期刊导航
期刊开放获取
上海教育软件发展有限公..
期刊文献
+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
检索
高级检索
期刊导航
共找到
2
篇文章
<
1
>
每页显示
20
50
100
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
文摘
详细
列表
相关度排序
被引量排序
时效性排序
基于CRISPR/Cas9技术的HCT-8细胞基因编辑系统构建
被引量：
2
1
作者
李娜
王悦欣
+5 位作者
李孝法
王璐阳
梁冠达
李俊强
张龙现
李晓迎
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
2023年第4期632-638,共7页
【目的】构建人回盲肠癌(human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8)细胞系的CRISPR/Cas9基因编辑系统,实现对目的基因的高效编辑。【方法】采用慢病毒感染的方式,将慢病毒载体质粒LentiCas9-Blast与包装质粒pSPAX2和pMD2.G共转染至人胚胎...
【目的】构建人回盲肠癌(human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8)细胞系的CRISPR/Cas9基因编辑系统,实现对目的基因的高效编辑。【方法】采用慢病毒感染的方式,将慢病毒载体质粒LentiCas9-Blast与包装质粒pSPAX2和pMD2.G共转染至人胚胎肾(human embryonic kidney 293T,HEK293T)细胞系获得高滴度的重组慢病毒液,并感染HCT-8细胞系,以未感染组为阴性对照,用杀稻瘟菌素进行抗性筛选,直至阴性对照组全部死亡;采用有限稀释法对阳性细胞进行单克隆筛选,对筛选得到的单克隆细胞系进行扩大培养,并采用PCR及Western Blot试验验证Cas9基因及其蛋白表达情况,而后对阳性单克隆细胞系进行基因编辑效率及细胞系活性验证。【结果】得到能成功表达Cas9蛋白的6株HCT-8-Cas9单克隆细胞系。其中HCT-8-Cas9_2和HCT-8-Cas9_4细胞系蛋白量表达较高;对所筛选单克隆细胞系进行基因编辑效率检测,pXPR_011慢病毒表达报告基因载体系统检测结果表明,HCT-8-Cas9_4单克隆细胞系Cas9基因编辑效率为48.82%,显著高于其他HCT-8-Cas9单克隆细胞系;单克隆细胞系活性检测结果表明,HCT-8-Cas9_2和HCT-8-Cas9_4单克隆细胞系细胞活性与HCT-8细胞系相比均无显著差异。【结论】HCT-8-Cas9_4细胞系能够稳定表达Cas9蛋白,具有良好的编辑效率,可用于后续靶标基因的高效编辑。
展开更多
关键词
基因编辑
慢病毒
人回盲肠癌(HCT-8)细胞
CRISPR/Cas9
基因编辑效率
在线阅读
下载PDF
职称材料
绵羊源十二指肠贾第虫和隐孢子虫的分子鉴定
被引量：
1
2
作者
睢攀博
徐菲菲
+3 位作者
梁冠达
杜海利
郎家抒
李俊强
《河南农业科学》
北大核心
2022年第12期147-152,共6页
为了解河南省安阳市绵羊源贾第虫和隐孢子虫的分子特性,对基于卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法检查获得的16份绵羊源贾第虫和3份隐孢子虫分离株分别进行DNA提取,并基于16S rRNA基因位点和18S rRNA基因位点进行巢式PCR扩增,获得阳...
