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小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达
被引量：
1
1
作者
樊剑鸣
张晓峰
+3 位作者
罗俊
许君
张巧
张改平
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期828-830,共3页
目的:克隆酪氨酸酶基因(TYR),并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定纯化的TYR活性。方法:利用RT-PCR技术,从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆全长TYR,克隆至pMD18-T载体,进行双链核苷酸序列测定。构建TYR毕赤酵母表达质粒pPICZaA-TYR...
目的:克隆酪氨酸酶基因(TYR),并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定纯化的TYR活性。方法:利用RT-PCR技术,从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆全长TYR,克隆至pMD18-T载体,进行双链核苷酸序列测定。构建TYR毕赤酵母表达质粒pPICZaA-TYR并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115,表达的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行分析,采用Co2+离子亲和层析柱纯化TYR并采用TYR多巴速率氧化法体外测定纯化的TYR活性。结果:克隆了TYR基因。构建了重组表达质粒pPICZaA-TYR。SDS-PAGE和Western blot分析显示,在相对分子质量(Mr)为约53000处出现1条特异性蛋白带,且能与兔抗TYR抗体发生反应。结论:克隆TYR基因片段与基因库所登录的序列相一致,并在毕赤酵母中获得表达和纯化并在体外测定了纯化的TYR活性。
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关键词
酪氨酸酶基因
黑色素瘤细胞
毕赤酵母
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职称材料
苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响
被引量：
1
2
作者
樊剑鸣
马建新
+4 位作者
高德富
许君
张巧
姚武
徐玉宝
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2009年第5期983-985,共3页
目的:观察苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法分别观察20、40、60、80和100mg/LMAP30处理48h及40mg/LMAP30处理24、36、48和72h对LoVo细胞生长的影响,计算细胞生长抑制率。采用流式细胞仪检测40m...
目的:观察苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法分别观察20、40、60、80和100mg/LMAP30处理48h及40mg/LMAP30处理24、36、48和72h对LoVo细胞生长的影响,计算细胞生长抑制率。采用流式细胞仪检测40mg/LMAP30处理24h对LoVo细胞凋亡的影响。采用Northern blot和Western blot分别检测40mg/LMAP30作用于LoVo细胞0～120h,细胞bcl-2和bax基因和蛋白的表达。结果:MAP30可呈剂量、时间依赖性抑制LoVo细胞的生长(F=128.3,107.5,P<0.05),促进LoVo细胞凋亡(F=92.7,P<0.05)。MAP30还可上调Bax基因与蛋白表达,下调Bcl-2基因与蛋白的表达。结论:MAP30可影响LoVo细胞Bcl-2和Bax的表达,从而诱导细胞凋亡,抑制细胞生长。
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关键词
MAP30
凋亡
大肠肿瘤
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职称材料
苦瓜核糖体失活蛋白MAP30基因的表达及特性分析
被引量：
4
3
作者
樊剑鸣
许君
+2 位作者
张巧
姚武
徐玉宝
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2008年第6期1142-1146,共5页
目的:克隆苦瓜MAP30蛋白基因的cDNA序列,并在体外进行原核表达和纯化,体外测定MAP30对镰刀菌的抑制作用并测定MAP30基因的表达模式。方法:利用RT-PCR技术扩增861 bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列,克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30原...
