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响应面优化超声波法提取黑豆异黄酮的工艺研究 被引量:35
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作者 豆亚静 张晓龙 +2 位作者 常丽新 闫金萍 吴丹 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期259-263,共5页
以产于吉林的黑豆为材料,采用超声波法对黑豆异黄酮的提取工艺进行了研究。在单因素实验结果基础上,选择液料比、提取时间、温度进行三因素三水平的中心组合设计实验,利用Design-expert软件进行响应面分析。超声波法提取黑豆异黄酮的最... 以产于吉林的黑豆为材料,采用超声波法对黑豆异黄酮的提取工艺进行了研究。在单因素实验结果基础上,选择液料比、提取时间、温度进行三因素三水平的中心组合设计实验,利用Design-expert软件进行响应面分析。超声波法提取黑豆异黄酮的最佳工艺参数为:液料比46∶1(mL/g)、提取时间51min、提取温度52℃,异黄酮提取率实测值为1.883%,预测值为1.891%,理论值与预测值相差甚小,可确定利用响应面优化异黄酮提取的工艺参数可靠,并有一定的应用价值。与振荡提取方法相比,超声波提取法具有高效、省时、节能等优点。同时在最佳提取工艺条件下测定了其他四个产地的黑豆异黄酮含量,结果表明,产于吉林的黑豆异黄酮含量最高,产于山西的黑豆异黄酮含量最低。 展开更多
关键词 黑豆 异黄酮 超声波法 响应面实验
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刺五加鲨烯合酶基因家族两成员的表达及其与皂苷含量的关系 被引量:16
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作者 邢朝斌 龙月红 +3 位作者 李非非 周秘 修乐山 劳凤云 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第3期1252-1255,共4页
为了探明刺五加鲨烯合酶(SS)基因家族2成员对皂苷含量的作用机制,以actin为内参基因,利用real time PCR技术,分析刺五加不同生长发育时期、不同器官及茉莉酸甲酯(MeJA)处理对SS1、SS2基因表达及皂苷含量的影响。结果表明:刺五加SS基因... 为了探明刺五加鲨烯合酶(SS)基因家族2成员对皂苷含量的作用机制,以actin为内参基因,利用real time PCR技术,分析刺五加不同生长发育时期、不同器官及茉莉酸甲酯(MeJA)处理对SS1、SS2基因表达及皂苷含量的影响。结果表明:刺五加SS基因家族的SS1和SS2在整个生长期和各器官中均有表达,且表达量差异显著(P<0.05),其中,在萌芽期两者的表达量差异最大。SS1在叶片、叶柄和根器官中的表达量显著高于SS2的表达量(P<0.05)。MeJA处理可显著提高SS1和SS2基因的表达量。刺五加SS1的表达量与皂苷含量间的相关系数低,未达显著水平。SS2的表达量与皂苷含量呈显著的正相关关系(P<0.01)。SS2表达量的高低决定了皂苷含量的高低,是刺五加中三萜皂苷生物合成中的关键酶。 展开更多
关键词 刺五加 表达 鲨烯合酶基因 REAL time PCR 皂苷
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刺五加甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶基因的克隆与表达分析 被引量:10
3
作者 邢朝斌 龙月红 +2 位作者 何闪 周秘 修乐山 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1950-1956,共7页
利用RACE技术克隆刺五加甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶(mevalonate diphosphate decarboxylase,MDD)基因的全长cDNA序列,运用生物信息学方法对该基因进行分析,并通过RT-PCR法检测MDD在刺五加不同生长发育时期和不同器官中的表达情况。结果表明:... 利用RACE技术克隆刺五加甲羟戊酸焦磷酸脱羧酶(mevalonate diphosphate decarboxylase,MDD)基因的全长cDNA序列,运用生物信息学方法对该基因进行分析,并通过RT-PCR法检测MDD在刺五加不同生长发育时期和不同器官中的表达情况。结果表明:(1)刺五加MDD基因cDNA序列全长1 769bp(GenBank登录号为JQ905594),开放阅读框全长1 263bp,编码420个氨基酸残基,包含GHMP激酶超家族的特异性识别序列;刺五加MDD蛋白的二级结构中含有161个α螺旋,占38.33%;68个延伸链,占16.19%;19个β折叠,占4.52%;172个无规则卷曲,占40.95%;刺五加MDD蛋白无跨膜区域,定位于膜外。(2)刺五加MDD基因在不同生长发育时期和器官中均有表达,但表达量具有显著差异(P<0.05)。在整个生长期中,MDD的表达呈现高-低-高-低的变化趋势,第一个表达高峰出现在萌芽期至叶片完全展开时,第二个高峰出现在果实体积快速增长期,最高表达量(叶片完全展开期)为最低表达量(叶片衰老期)的4.51倍;不同器官中,幼茎的表达量最高,为最低表达量(叶片)的7.22倍,但叶片、叶柄和根中的表达量差异不显著。研究结果为阐明刺五加皂苷的生物合成及对其进行表达调控奠定了基础。 展开更多
