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杜氏盐藻核基质附着区的分离及特征性分析 被引量:1
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作者 王天云 袁保梅 +2 位作者 柴玉荣 王建人 薛乐勋 《广西植物》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期145-148,共4页
采用0.5%TritonX 100破碎细胞,15%Percoll分离盐藻细胞核,25mM二碘水杨酸锂(lithiumdi iodosalicylate,LIS)抽提核蛋白,限制酶消化除去结合松弛的DNA,蛋白酶K SDS处理,酚/氯仿抽提,乙醇 沉淀提取核基质附着DNA,限制酶酶切连至pUC1... 采用0.5%TritonX 100破碎细胞,15%Percoll分离盐藻细胞核,25mM二碘水杨酸锂(lithiumdi iodosalicylate,LIS)抽提核蛋白,限制酶消化除去结合松弛的DNA,蛋白酶K SDS处理,酚/氯仿抽提,乙醇 沉淀提取核基质附着DNA,限制酶酶切连至pUC18载体上构建MARs文库。随机挑选6个克隆进行体外结 合实验筛选,筛选出一能与核基质结合的克隆,测序分析结果表明该序列具明显的MAR序列特征。 展开更多
关键词 核基质附着区 杜氏盐藻 分离 特征性 PERCOLL Triton X-100 PUC18 破碎细胞 25mM 蛋白酶K 乙醇沉淀 MARs 体外结合 序列特征 分析结果 DNA 限制酶 细胞核 水杨酸 核蛋白 SDS 抽提 筛选 克隆 载体 测序
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FLT3靶向短发夹状干扰RNA体外转录合成及作用 被引量:1
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作者 卢洁 盛光耀 +6 位作者 邹湘 方营旗 赵晓明 徐学聚 白松婷 许培荣 王建人 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2007年第4期839-844,共6页
FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,在大多数急性髓系白血病(AML)患者中持续激活,与患者预后差密切相关。为探讨3种FLT3靶向短发夹状干扰RNA(shRNA)对急性髓系白血病细胞株THP-1的沉默效应,设计和体外转录合成3个FLT3靶向shRN... FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)是一种酪氨酸激酶受体,在大多数急性髓系白血病(AML)患者中持续激活,与患者预后差密切相关。为探讨3种FLT3靶向短发夹状干扰RNA(shRNA)对急性髓系白血病细胞株THP-1的沉默效应,设计和体外转录合成3个FLT3靶向shRNA(shRNA1、shRNA2、shRNA3),体外转染THP-1细胞;以RT-PCR法检测FLT3mRNA水平表达,用流式细胞术、免疫荧光测定法检测FLT3蛋白的表达。结果显示:shRNA1、shRNA3可显著下调FLT3mRNA的表达,其中shRNA1的抑制作用较强。25nmol/LshRNA1转染48小时对FLT3mRNA的抑制率是(72.95±2.07)%,作用可达72小时。5nmol/L及以上浓度的shRNA1对FLT3mRNA表达有下调作用,作用存在量-效关系。15nmol/LshRNA1的抑制率是(67.53±0.66)%。FLT3蛋白位于细胞膜上,shRNA1对其有较强的抑制作用,转染72小时蛋白抑制率达(79.67±0.66)%。结论:FLT3-shRNA1具有较好的FLT3基因靶向抑制作用,可作为进一步研究该基因作用机制及靶向治疗可能性的工具。 展开更多
关键词 急性髓系白血病 FLT3 FLT3-shRNA RNA干扰 THP-1细胞株
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胃泌素对家兔下食管括约肌及食管跨粘膜电位的影响
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作者 薛乐勋 王建人 +1 位作者 徐霞 王曙炎 《河南医科大学学报》 1992年第2期132-135,共4页
观察了静脉注射(ⅳ)不同剂量的五肽胃泌素(Pentagastrin,G5)对家兔下食管括约肌压力(Lower esophageal sphincter pressure,LESP)及食管跨粘膜电位(Transmucosal potential difference,PD)的影响。结果显示:ⅳGS(10μg/km)可引起LESP迅... 观察了静脉注射(ⅳ)不同剂量的五肽胃泌素(Pentagastrin,G5)对家兔下食管括约肌压力(Lower esophageal sphincter pressure,LESP)及食管跨粘膜电位(Transmucosal potential difference,PD)的影响。结果显示:ⅳGS(10μg/km)可引起LESP迅速升高和LES功能长度(Lower esophageal sphincter length,LESL)延长(P<0.01),10min左右恢复到基础水平。ⅳG5(5μg/kg)即可导致LES部位和食管中下段PD明显下降,但上段食管PD无变化。可见ⅳG5既能显著地影响食管的神经肌肉功能LESP,也能影响食管的粘膜功能PD。此外,大剂量阿托品(1mg/kg)不能完全阻断G5(20μg/kg)对LESP的影响(P<0.05),提示ⅳG5对LES的升压作用主要是它直接作用于LES的结果。 展开更多
关键词 五肽胃泌素 括约肌 阿托品 PD
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杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活和毒性检测
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作者 侯永杰 李杰 +2 位作者 李庆华 王建人 薛乐勋 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第6期835-838,共4页
目的:观察杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a的酵母双杂交诱饵载体表达产物对酵母细胞有无毒害作用并检测其自激活作用。方法:应用PCR方法获得stt3a可溶端的基因片段,将基因片段按正确的方向插入到酵母表达质粒pGBKT7中,经限制性内酶切鉴... 目的:观察杜氏盐藻寡糖基转移酶亚基stt3a的酵母双杂交诱饵载体表达产物对酵母细胞有无毒害作用并检测其自激活作用。方法:应用PCR方法获得stt3a可溶端的基因片段,将基因片段按正确的方向插入到酵母表达质粒pGBKT7中,经限制性内酶切鉴定正确后,用PEG/LiAc法转化到酵母菌株Y187中,并通过表型筛选检测诱饵蛋白有无毒性和自激活作用。结果:成功获得了stt3a可溶端的基因片段,其表达的蛋白对酵母菌株Y187无毒害,报告基因-半乳糖苷酶活性没有被诱导。结论:酵母双杂交GAL4系统可以被用来研究杜氏盐藻中与stt3a相互作用的蛋白。 展开更多
关键词 杜氏盐藻 stt3a 酵母双杂交 鞭毛再生
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针刺足三里对家兔食管粘膜电位及下括约肌影响的实验研究
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作者 薜乐勋 王建人 +1 位作者 徐霞 洪素兰 《河南医科大学学报》 1991年第4期324-327,共4页
用快速牵拉法同时测定家兔下食管括约肌(Lower esophageal sphincter,LES)压力及食管跨粘膜电位(Transmucosal potential difference,PD),观察不同手法针刺足三里对LES和食管PD的影响。结果显示:五种手法针刺足三里对食管PD无直接作用,... 用快速牵拉法同时测定家兔下食管括约肌(Lower esophageal sphincter,LES)压力及食管跨粘膜电位(Transmucosal potential difference,PD),观察不同手法针刺足三里对LES和食管PD的影响。结果显示:五种手法针刺足三里对食管PD无直接作用,但均能非常显著地(P<0.01)增加LES压力及其功能长度,其中以提插加快捻转法兴奋LES作用最强。揭示临床上针刺足三里治疗反流性食管炎时.宜选用这种针刺手法。 展开更多
关键词 针灸 足三里穴 反流性食管炎
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