GFP
茎环结构
ALU
SV40PolyA
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职称材料
SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响
被引量：
1
2
作者
李书平
冯晶晶
+2 位作者
王红钢
王秀芳
吕占军
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期113-119,共7页
SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14),...
SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14),构建pAlu14质粒,瞬时转染HeLa细胞,用Northern blot检测和荧光显微镜观察GFP RNA和GFP蛋白表达,发现Alu串联序列强烈抑制GFP基因表达,该序列没有转录终止作用产生高分子量GFP融合RNA。又在pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间按正、反方向插入PolyA序列及去除AATAAA信号的PolyA序列,插入的这些PolyA序列均能部分解除Alu14对GFP基因的抑制作用;去除AATAAA信号的PolyA正、反序列仍然引起转录终止。将PolyA反序(PolyAas)分为4段每段60 bp,中间的2段分别称为2F2R和3F3R,将2F2R或3F3R插在pAlu14质粒的Alu串联序列的上游,随着插入2F2R片段拷贝数的增加转录的GFP融合RNA的分子量增加;2F2R的下游如果依然是2F2R那么2F2R可以支持转录延伸,如果2F2R下游是Alu串联序列则2F2R导致转录终止。无论插入一个3F3R或插入64个3F3R,均产生低分子量GFP RNA。
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关键词
ALU
SV40
POLYA
AATAAA信号
GFP
转录终止
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职称材料
题名
SV40PolyA顺式活化基因元件中不完整茎环结构的发现和序列研究
被引量：
1
1
作者
王红钢
马欢
李珠
张彬
景向阳
张媛
吕占军
机构
河北医科
大学
实验动物学部遗传研究室
河南大学医学院生物化学与分子生物学教研室
河北医科
大学
第一医院呼吸内科
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第4期337-346,共10页
基金
河北省自然科学基金(编号:C2008001065)
河北省支撑计划项目(编号:08276101D-90)资助
文摘
研究室的前期工作发现,Alu串连序列插入pEGFP-C1质粒的GFP基因下游,瞬时转染HeLa细胞抑制GFP基因表达,2F2R(来自SV40PolyA反序5′端的第2个60 bp)插入GFP和Alu串连序列之间可以解除Alu序列对GFP基因的抑制作用。文章通过删减2F2R发现,45R(2F2R 5′端的45 bp)、30R和22R可以活化基因,且二串连体活化基因作用高于单体。Secloop(2F2R近中部的22 bp)和Poly4(2F2R 3′端的30 bp)不能活化基因。30R与Poly4用9碱基连接形成30R-Poly4,其活化基因作用低于2F2R,两个22R之间连接碱基数对活化GFP基因作用没有明显的影响。22R(5′-GTGAAAAAAATGCTTTATTTGT-3′)含有不完整的回文序列,可以形成不完整的茎环结构,包括一个3碱基loop、3 bp第一茎、2碱基泡和3 bp第二茎。改变22R茎环结构的碱基突变明显影响其活化GFP基因的作用,过多互补和过少互补的茎环结构均不利于活化基因,提示适当的不完整茎环结构与活化基因有关。
关键词
非编码序列
GFP
茎环结构
ALU
SV40PolyA
Keywords
non-coding sequence
GFP
stem-loop
Alu
SV4OPolyA
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响
被引量：
1
2
作者
李书平
冯晶晶
王红钢
王秀芳
吕占军
机构
河北医科
大学
实验动物学部遗传研究室
河北省邢台市人民医院检验二科
华东精神卫生康复中心
河南大学医学院生物化学与分子生物学教研室
出处
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期113-119,共7页
基金
河北省自然科学基金项目(编号:C2008001065和C2011206043)资助
文摘
SV40 PolyA(猴空泡病毒PolyA,简称PolyA)序列是有转录终止作用和使转录的mRNA添加PolyA尾的DNA序列(240 bp),含有AATAAA六核苷酸多腺苷化信号(Polyadenylation signal)。在pEGFP-C1质粒的GFP基因下游插入14个同向串联的Alu序列(Alu14),构建pAlu14质粒,瞬时转染HeLa细胞,用Northern blot检测和荧光显微镜观察GFP RNA和GFP蛋白表达,发现Alu串联序列强烈抑制GFP基因表达,该序列没有转录终止作用产生高分子量GFP融合RNA。又在pAlu14质粒GFP基因和Alu串联序列之间按正、反方向插入PolyA序列及去除AATAAA信号的PolyA序列,插入的这些PolyA序列均能部分解除Alu14对GFP基因的抑制作用;去除AATAAA信号的PolyA正、反序列仍然引起转录终止。将PolyA反序(PolyAas)分为4段每段60 bp,中间的2段分别称为2F2R和3F3R,将2F2R或3F3R插在pAlu14质粒的Alu串联序列的上游,随着插入2F2R片段拷贝数的增加转录的GFP融合RNA的分子量增加;2F2R的下游如果依然是2F2R那么2F2R可以支持转录延伸,如果2F2R下游是Alu串联序列则2F2R导致转录终止。无论插入一个3F3R或插入64个3F3R,均产生低分子量GFP RNA。
关键词
ALU
SV40
POLYA
AATAAA信号
GFP
转录终止
Keywords
Alu
SV40 PolyA
AATAAA singal
GFP
transcription termination
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
SV40PolyA顺式活化基因元件中不完整茎环结构的发现和序列研究
王红钢
马欢
李珠
张彬
景向阳
张媛
吕占军
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
SV40 PolyA序列及其AATAAA信号对上游GFP基因表达及转录终止的影响
李书平
冯晶晶
王红钢
王秀芳
吕占军
《遗传》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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职称材料
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