关键词 刺五加 MDD基因 克隆 RT-PCR
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双水相萃取法分离纯化狗枣猕猴桃叶总黄酮 被引量:14
4
作者 王倩 贾长虹 +1 位作者 常丽新 唐红梅 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第16期167-171,共5页
采用聚乙二醇-硫酸钠双水相体系分离纯化狗枣猕猴桃叶黄酮,确定其双水相体系组成24%PEG400-15%Na2SO4,并通过单因素试验和正交试验探讨黄酮粗提液质量浓度、KCl添加量、pH值和温度对萃取效果的影响。结果表明:黄酮粗提液质量浓度和pH值... 采用聚乙二醇-硫酸钠双水相体系分离纯化狗枣猕猴桃叶黄酮,确定其双水相体系组成24%PEG400-15%Na2SO4,并通过单因素试验和正交试验探讨黄酮粗提液质量浓度、KCl添加量、pH值和温度对萃取效果的影响。结果表明:黄酮粗提液质量浓度和pH值对黄酮萃取效果影响最大,其次为KCl添加量,温度的影响较小;最佳萃取条件为粗提液质量浓度C0、KCl添加量2%、pH9、25℃。在此条件下,狗枣猕猴桃叶黄酮主要分布在上相,分配系数为24.31,萃取率达到96.90%。此方法操作简单方便、成本低,是黄酮类化合物分离纯化的一种有效方法。 展开更多
关键词 双水相体系 分离纯化 狗枣猕猴桃叶 黄酮
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猪肉源大肠杆菌对抗生素及消毒剂的耐药性 被引量:14
5
作者 何雪梅 郭莉娟 +5 位作者 吴国艳 程琳 李蓓 罗燕 邹立扣 卿玲杉 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2014年第7期132-137,共6页
从四川省各市县收集猪肉样品130份,选择性培养基分离大肠杆菌后VITEK进行鉴定,采用K-B法药敏实验测试大肠杆菌对10种药敏纸片的耐药性.琼脂稀释法测定大肠杆菌对3种季铵盐消毒剂的MIC值,PCR扩增10种季铵盐类消毒剂耐药基因.结果表明:13... 从四川省各市县收集猪肉样品130份,选择性培养基分离大肠杆菌后VITEK进行鉴定,采用K-B法药敏实验测试大肠杆菌对10种药敏纸片的耐药性.琼脂稀释法测定大肠杆菌对3种季铵盐消毒剂的MIC值,PCR扩增10种季铵盐类消毒剂耐药基因.结果表明:130份猪肉样品中分离大肠杆菌96株,分离率为73.85%,其中73株对抗生素产生耐药性,耐药率分别为:TET (64.58%)、AMP (37.50%)、S(32.29%)、K(21.88%)、KF (20.83%)、CIP (18.75%)、CN (9.38%)、SAM (6.25%)、CAZ (2.08%)、CRO (2.08%),共产生了28种耐药谱,TET是最主要的谱型;96株大肠杆菌对季铵盐消毒剂BC、DDAC、CTAB的MIC分别为:16~64 μg/mL、8~32 μg/mL、64~256 μg/mL; QACs耐药基因检出率分别为ydgE/F (81.25%)、mdfA (50%)、sugE (c) (45.83%)、emrE (36.46%)、qacE△1 (19.79%)、qacF (17.71%)、qacE (14.58%)、sugE(p)(3.13%),qacG-未检出.共检出42种消毒剂耐药基因组合(1.04%~12.50%).sugE (c)、qacF基因与氨基糖苷类及AMP耐药相关,qacE△1基因与AMP耐药相关.四川省肉源大肠杆菌污染情况较严重,菌株对抗生素的耐药率及多重耐药相对较低,对季铵盐类消毒剂MIC较高,消毒剂耐药基因检出率较高,应引起足够重视,加强对其检测. 展开更多
关键词 猪肉 大肠杆菌 耐药 抗生素 消毒剂
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响应面优化微波法提取山菠菜多糖的工艺及不同采摘期多糖含量的测定 被引量:9
6
作者 沈潘潘 常丽新 +2 位作者 张会宜 王华磊 贾长虹 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2012年第24期334-338,共5页
