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奶牛乳腺上皮细胞中SCAP和SREBP1蛋白调控SCD基因表达的作用研究
被引量：
5
1
作者
韩立强
孙宇
+2 位作者
付彤
廉红霞
高腾云
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期652-658,共7页
旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP...
旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理,采用双荧光素酶报告基因系统检测转染SREBP1和SCAP对SCD基因启动子活性的影响;采用免疫荧光技术观察SREBP1在细胞核的表达,采用荧光定量PCR检测SCD基因mRNA的表达。结果表明,与转染pcDNA3.1载体的对照组相比,转染SCAP对SCD启动子活性无显著影响;转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1极显著增加SCD基因启动子活性值(P<0.01),并且SCAP的转染剂量与SCD的启动子活性值之间具有极显著的量效关系(P<0.01);在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增强SREBP1在细胞核的表达;细胞转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1后,SCD基因mRNA的表达分别显著上调1.23倍和1.54倍(P<0.05)。本研究表明,奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对SCD基因的转录激活作用。
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关键词
奶牛
乳腺上皮细胞
固醇调节元件结合蛋白
固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白
基因表达调控
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职称材料
基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备
2
作者
贾宾
陈慧心
+3 位作者
韩莹倩
郭玉堃
邵科宇
郭豫杰
《江西农业学报》
CAS
2019年第3期1-9,共9页
利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促...
利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体。将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC。通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中, Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体。
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关键词
Spyligase技术
流感血凝素H5HA10
原核表达
融合标签
多聚体
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职称材料
题名
奶牛乳腺上皮细胞中SCAP和SREBP1蛋白调控SCD基因表达的作用研究
被引量：
5
1
作者
韩立强
孙宇
付彤
廉红霞
高腾云
机构
河南农业大学牧医工程学院/农业部动物生化与营养重点实验室
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第3期652-658,共7页
基金
现代农业产业技术体系专项资金(CARS-37)
中国博士后科学基金(2016M592291)
+2 种基金
河南省自然科学基金(162300410152)
河南省产学研项目(172107000043)
河南省基础与前沿项目(162300410258)
文摘
旨在研究奶牛乳腺上皮细胞中固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP)对固醇调节元件结合蛋白(SREBP1)调控的硬脂酰辅酶A去饱和酶基因(SCD)表达的影响。培养奶牛乳腺上皮细胞,在细胞中转染奶牛SCD基因启动子载体,同时转染SREBP1和SCAP真核表达载体作为处理,采用双荧光素酶报告基因系统检测转染SREBP1和SCAP对SCD基因启动子活性的影响;采用免疫荧光技术观察SREBP1在细胞核的表达,采用荧光定量PCR检测SCD基因mRNA的表达。结果表明,与转染pcDNA3.1载体的对照组相比,转染SCAP对SCD启动子活性无显著影响;转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1极显著增加SCD基因启动子活性值(P<0.01),并且SCAP的转染剂量与SCD的启动子活性值之间具有极显著的量效关系(P<0.01);在乳腺上皮细胞中转染SCAP后,能够增强SREBP1在细胞核的表达;细胞转染SREBP1和共转染SCAP/SREBP1后,SCD基因mRNA的表达分别显著上调1.23倍和1.54倍(P<0.05)。本研究表明,奶牛SCAP可以增加SREBP1蛋白在细胞核中的表达,促进对SCD基因的转录激活作用。
关键词
奶牛
乳腺上皮细胞
固醇调节元件结合蛋白
固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白
基因表达调控
Keywords
dairy
mammary epithelial cells
SREBP1
SCAP
gene expression and regulation
分类号
S823.2 [农业科学—畜牧学]
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职称材料
题名
基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备
2
作者
贾宾
陈慧心
韩莹倩
郭玉堃
邵科宇
郭豫杰
机构
河南农业大学牧医工程学院/农业部动物生化与营养重点实验室
出处
《江西农业学报》
CAS
2019年第3期1-9,共9页
基金
国家重点研发计划项目"动物重大疫病新概念防控产品研发"(2017YFD0501100)
河南省高等学校重点科研项目(17A230013)
文摘
利用Spyligase技术在H5HA10序列的C端和N端分别加上SpyTag和KTag序列,并分别与His6-ArsC、His6-PAS200、His6-XTEN、His6-PEAT、SiTag3-SUMO、SiTag3-MBP、SiTag3-PAS200、SiTag3-XTEN和SiTag3-ArsC促溶标签相连,成功构建了含9种不同促溶性标签的H5HA10重组表达载体,同时构建了1种含有Cherry标签的Spyligase重组表达载体。将这10种重组载体分别转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达和SDS-PAGE分析,筛选出可以显著促进H5HA10重组蛋白表达的融合标签ArsC。通过优化诱导表达条件,在大量诱导表达、纯化后成功获得了高纯度的H5HA10和Spyligase重组蛋白,最终在PCT缓冲体系中, Spyligase促使H5HA10重组蛋白的蛋白聚合,形成了环化单体、三聚体、六聚体以及九聚体。
关键词
Spyligase技术
流感血凝素H5HA10
原核表达
融合标签
多聚体
Keywords
Spyligase technology
Influenza hemagglutinin H5HA10
Prokaryotic expression
Fusion tag
Multimer
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
奶牛乳腺上皮细胞中SCAP和SREBP1蛋白调控SCD基因表达的作用研究
韩立强
孙宇
付彤
廉红霞
高腾云
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
基于Spyligase技术的禽流感血凝素H5HA10多聚体抗原的高效制备
贾宾
陈慧心
韩莹倩
郭玉堃
邵科宇
郭豫杰
《江西农业学报》
CAS
2019
0
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职称材料
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