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携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达
1
作者
林晓亮
姜云波
+8 位作者
赵倩
殷小涛
田仁礼
李云奇
徐元基
阎瑾琦
张巍
高江平
于继云
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1082-1086,共5页
目的构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达。方法设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因...
目的构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达。方法设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1;在LipofectamineTM2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGloxΔE1,3Cre共转染进HEK293细胞;通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1)。将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达。结果基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致。Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达。结论成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力。
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关键词
p53调节的凋亡诱导蛋白1
腺病毒载体
HELA细胞
基因治疗
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题名
携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达
1
作者
林晓亮
姜云波
赵倩
殷小涛
田仁礼
李云奇
徐元基
阎瑾琦
张巍
高江平
于继云
机构
解放军总医院泌尿外科
军事医学科学院基础医学研究所
河北省石家庄市新华区计划生育技术服务站
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第10期1082-1086,共5页
基金
国家自然科学基金(81201612)
国家高技术研究发展计划(863)(2007AA02Z451)
文摘
目的构建携带外源性p53调节的凋亡诱导蛋白1(p53AIP1)基因重组复制缺陷型腺病毒载体,观察其在HeLa细胞中的表达。方法设计针对p53AIP1基因序列并插入特定酶切位点的特异引物,通过PCR扩增p53AIP1基因序列,利用DNA重组技术将p53AIP1基因定向插入到腺病毒穿梭载体pDC316,构建穿梭质粒pDC316-p53AIP1;在LipofectamineTM2000介导下穿梭载体pDC316-p53AIP1和腺病毒骨架载体pBHGloxΔE1,3Cre共转染进HEK293细胞;通过Cre-loxP重组酶系统,使Shuttle质粒和辅助大质粒发生定点重组从而包装产生携带目的基因p53AIP1的复制缺陷型重组腺病毒(Ad-p53AIP1)。将Ad-p53AIP1和Ad-null按MOI=100感染HeLa细胞,应用Western blot法检测蛋白水平的表达。结果基因片段成功连入pDC316载体上,对所构建新载体分别行PCR扩增、酶切、测序鉴定,与预计一致。Western blot法检测证实,Ad-p53AIP1感染HeLa细胞后蛋白有表达。结论成功构建携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体,并且有较强的感染能力。
关键词
p53调节的凋亡诱导蛋白1
腺病毒载体
HELA细胞
基因治疗
Keywords
p53AIP1
adenovirus vector
HeLa cell
gene therapy
分类号
R392.12 [医药卫生—免疫学]
Q786 [生物学—分子生物学]
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作者
出处
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1
携带p53AIP1基因的重组复制缺陷型腺病毒载体的构建、鉴定及其在人宫颈癌细胞系HeLa中的表达
林晓亮
姜云波
赵倩
殷小涛
田仁礼
李云奇
徐元基
阎瑾琦
张巍
高江平
于继云
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2013
0
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