为优化微波法提取山菠菜多糖的工艺参数,在单因素实验基础上,选择粒度、液料比、微波时间、pH进行四因素三水平的中心组合设计实验,利用Design-Expert软件进行响应面分析,得出微波法提取山菠菜多糖的最佳工艺条件为:粒度100目、液料比28... 为优化微波法提取山菠菜多糖的工艺参数,在单因素实验基础上,选择粒度、液料比、微波时间、pH进行四因素三水平的中心组合设计实验,利用Design-Expert软件进行响应面分析,得出微波法提取山菠菜多糖的最佳工艺条件为:粒度100目、液料比28∶1(mL/g)、微波时间4.5min、pH为4.6,多糖提取率实测值为3.25%,预测值为3.27%,实测值与预测值相差甚小,相对误差为1.23%,可确定利用响应面优化微波法提取多糖的工艺参数可靠,有一定的应用价值。在最佳提取工艺条件下,对不同采摘期的山菠菜多糖进行了提取测定,结果表明,不同采摘期多糖提取率差异较小。 展开更多
关键词 山菠菜 多糖 提取 响应面
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刺五加HMGR基因的克隆与表达分析 被引量:7
7
作者 邢朝斌 吴鹏 +2 位作者 龙月红 何闪 修乐山 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期1258-1262,共5页
根据已报道的人参HMGR(3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶)基因cDNA序列设计引物,利用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加HMGR基因的全长cDNA序列。运用生物信息学方法对该基因进行分析。通过RT-PCR法... 根据已报道的人参HMGR(3-羟基-3-甲基戊二酰CoA还原酶)基因cDNA序列设计引物,利用cDNA末端快速扩增(Rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加HMGR基因的全长cDNA序列。运用生物信息学方法对该基因进行分析。通过RT-PCR法检测HMGR在刺五加不同生长发育时期和不同器官中的表达情况。结果克隆到长度为2 217 bp的刺五加HMGR基因cDNA序列,开放阅读框全长1 713 bp,编码570个氨基酸残基,包含HMGR家族的特异性识别序列。HMGR蛋白存在2个跨膜区域。RT-PCR结果显示,刺五加HMGR基因在各生长发育时期和器官中均有表达,但表达量具有显著差异,其中萌芽期的表达量最高,盛花期最低;各器官中,幼茎中表达量最高,是根中的1.58倍。 展开更多
关键词 刺五加 HMGR基因 克隆 RT-PCR 表达
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响应面优化超声-碱解法提取玉米芯中可溶性膳食纤维的工艺 被引量:11
8
作者 张晓龙 田亚红 +4 位作者 常丽新 唐红梅 丁存宝 卿玲杉 贾长虹 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2014年第12期262-267,共6页
以碱液(NaOH)为提取剂,采用超声波法从玉米芯中提取可溶性膳食纤维,在单因素实验基础上,利用BoxBehnken中心组合设计、应用Design-Expert软件,通过响应面分析,优化了最佳工艺条件。结果表明,液料比对玉米芯可溶性膳食纤维的提取率影响最... 以碱液(NaOH)为提取剂,采用超声波法从玉米芯中提取可溶性膳食纤维,在单因素实验基础上,利用BoxBehnken中心组合设计、应用Design-Expert软件,通过响应面分析,优化了最佳工艺条件。结果表明,液料比对玉米芯可溶性膳食纤维的提取率影响最大,其次为碱浓度,而超声温度和时间的影响较小。最佳提取工艺条件为:碱浓度0.88%,液料比37∶1(mL/g),提取温度41℃,提取时间20.30min,在此条件下提取率的理论值为23.11%,实际测定值为23.21%。 展开更多
关键词 玉米芯 可溶性膳食纤维 超声波 提取
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拟南芥和水稻CesA基因家族的生物信息学分析 被引量:10
9
作者 王振怡 王金朋 +2 位作者 潘玉欣 张家琦 王希胤 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2015年第6期13-17,共5页