目的:克隆苦瓜MAP30蛋白基因的cDNA序列,并在体外进行原核表达和纯化,体外测定MAP30对镰刀菌的抑制作用并测定MAP30基因的表达模式。方法:利用RT-PCR技术扩增861 bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列,克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30原核表达质粒pET-28a-MAP30,SDS-PAGE和Western blot检测MAP30的表达。采用镍离子亲合层析纯化MAP30,并采用真菌抑制实验检测对镰刀菌的抑制作用,Northern blot检测其表达模式。结果:克隆片段与基因库所登录的序列一致,表达的MAP30蛋白相对分子质量约为30 000,MAP30体外能抑制镰刀菌的生长,镰刀菌能诱导MAP30基因的表达。结论:MAP30基因可能参与植物早期的过敏反应并在植物的抗病中发挥重要的作用。
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关键词
苦瓜
MAP30蛋白
镰刀菌
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职称材料
题名
小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达
被引量：
1
1
作者
樊剑鸣
张晓峰
罗俊
许君
张巧
张改平
机构
河南
省
农业
科学院
河南
省动物免疫学重点实验室
郑州
大学
公共卫生
学院
卫生毒理学研究室
河南农业大学生命科学院细胞生物学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第8期828-830,共3页
文摘
目的:克隆酪氨酸酶基因(TYR),并在毕赤酵母中表达和纯化其融合蛋白,体外测定纯化的TYR活性。方法:利用RT-PCR技术,从小鼠B16黑色素瘤细胞中克隆全长TYR,克隆至pMD18-T载体,进行双链核苷酸序列测定。构建TYR毕赤酵母表达质粒pPICZaA-TYR并导入毕赤酵母Pichia pastoris GS115,表达的重组蛋白用SDS-PAGE和Western blot进行分析,采用Co2+离子亲和层析柱纯化TYR并采用TYR多巴速率氧化法体外测定纯化的TYR活性。结果:克隆了TYR基因。构建了重组表达质粒pPICZaA-TYR。SDS-PAGE和Western blot分析显示,在相对分子质量(Mr)为约53000处出现1条特异性蛋白带,且能与兔抗TYR抗体发生反应。结论:克隆TYR基因片段与基因库所登录的序列相一致,并在毕赤酵母中获得表达和纯化并在体外测定了纯化的TYR活性。
关键词
酪氨酸酶基因
黑色素瘤细胞
毕赤酵母
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响
被引量：
1
2
作者
樊剑鸣
马建新
高德富
许君
张巧
姚武
徐玉宝
机构
郑州
大学
公共卫生
学院
卫生毒理学
教研室
河南
省人民医院内分泌科
河南
中医
学院
基础医
学院
细胞
生物学
教研室
河南农业大学生命科学院细胞生物学教研室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2009年第5期983-985,共3页
基金
郑州大学博士人才引进项目课题
文摘
目的:观察苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响。方法:采用MTT比色法分别观察20、40、60、80和100mg/LMAP30处理48h及40mg/LMAP30处理24、36、48和72h对LoVo细胞生长的影响,计算细胞生长抑制率。采用流式细胞仪检测40mg/LMAP30处理24h对LoVo细胞凋亡的影响。采用Northern blot和Western blot分别检测40mg/LMAP30作用于LoVo细胞0～120h,细胞bcl-2和bax基因和蛋白的表达。结果:MAP30可呈剂量、时间依赖性抑制LoVo细胞的生长(F=128.3,107.5,P<0.05),促进LoVo细胞凋亡(F=92.7,P<0.05)。MAP30还可上调Bax基因与蛋白表达,下调Bcl-2基因与蛋白的表达。结论:MAP30可影响LoVo细胞Bcl-2和Bax的表达,从而诱导细胞凋亡,抑制细胞生长。
关键词
MAP30
凋亡
大肠肿瘤
Keywords
MAP30
apoptosis
colorectal neoplasm
分类号
R735.34 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
苦瓜核糖体失活蛋白MAP30基因的表达及特性分析
被引量：
4
3
作者
樊剑鸣
许君
张巧
姚武
徐玉宝
机构
郑州
大学
公共卫生
学院
卫生毒理学
教研室
河南农业大学生命科学院细胞生物学教研室
出处
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2008年第6期1142-1146,共5页
基金
郑州大学博士引进人才基金资助项目
文摘
目的:克隆苦瓜MAP30蛋白基因的cDNA序列,并在体外进行原核表达和纯化,体外测定MAP30对镰刀菌的抑制作用并测定MAP30基因的表达模式。方法:利用RT-PCR技术扩增861 bp的苦瓜蛋白MAP30基因编码区序列,克隆至pMD18-T载体。构建苦瓜MAP30原核表达质粒pET-28a-MAP30,SDS-PAGE和Western blot检测MAP30的表达。采用镍离子亲合层析纯化MAP30,并采用真菌抑制实验检测对镰刀菌的抑制作用,Northern blot检测其表达模式。结果:克隆片段与基因库所登录的序列一致,表达的MAP30蛋白相对分子质量约为30 000,MAP30体外能抑制镰刀菌的生长,镰刀菌能诱导MAP30基因的表达。结论:MAP30基因可能参与植物早期的过敏反应并在植物的抗病中发挥重要的作用。
关键词
苦瓜
MAP30蛋白
镰刀菌
Keywords
bitter melon
MAP30 protein
Fusarium.L.
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
小鼠B16黑色素瘤细胞酪氨酸酶基因的克隆及在毕赤酵母中的表达
樊剑鸣
张晓峰
罗俊
许君
张巧
张改平
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2008
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
苦瓜蛋白MAP30对大肠癌细胞株LoVo细胞生长及凋亡的影响
樊剑鸣
马建新
高德富
许君
张巧
姚武
徐玉宝
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
苦瓜核糖体失活蛋白MAP30基因的表达及特性分析
樊剑鸣
许君
张巧
姚武
徐玉宝
《郑州大学学报（医学版）》
CAS
北大核心
2008
4
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