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色氨酸羟化酶2理性设计提高大肠埃希菌5-羟基色氨酸产量
1
作者
李春辉
杨志彬
+4 位作者
崔金旺
郝晋博
田俊波
胡江林
吕志堂
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期23-30,共8页
色氨酸羟化酶(TPH)可催化色氨酸羟化为5-羟基色氨酸(5-HTP),是5-HTP生物合成过程中的关键酶。为了提高大肠埃希菌细胞工厂合成5-HTP的效率,通过酶的理性设计和定点突变技术构建了人色氨酸羟化酶2(TPH2)的系列突变体,并在高产L-色氨酸且...
色氨酸羟化酶(TPH)可催化色氨酸羟化为5-羟基色氨酸(5-HTP),是5-HTP生物合成过程中的关键酶。为了提高大肠埃希菌细胞工厂合成5-HTP的效率,通过酶的理性设计和定点突变技术构建了人色氨酸羟化酶2(TPH2)的系列突变体,并在高产L-色氨酸且含有TPH辅酶四氢生物蝶呤(BH_(4))合成与再生模块的大肠埃希菌中表达。发现适当降低酶和色氨酸、酶和BH_(4)间结合的氢键数目有助于提高5-HTP产量;酶和底物色氨酸结合情况不变,辅酶BH_(4)与酶间氢键数目越多,5-HTP产量越低。5-HTP产量最高的细胞工厂是由突变酶V195A/V197I构建的,5-HTP产量较野生酶构建的细胞工厂产量提高54%,1 L补料摇床发酵48 h,5-HTP产量达16.17 g/L。理性设计是提高TPH2酶活,突破5-HTP合成限速步骤的有效途径,TPH2和底物色氨酸、辅酶BH_(4)间氢键连接太多或太少都不利于其催化活性的发挥。
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关键词
色氨酸羟化酶2
理性设计
定点突变
5-羟基色氨酸
细胞工厂
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职称材料
陶瓷超滤膜在5-羟基-L-色氨酸发酵产物提取中的应用
2
作者
张怡君
田俊波
+3 位作者
杨志彬
郝晋博
胡江林
吕志堂
《河北大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024年第1期77-83,共7页
为提高5-羟基-L-色氨酸(5-hydroxy-L-tryptophan,5-HTP)提取分离效率,降低能耗和污染排放,选择陶瓷超滤膜应用于从发酵液中提取5-HTP的工艺,对陶瓷超滤膜的过滤条件进行优化.首先优选出适合的膜孔径为10 nm,进一步优化得到陶瓷超滤膜分...
为提高5-羟基-L-色氨酸(5-hydroxy-L-tryptophan,5-HTP)提取分离效率,降低能耗和污染排放,选择陶瓷超滤膜应用于从发酵液中提取5-HTP的工艺,对陶瓷超滤膜的过滤条件进行优化.首先优选出适合的膜孔径为10 nm,进一步优化得到陶瓷超滤膜分离提取5-HTP的3个最优工艺参数:发酵液pH值3.5,跨膜压差0.75 MPa,料液过膜温度35℃.在此工艺条件下,5-HTP的透过率在92%以上,对游离蛋白质截留率达90%以上,满足进一步浓缩、结晶制备5-HTP的要求,达到了优化预期效果,为陶瓷超滤膜应用于从发酵液中工业化提取5-HTP提供了可靠依据.
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关键词
陶瓷超滤膜
5-羟基-L-色氨酸
过滤条件
透过率
截留率
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职称材料
题名
色氨酸羟化酶2理性设计提高大肠埃希菌5-羟基色氨酸产量
1
作者
李春辉
杨志彬
崔金旺
郝晋博
田俊波
胡江林
吕志堂
机构
河北
大学生命科学学院
河北
省微
生物
多样性研究与应用实验室
河北维达康生物科技有限公司
保定保利瑞合
生物科技
有限公司
出处
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第4期23-30,共8页
基金
河北省重点研发计划项目(22372403D)。
文摘
色氨酸羟化酶(TPH)可催化色氨酸羟化为5-羟基色氨酸(5-HTP),是5-HTP生物合成过程中的关键酶。为了提高大肠埃希菌细胞工厂合成5-HTP的效率,通过酶的理性设计和定点突变技术构建了人色氨酸羟化酶2(TPH2)的系列突变体,并在高产L-色氨酸且含有TPH辅酶四氢生物蝶呤(BH_(4))合成与再生模块的大肠埃希菌中表达。发现适当降低酶和色氨酸、酶和BH_(4)间结合的氢键数目有助于提高5-HTP产量;酶和底物色氨酸结合情况不变,辅酶BH_(4)与酶间氢键数目越多,5-HTP产量越低。5-HTP产量最高的细胞工厂是由突变酶V195A/V197I构建的,5-HTP产量较野生酶构建的细胞工厂产量提高54%,1 L补料摇床发酵48 h,5-HTP产量达16.17 g/L。理性设计是提高TPH2酶活,突破5-HTP合成限速步骤的有效途径,TPH2和底物色氨酸、辅酶BH_(4)间氢键连接太多或太少都不利于其催化活性的发挥。
关键词
色氨酸羟化酶2
理性设计
定点突变
5-羟基色氨酸
细胞工厂
Keywords
tryptophan hydroxylase 2
rational design
site-directed mutagenesis
5-HTP(5-hydroxytryptophan)
cell factory
分类号
Q936 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
陶瓷超滤膜在5-羟基-L-色氨酸发酵产物提取中的应用
2
作者
张怡君
田俊波
杨志彬
郝晋博
胡江林
吕志堂
机构
河北
大学生命科学学院
河北维达康生物科技有限公司
技术研发中心
保定保利瑞合
生物科技
有限公司
技术研发中心
出处
《河北大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024年第1期77-83,共7页
基金
河北省重点研发计划项目(22372403D)。
文摘
为提高5-羟基-L-色氨酸(5-hydroxy-L-tryptophan,5-HTP)提取分离效率,降低能耗和污染排放,选择陶瓷超滤膜应用于从发酵液中提取5-HTP的工艺,对陶瓷超滤膜的过滤条件进行优化.首先优选出适合的膜孔径为10 nm,进一步优化得到陶瓷超滤膜分离提取5-HTP的3个最优工艺参数:发酵液pH值3.5,跨膜压差0.75 MPa,料液过膜温度35℃.在此工艺条件下,5-HTP的透过率在92%以上,对游离蛋白质截留率达90%以上,满足进一步浓缩、结晶制备5-HTP的要求,达到了优化预期效果,为陶瓷超滤膜应用于从发酵液中工业化提取5-HTP提供了可靠依据.
关键词
陶瓷超滤膜
5-羟基-L-色氨酸
过滤条件
透过率
截留率
Keywords
ceramic ultrafiltration membrane
5-hydroxy-L-tryptophan
filtration condition
permeate ratio
rejection ratio
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
色氨酸羟化酶2理性设计提高大肠埃希菌5-羟基色氨酸产量
李春辉
杨志彬
崔金旺
郝晋博
田俊波
胡江林
吕志堂
《微生物学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2024
0
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职称材料
2
陶瓷超滤膜在5-羟基-L-色氨酸发酵产物提取中的应用
张怡君
田俊波
杨志彬
郝晋博
胡江林
吕志堂
《河北大学学报（自然科学版）》
CAS
北大核心
2024
0
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