以拟南芥和水稻21个纤维素合成酶基因( CesA)为研究对象,对其基因结构、保守结构域、蛋白质跨膜结构、亚细胞定位、基因表达等进行综合分析。结果显示,CesA基因长度在3.5~6.5 kb,有7~13个内含子( OsCesA10除外)。 CesA基因编码的蛋... 以拟南芥和水稻21个纤维素合成酶基因( CesA)为研究对象,对其基因结构、保守结构域、蛋白质跨膜结构、亚细胞定位、基因表达等进行综合分析。结果显示,CesA基因长度在3.5~6.5 kb,有7~13个内含子( OsCesA10除外)。 CesA基因编码的蛋白质保守性较强,含有该基因家族的保守结构域Ring finger( OsCesA10、OsCesA11除外)和Cellulose synthase。水稻和拟南芥的CesA蛋白跨膜螺旋数量为6个或8个( OsCesA10除外)。蛋白质亚细胞定位结果表明,21条CesA蛋白全部定位在质膜上。大部分AtCesA基因在植株的幼根、幼叶和愈伤组织中均有表达,而大部分OsCesA基因仅在幼根或幼叶中表达。 展开更多
关键词 纤维素合成酶基因 拟南芥 水稻 生物信息学 基因表达
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蓝氏贾第鞭毛虫α-4贾第素的原核表达及纯化 被引量:10
10
作者 王洋 余源 +5 位作者 王卫亮 陈阳 慈雅丽 田喜凤 郑佳 杨志宏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期465-469,共5页
目的原核表达并纯化蓝氏贾第鞭毛虫的α-4贾第素蛋白。方法经RT-PCR获得α-4贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-4,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS... 目的原核表达并纯化蓝氏贾第鞭毛虫的α-4贾第素蛋白。方法经RT-PCR获得α-4贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-4,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测,并用Ni-NTA亲和层析柱纯化融合蛋白。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-4,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,目的蛋白以包涵体形式存在;SDS-PAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约34 kD的位置出现目的蛋白条带,与理论值相符;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-4贾第素融合蛋白。结论成功克隆、表达并纯化了α-4贾第素蛋白,为α-4贾第素的细胞定位及功能研究提供了必要条件。 展开更多
关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 α-4贾第素 原核表达
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刺五加鲨烯合酶基因的表达及其对皂苷含量的影响 被引量:15
11
作者 邢朝斌 龙月红 +2 位作者 劳凤云 庄鹏宇 修乐山 《经济林研究》 北大核心 2013年第1期25-29,共5页
为了了解刺五加鲨烯合酶基因(squalene synthase,SS)的表达特点及其对刺五加中皂苷含量的影响情况,以GAPDH基因为内参照基因,采用实时定量PCR技术,分析了SS基因在刺五加不同生长发育时期不同器官中的表达量及茉莉酸甲酯对其表达的影响情... 为了了解刺五加鲨烯合酶基因(squalene synthase,SS)的表达特点及其对刺五加中皂苷含量的影响情况,以GAPDH基因为内参照基因,采用实时定量PCR技术,分析了SS基因在刺五加不同生长发育时期不同器官中的表达量及茉莉酸甲酯对其表达的影响情况;还利用SPSS 17.0软件分析了SS基因的表达量与刺五加中皂苷总含量的相关性。结果表明,在刺五加的整个生长期中,SS基因的表达量呈现出"低—高—低—高—低"的变化趋势:萌芽期(4月26日)该基因的表达量最低,而盛花期(6月26日)该基因的表达量最高,为萌芽期的3.11倍;SS基因在刺五加根中的表达量显著高于茎、叶和叶柄中的表达量(P<0.05),其在茎中的表达量最低,仅为根中表达量的51.88%。茉莉酸甲酯可提高SS基因的表达量,但其与对照组的差异未达到显著水平。刺五加中的皂苷总含量与SS基因的表达量间呈现出同升同降的变化趋势,存在极显著的正相关关系(P<0.01)。文中初步判定,鲨烯合酶是刺五加皂苷生物合成的关键酶。 展开更多
关键词 刺五加 鲨烯合酶基因 表达 皂苷 实时定量PCR
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苯酚降解红球菌的分离鉴定及降解特性研究 被引量:7
12
作者 刘爱华 王茜 +3 位作者 袁丽杰 黄园勇 周光明 尹国通 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1-5,共5页
