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TGF-β_1介导的RhoA/ROCK通路在大鼠肺肌成纤维细胞分化中的调节作用 被引量：22
1
作者 马文东 袁媛 +6 位作者 杨奕 徐洪 邓海静 于婉莹 孙月 魏中秋 杨方 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第10期1758-1763,共6页
目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞... 目的:探讨转化生长因子β1(TGF-β1)介导的RhoA/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)通路在调控肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化过程中的作用。方法:胰酶消化法获得原代培养的肺成纤维细胞,进行以下实验:(1)观察TGF-β1诱导肺成纤维细胞不同时间后p-RhoA、ROCK、磷酸化肌球蛋白磷酸酶靶亚基(pMBS)、血清应答因子(SRF)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型和III型胶原蛋白表达变化;(2)将细胞分为对照组、TGF-β1诱导分化组和Y-27632(ROCK通路阻滞剂)干预组,免疫细胞化学染色与Western blotting法分别观察与检测ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白在细胞内的定位分布与表达。结果:(1)经TGF-β1诱导24 h后,大鼠肺成纤维细胞胞体内出现大量平行或交叉排列的α-SMA抗体标记的肌丝。随着TGF-β1诱导刺激时间的延长,p-RhoA、ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达逐渐增高,其中RhoA/ROCK信号(p-RhoA、ROCK、p-MBS)、SRF和α-SMA蛋白分别在诱导后6 h、12 h和24 h达到高峰。I型胶原和III型胶原蛋白表达均在24 h达高峰,分别为诱导前的2.19和3.04倍(P<0.05)。(2)与TGF-β1诱导分化组比较,当给予Y-27632干预后,在相应时点ROCK、p-MBS、SRF、α-SMA、I型和III型胶原蛋白表达均明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:TGF-β1通过ROCK信号转导通路的活化,刺激了大鼠肺成纤维细胞向肌成纤维细胞分化,进而促进了胶原蛋白的合成,可能在(矽)肺纤维化形成过程中发挥着重要作用。 展开更多
关键词 转化生长因子Β Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶 肌成纤维细胞 肺纤维化
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医用多孔钽材料复合大鼠软骨细胞的生长特性及功能变化 被引量：8
2
作者 张岭 李琪佳 +4 位作者 赵季华 薛荣 甘洪全 刘英杰 王志强 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期464-469,共6页
目的评价多孔钽材料复合大鼠软骨细胞的体外生长特性及功能变化。方法选取3周龄SD大鼠,分离关节软骨细胞并进行体外扩增培养,取生长状态良好的第2代细胞,鉴定后以1×106/ml密度接种于多孔钽上进行复合培养。采用倒置相差显微镜、扫... 目的评价多孔钽材料复合大鼠软骨细胞的体外生长特性及功能变化。方法选取3周龄SD大鼠,分离关节软骨细胞并进行体外扩增培养,取生长状态良好的第2代细胞,鉴定后以1×106/ml密度接种于多孔钽上进行复合培养。采用倒置相差显微镜、扫描电镜、透射电镜观察软骨细胞在多孔钽上的形态特点,比色法测定复合培养的软骨细胞中糖胺多糖(GAG)的含量。结果经Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色、甲苯胺蓝染色及番红O染色鉴定所获细胞为软骨细胞。倒置相差显微镜观察可见多孔钽边缘及培养板底部黏附大量软骨细胞;扫描电镜观察可见软骨细胞在多孔钽表面及孔隙内黏附、伸展、增殖,并分泌细胞外基质;透射电镜观察显示软骨细胞内超微结构大小及形态无明显改变;比色法检测显示软骨细胞在多孔钽支架上可持续分泌GAG。结论多孔钽材料与软骨细胞体外共培养显示出良好的生物相容性,适合作为软骨组织工程的支架材料。 展开更多
关键词 多孔钽 生物相容性材料 软骨细胞 组织工程
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矽肺患者肺泡巨噬细胞培养上清对人胚肺成纤维细胞增殖的影响 被引量：2
3
作者 蒋建姝 高路杨 +3 位作者 唐军栋 朱兰 宋旭东 王献华 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期354-357,共4页
目的:探讨二氧化硅(SiO2)刺激的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)培养上清中IL-1β的表达及其协同其它因子对人胚肺成纤维细胞(FB)增殖的作用。方法:收集矽肺患者肺灌洗液中的AM,在体外以SiO2(50μg/ml)和不加血清的DMEM培养3、6、12、18、24... 目的:探讨二氧化硅(SiO2)刺激的矽肺患者肺泡巨噬细胞(AM)培养上清中IL-1β的表达及其协同其它因子对人胚肺成纤维细胞(FB)增殖的作用。方法:收集矽肺患者肺灌洗液中的AM,在体外以SiO2(50μg/ml)和不加血清的DMEM培养3、6、12、18、24、36小时,采用ELISA法检测不同时间点AM上清中IL-1β的表达,并用MTT和3H-TdR法检测AM培养上清作用于FB的细胞增殖情况。结果:经SiO2刺激的矽肺患者AM上清中IL-1β的表达明显上调,与对照组同时间相比,差异具有显著性(P<0.01),IL-1β表达在体外培养12小时达最高峰;AM培养上清各时间点均有促进FB增殖的作用,18小时上清促增殖作用最强,且经SiO2刺激的AM上清促细胞增殖作用更显著(P<0.05,P<0.01)。结论:SiO2再刺激的矽肺患者AM培养上清可以促进人胚肺FB的增殖,其机制之一可能为上调AM中IL-1β的表达进而影响细胞因子网络调控。 展开更多
关键词 二氧化硅 肺泡巨噬细胞 培养上清 成纤维细胞 白细胞介素-1Β
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