为了解河南省安阳市绵羊源贾第虫和隐孢子虫的分子特性,对基于卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法检查获得的16份绵羊源贾第虫和3份隐孢子虫分离株分别进行DNA提取,并基于16S rRNA基因位点和18S rRNA基因位点进行巢式PCR扩增,获得阳性扩增产物,再进行测序鉴定和系统发育进化分析。结果显示,PCR成功扩增绵羊源贾第虫和隐孢子虫的特异性基因位点。基于对上述2种肠道原虫特异性基因位点的分子序列分析,将贾第虫鉴定为十二指肠贾第虫集聚体E(93.75%,15/16)和集聚体A(6.25%,1/16);将隐孢子虫鉴定为泛在隐孢子虫(66.67%,2/3)和猪隐孢子虫(33.33%,1/3)。
展开更多
关键词
绵羊
十二指肠贾第虫
隐孢子虫
分子鉴定
安阳市
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
基于CRISPR/Cas9技术的HCT-8细胞基因编辑系统构建
被引量：
2
1
作者
李娜
王悦欣
李孝法
王璐阳
梁冠达
李俊强
张龙现
李晓迎
机构
河南农业大学动物医学院农业农村部禽类产品质量安全控制重点实验室
河南
三高农牧股份有限公司
出处
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
2023年第4期632-638,共7页
基金
NSFC-河南联合基金重点项目(U1904203)
河南省高等学校重点科研项目(22A230003)。
文摘
【目的】构建人回盲肠癌(human ileocecal adenocarcinoma,HCT-8)细胞系的CRISPR/Cas9基因编辑系统,实现对目的基因的高效编辑。【方法】采用慢病毒感染的方式,将慢病毒载体质粒LentiCas9-Blast与包装质粒pSPAX2和pMD2.G共转染至人胚胎肾(human embryonic kidney 293T,HEK293T)细胞系获得高滴度的重组慢病毒液,并感染HCT-8细胞系,以未感染组为阴性对照,用杀稻瘟菌素进行抗性筛选,直至阴性对照组全部死亡;采用有限稀释法对阳性细胞进行单克隆筛选,对筛选得到的单克隆细胞系进行扩大培养,并采用PCR及Western Blot试验验证Cas9基因及其蛋白表达情况,而后对阳性单克隆细胞系进行基因编辑效率及细胞系活性验证。【结果】得到能成功表达Cas9蛋白的6株HCT-8-Cas9单克隆细胞系。其中HCT-8-Cas9_2和HCT-8-Cas9_4细胞系蛋白量表达较高;对所筛选单克隆细胞系进行基因编辑效率检测,pXPR_011慢病毒表达报告基因载体系统检测结果表明,HCT-8-Cas9_4单克隆细胞系Cas9基因编辑效率为48.82%,显著高于其他HCT-8-Cas9单克隆细胞系;单克隆细胞系活性检测结果表明,HCT-8-Cas9_2和HCT-8-Cas9_4单克隆细胞系细胞活性与HCT-8细胞系相比均无显著差异。【结论】HCT-8-Cas9_4细胞系能够稳定表达Cas9蛋白,具有良好的编辑效率,可用于后续靶标基因的高效编辑。
关键词
基因编辑
慢病毒
人回盲肠癌(HCT-8)细胞
CRISPR/Cas9
基因编辑效率
Keywords
gene editing
lentivirus
human colorectal adenocarcinoma(HCT-8)cells
CRISPR/Cas9
gene editing efficiency
分类号
S855.9 [农业科学—临床兽医学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
绵羊源十二指肠贾第虫和隐孢子虫的分子鉴定
被引量：
1
2
作者
睢攀博
徐菲菲
梁冠达
杜海利
郎家抒
李俊强
机构
河南农业大学
动物
医学院
/
农业
农村部
禽类
产品质量
安全控制
重点
实验室
河南
省滑县
动物
卫生监督所
出处
《河南农业科学》
北大核心
2022年第12期147-152,共6页
基金
国家自然科学基金项目(32102689)
河南农业大学青年英才基金项目(30501055)。
文摘
为了解河南省安阳市绵羊源贾第虫和隐孢子虫的分子特性,对基于卢戈氏碘液染色法和饱和蔗糖溶液漂浮法检查获得的16份绵羊源贾第虫和3份隐孢子虫分离株分别进行DNA提取,并基于16S rRNA基因位点和18S rRNA基因位点进行巢式PCR扩增,获得阳性扩增产物,再进行测序鉴定和系统发育进化分析。结果显示,PCR成功扩增绵羊源贾第虫和隐孢子虫的特异性基因位点。基于对上述2种肠道原虫特异性基因位点的分子序列分析,将贾第虫鉴定为十二指肠贾第虫集聚体E(93.75%,15/16)和集聚体A(6.25%,1/16);将隐孢子虫鉴定为泛在隐孢子虫(66.67%,2/3)和猪隐孢子虫(33.33%,1/3)。
关键词
绵羊
十二指肠贾第虫
隐孢子虫
分子鉴定
安阳市
Keywords
Sheep
Giardia duodenalis
Cryptosporidium spp.
Molecular identification
Anyang
分类号
S855.91 [农业科学—临床兽医学]
在线阅读
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于CRISPR/Cas9技术的HCT-8细胞基因编辑系统构建
李娜
王悦欣
李孝法
王璐阳
梁冠达
李俊强
张龙现
李晓迎
《河南农业大学学报》
CAS
CSCD
2023
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
绵羊源十二指肠贾第虫和隐孢子虫的分子鉴定
睢攀博
徐菲菲
梁冠达
杜海利
郎家抒
李俊强
《河南农业科学》
北大核心
2022
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
已选择
0
条
导出题录
引用分析
参考文献
引证文献
统计分析
检索结果
已选文献
上一页
1
下一页
到第
页
确定
用户登录
登录
IP登录
使用帮助
返回顶部