采用富集培养的方法,从唐山污水处理厂附近的植物根际土中分离得到1株高效苯酚降解菌11-111。该菌株为革兰氏阳性菌,可以在以苯酚为唯一碳源和能源的无机盐培养基上生长,能够耐受最高浓度为2 000 mg/L的苯酚。对该菌株的降解性能研究表... 采用富集培养的方法,从唐山污水处理厂附近的植物根际土中分离得到1株高效苯酚降解菌11-111。该菌株为革兰氏阳性菌,可以在以苯酚为唯一碳源和能源的无机盐培养基上生长,能够耐受最高浓度为2 000 mg/L的苯酚。对该菌株的降解性能研究表明,在温度24~32℃,pH值6.5~8.5,装液量≤20 mL(100 mL摇瓶)范围内,摇床转速为160 r/min,菌株对初始浓度500~1 500 mg/L的苯酚均能有效降解。根据该菌株的形态、生理生化特性和16S rRNA基因序列同源性分析结果,鉴定为红球菌属(Rhodococcus sp.)菌株。该菌株具有较强的环境适应能力和苯酚降解能力,有较高的研究价值及应用前景。 展开更多
关键词 苯酚 生物降解 红球菌 分离 鉴定
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聚合酶链式反应技术检测化妆品中的铜绿假单胞菌 被引量:8
13
作者 张昕悦 张秀军 +2 位作者 何聪芬 李萌 高路 《日用化学工业》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期267-270,共4页
利用聚合酶链式反应(PCR)技术建立了一种快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。根据已报道的铜绿假单胞菌特异性基因ETA设计引物,确定引物的特异性和灵敏度;对染菌化妆品样品进行增菌检测。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示,仅在含有... 利用聚合酶链式反应(PCR)技术建立了一种快速检测化妆品中铜绿假单胞菌的方法。根据已报道的铜绿假单胞菌特异性基因ETA设计引物,确定引物的特异性和灵敏度;对染菌化妆品样品进行增菌检测。琼脂糖凝胶电泳检测PCR产物结果显示,仅在含有铜绿假单胞菌基因组的样品中得到条带;对染菌样品的扩增结果显示,可以在原样品的活菌浓度为6 cfu.mL-1时通过增菌12 h后检出。 展开更多
关键词 化妆品 聚合酶链式反应 铜绿假单胞菌 快速检测
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金黄色葡萄球菌快速检测技术的研究进展 被引量:14
14
作者 高路 何聪芬 +1 位作者 李萌 张昕悦 《食品科学技术学报》 CAS 2014年第2期51-55,71,共6页
金黄色葡萄球菌是食品、医院内感染以及化妆品领域重要致病菌之一,建立和发展快速检测方法对于预防和控制该菌引起的疾病具有重要意义.对金黄色葡萄球菌的生物学特性、流行病学特征进行了简单介绍,并重点综述了近些年建立的常用金黄色... 金黄色葡萄球菌是食品、医院内感染以及化妆品领域重要致病菌之一,建立和发展快速检测方法对于预防和控制该菌引起的疾病具有重要意义.对金黄色葡萄球菌的生物学特性、流行病学特征进行了简单介绍,并重点综述了近些年建立的常用金黄色葡萄球菌快速检测方法,分析比较了各检测方法的优缺点. 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 快速检测方法 食品
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植物根际放线菌分离方法初探及根皮苷降解活性分析 被引量:8
15
作者 黄园勇 周光明 +4 位作者 尹国通 巩云霏 张卫卫 刘爱华 袁丽杰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期54-58,共5页
【目的】研究不同培养基及不同土样处理方法对植物根际放线菌分离效果的影响,并从中挖掘具有开发潜力的高活性根皮苷降解放线菌株,为苹果连作障碍机制研究及微生物修复提供理论和实践指导。【方法】从吉林、河北、山东、陕西、甘肃、河... 【目的】研究不同培养基及不同土样处理方法对植物根际放线菌分离效果的影响,并从中挖掘具有开发潜力的高活性根皮苷降解放线菌株,为苹果连作障碍机制研究及微生物修复提供理论和实践指导。【方法】从吉林、河北、山东、陕西、甘肃、河南、湖北、四川、重庆、上海、江西、安徽、浙江等13个省(市)采集植物根际土样40份,自然风干处理后分别经10mmol/L的MOPS溶液及CaCO3预处理,用涂布平板法在7种不同的培养基中进行放线菌的分离培养。将分离获得的菌株点种于根皮苷筛选培养基进行活性检测。【结果】在7种培养基B、MSC、MG、MT、Chi、HSG、HV中分别分离获得100、78、108、64、79、113和88株放线菌。土样用MOPS溶液处理后所分离得到的放线菌总数明显高于用CaCO3预处理所得。分离所得630株菌株中有29株对根皮苷有降解活性。对其中41株高活性菌株及形态特殊菌株进行16SrRNA基因测序分析,发现分属于14个不同的放线菌属。【结论】7种分离培养基中HSG培养基的分离效果最好,MG培养基次之,MT培养基最差。土样处理中用MOPS溶液处理的方法优于用CaCO3预处理。根际放线菌株中有一定数量具有降解根皮苷能力的菌株。根际放线菌资源具有丰富的生物多样性。 展开更多
