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鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
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1
作者
米丹阳
段睿
+7 位作者
宋军营
孙向东
张钟允
闫敏
袁永
张振强
张改平
刘文第
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第10期1485-1490,共6页
目的：探索以白细胞为免疫原的鼠抗人白细胞天然蛋白单克隆抗体（monoclonal antibodies,m Abs）制备与克隆筛选鉴定方法,制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法：用健康人外周血白细胞免疫小鼠,利用B淋巴细胞杂交...
目的：探索以白细胞为免疫原的鼠抗人白细胞天然蛋白单克隆抗体（monoclonal antibodies,m Abs）制备与克隆筛选鉴定方法,制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法：用健康人外周血白细胞免疫小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备m Abs,通过免疫细胞化学法对杂交瘤细胞进行非特异性阳性筛选,有限稀释法进行亚克隆,应用免疫沉淀-质谱法进行mAb特异性鉴定,通过Western blot进行细胞株筛选,小鼠体内诱生腹水法制备单抗,亲和层析法纯化,ELISA间接法测定效价及亲和力,Western blot进行特异性鉴定及交叉反应性分析,免疫组化染色人乳腺癌石蜡切片。结果：获得免疫细胞化学检测阳性多克隆细胞35孔,分泌鼠抗人S100A9蛋白单克隆抗体细胞株11株,优选1株制备腹水并纯化鉴定抗体,抗体效价为1∶3.18×10^5,亚类为IgG1,轻链为kappa链,抗体纯度达95%以上,亲和力常数3.54×10^8L/mol,与S100A8的交叉反应率为0.12%,与S100A12和S100A13几乎无交叉反应,组化染色识别人乳腺癌组织中的S100A9蛋白。结论：成功制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,该单抗具有高效价、较高亲和力和高特异性,能为其应用于免疫组化检测S100A9蛋白的表达提供依据。
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关键词
白细胞
S100A9
单克隆抗体
免疫学特性
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职称材料
题名
鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
被引量：
2
1
作者
米丹阳
段睿
宋军营
孙向东
张钟允
闫敏
袁永
张振强
张改平
刘文第
机构
河南中医药大学中医药免疫学实验室/郑州市抗体组学重点实验室
河南
省农业科
学
院动物
免疫
学
重点
实验室
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第10期1485-1490,共6页
基金
2015年度河南省科技创新人才计划(No.154100510019)
河南中医学院创新团队(No.2014XCXTD01)
河南中医学院基本科研业务专项课题(No.2014KYYWF-ZZCX3-06)
文摘
目的：探索以白细胞为免疫原的鼠抗人白细胞天然蛋白单克隆抗体（monoclonal antibodies,m Abs）制备与克隆筛选鉴定方法,制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,并鉴定抗体性质。方法：用健康人外周血白细胞免疫小鼠,利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备m Abs,通过免疫细胞化学法对杂交瘤细胞进行非特异性阳性筛选,有限稀释法进行亚克隆,应用免疫沉淀-质谱法进行mAb特异性鉴定,通过Western blot进行细胞株筛选,小鼠体内诱生腹水法制备单抗,亲和层析法纯化,ELISA间接法测定效价及亲和力,Western blot进行特异性鉴定及交叉反应性分析,免疫组化染色人乳腺癌石蜡切片。结果：获得免疫细胞化学检测阳性多克隆细胞35孔,分泌鼠抗人S100A9蛋白单克隆抗体细胞株11株,优选1株制备腹水并纯化鉴定抗体,抗体效价为1∶3.18×10^5,亚类为IgG1,轻链为kappa链,抗体纯度达95%以上,亲和力常数3.54×10^8L/mol,与S100A8的交叉反应率为0.12%,与S100A12和S100A13几乎无交叉反应,组化染色识别人乳腺癌组织中的S100A9蛋白。结论：成功制备鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体,该单抗具有高效价、较高亲和力和高特异性,能为其应用于免疫组化检测S100A9蛋白的表达提供依据。
关键词
白细胞
S100A9
单克隆抗体
免疫学特性
Keywords
Leukocyte
S100A9
Monoclonal antibody
Immunity characterisation
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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作者
出处
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被引量
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1
鼠抗人S100A9天然蛋白单克隆抗体的制备与鉴定
米丹阳
段睿
宋军营
孙向东
张钟允
闫敏
袁永
张振强
张改平
刘文第
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2016
2
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