关键词 植物根际 放线菌 分离 根皮苷 降解
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牛磺酸对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α表达的影响及其凋亡抑制作用 被引量:6
16
作者 陈静 李明 +1 位作者 李超 赵杰 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期1211-1214,1315,共5页
目的:探讨牛磺酸对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞(AM)肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达和对细胞凋亡的影响及其作用机制,为尘肺的临床治疗提供依据。方法:24只大鼠随机分为对照组、模型组和牛磺酸组,每组8只。收集各组大鼠肺泡灌洗液(BALF),分离A... 目的:探讨牛磺酸对染矽尘大鼠肺泡巨噬细胞(AM)肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达和对细胞凋亡的影响及其作用机制,为尘肺的临床治疗提供依据。方法:24只大鼠随机分为对照组、模型组和牛磺酸组,每组8只。收集各组大鼠肺泡灌洗液(BALF),分离AM。应用ELISA检测灌洗液中TNF-α水平;采用TUNEL法检测各组大鼠AM凋亡情况;采用琼脂糖凝胶电泳检测DNA断裂情况。结果:对照组、模型组和牛磺酸组大鼠肺泡灌洗液中TNF-α水平分别为(215.8±11.7)、(528.2±23.3)和(364.3±21.4)ng·L-1,与模型组比较,牛磺酸组矽尘大鼠肺BALF中TNF-α水平明显降低(P<0.05)。牛磺酸组AM凋亡指数为(9.38±1.64)%,显著高于对照组[(5.01±1.17)%](P<0.01);牛磺酸组与模型组AM凋亡指数[(14.03±0.74)%]比较显著降低(P<0.05)。模型组大鼠AM呈现细胞凋亡的特征性DNA梯状带,对照组和牛磺酸组AM未见特征性DNA梯状带。结论:牛磺酸通过下调TNF-α的表达,抑制二氧化硅引起的大鼠AM的凋亡。 展开更多
关键词 牛磺酸 矽肺 肺泡巨噬细胞 细胞凋亡 肿瘤坏死因子α
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刺五加鲨烯合酶基因cDNA的克隆与序列分析 被引量:7
17
作者 龙月红 邢朝斌 +4 位作者 王明艳 吴鹏 陈龙 梁能松 何闪 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期112-116,共5页
采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,逆转录为cDNA,根据已报道的人参鲨烯合酶基因(squalene synthasegene,SS)cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加SS基因的cDNA序列。克隆得到长度为1258 bp的刺五加SS基因cDNA序列,开放阅读框... 采用改良的异硫氰酸胍法提取刺五加总RNA,逆转录为cDNA,根据已报道的人参鲨烯合酶基因(squalene synthasegene,SS)cDNA序列设计引物,利用RT-PCR法克隆刺五加SS基因的cDNA序列。克隆得到长度为1258 bp的刺五加SS基因cDNA序列,开放阅读框全长1248 bp,编码415个氨基酸残基,GenBank登录号为HQ456918,与人参的SS1、SS2和SS3氨基酸序列一致性分别为91.73%、97.59%和96.63%。首次分离并报道了刺五加SS基因cDNA序列,为刺五加苷生物合成中关键酶的表达分析及调控机理研究提供参考。 展开更多
关键词 刺五加 鲨烯合酶基因 克隆 RT-PCR
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回流法提取山楂叶悬钩子叶片中黄酮类化合物的工艺研究 被引量:8
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作者 唐红梅 常丽新 +2 位作者 丁存宝 张树华 贾长虹 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第32期19772-19774,共3页
[目的]采用加热回流法提取山楂叶悬钩子叶片中黄酮类化合物,筛选最佳提取工艺。[方法]以乙醇作为提取剂,研究了在不同乙醇浓度、料液比、回流温度和回流时间等单因素影响下的黄酮类化合物提取得率,并在单因素试验结果的基础上设计正交试... [目的]采用加热回流法提取山楂叶悬钩子叶片中黄酮类化合物,筛选最佳提取工艺。[方法]以乙醇作为提取剂,研究了在不同乙醇浓度、料液比、回流温度和回流时间等单因素影响下的黄酮类化合物提取得率,并在单因素试验结果的基础上设计正交试验,筛选最佳工艺条件。[结果]影响黄酮类化合物得率的单因素顺序为料液比>乙醇浓度>回流温度>回流时间。加热回流法提取山楂叶悬钩子叶片中黄酮类化合物的最佳工艺条件为乙醇浓度70%、料液比1∶20(g/ml)、回流温度85℃,回流时间1.5 h,在此条件下黄酮类化合物的得率为9.51%。[结论]加热回流法提取山楂叶悬钩子叶片中黄酮类化合物得率较高,是一种简单可行的提取工艺。 展开更多
关键词 山楂叶悬钩子(Rubus crataegifolius) 黄酮类化合物 回流法
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刺五加P450基因时空表达差异及与皂苷含量的相关性分析 被引量:8
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作者 吴鹏 谷俊涛 +1 位作者 修乐山 邢朝斌 《河北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期29-33,共5页
为探明刺五加P450基因的表达特点及其与刺五加总皂苷含量的相关性,利用实时定量PCR技术分析了刺五加P450基因在不同产地、不同器官、不同发育时期以及茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)处理后的表达规律,及其与刺五加总皂苷含量的相关... 为探明刺五加P450基因的表达特点及其与刺五加总皂苷含量的相关性,利用实时定量PCR技术分析了刺五加P450基因在不同产地、不同器官、不同发育时期以及茉莉酸甲酯(Methyl jasmonate,MeJA)处理后的表达规律,及其与刺五加总皂苷含量的相关性。结果表明:刺五加的P450基因在各器官均有表达,但表达量差异极显著(P<0.01)。刺五加的P450基因在盛花期表达量最高,果实快速生长期最低。MeJA处理可显著影响P450基因的表达量(P<0.05)。P450基因的表达量与总皂苷含量间存在极显著的正相关关系(P<0.01),P450基因的表达量决定了刺五加总皂苷的含量。 展开更多
关键词 刺五加 P450基因 表达 皂苷
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蓝氏贾第鞭毛虫α-7.1、α-11贾第素的原核表达及抗原活性鉴定 被引量:8
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作者 王洋 杨志宏 +6 位作者 王沂 曹蕾 余源 陈阳 王卫亮 慈雅丽 田喜凤 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第5期474-478,共5页
目的原核表达蓝氏贾第鞭毛虫的α-7.1、α-11贾第素蛋白。方法经RT-PCR获得α-7.1、α-11贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-7.1及pET-28a(+)-α-11,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。I... 目的原核表达蓝氏贾第鞭毛虫的α-7.1、α-11贾第素蛋白。方法经RT-PCR获得α-7.1、α-11贾第素基因片段,经双酶切连入原核表达载体pET-28a(+),构建成为重组表达载体pET-28a(+)-α-7.1及pET-28a(+)-α-11,并转化大肠杆菌Rosetta(DE3)。IPTG诱导后,收集菌体,裂解后进行SDS-PAGE及Western blot检测。结果成功构建了原核表达载体pET-28a(+)-α-7.1和pET-28a(+)-α-11,经IPTG诱导后,在大肠杆菌中高效表达,SDS-PAGE及Western blot分析显示,在相对分子量约43kD和35kD的位置分别出现目的蛋白条带,与理论值相符;通过相应α-7.1、α-11贾第素抗血清的Westernblot证实两种贾第素重组蛋白的抗原活性良好;经Ni-NTA亲和层析柱纯化获得了高纯度的重组的α-7.1、α-11贾第素融合蛋白。结论成功地克隆、表达并纯化了具有良好抗原活性的α-7.1、α-11贾第素蛋白。 展开更多
关键词 蓝氏贾第鞭毛虫 α-7.1贾第素 α-11贾第素 原核表达
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