基于脂质组学探究特发性肺纤维化小鼠的血浆脂质分子差异

1

作者 吴青霜 戚荣 +4 位作者 郑春潮 孙亚楠 刘和亮 王宏丽 何海兰 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第4期642-648,共7页

目的挖掘特发性肺纤维化(IPF)小鼠血浆中的差异脂质代谢物。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为2组,每组15只,实验分组为对照组和博来霉素(BLM)组。通过一次性气管灌注BLM(1 mg/kg)诱导IPF小鼠模型。采用苏木精-伊红(HE)染色观察... 目的挖掘特发性肺纤维化(IPF)小鼠血浆中的差异脂质代谢物。方法将30只SPF级C57BL/6雄性小鼠随机分为2组,每组15只,实验分组为对照组和博来霉素(BLM)组。通过一次性气管灌注BLM(1 mg/kg)诱导IPF小鼠模型。采用苏木精-伊红(HE)染色观察肺组织病理学形态;采用天狼星红(Sirius red)染色观察肺组织胶原纤维沉积;采用脂质组学筛选IPF小鼠血浆中差异脂质代谢物并进行富集分析。结果HE染色结果显示BLM组肺组织结构紊乱、肺泡间隔断裂、肺泡壁被破坏;Sirius red染色显示BLM组中小鼠的肺间质出现大量胶原纤维沉积;脂质组学分析结果显示BLM组小鼠脂质代谢谱发生改变,筛选出15个差异脂质代谢物,其中11个差异脂质代谢物上调,4个差异脂质代谢物下调,主要富集在甘油磷酸甘油磷酸酯、甘油磷酸胆碱、类固醇内酯等。结论BLM组小鼠脂质代谢谱发生改变,磷酸乙醇酸磷酸酶(PGP)(18:0/18:0)、PGP(i-12:0/i-24:0)、PGP(i-13:0/a-25:0)以及磷脂酰胆碱(PC)(18:0/14:0)、PC(18:3/16:0)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)(16:1)和LPC(18:3)等差异性脂质代谢物可能在IPF的进展中发挥重要作用。 展开更多

关键词 特发性肺纤维化 血浆 脂质组学 磷脂酰胆碱 溶血磷脂酰胆碱

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BRD4通过HMGB1/TGF-β1/Smad通路参与调控肺泡上皮细胞间质转化 被引量：1

2

作者 陈茹茹 韩璐 +3 位作者 何海兰 郝小惠 刘和亮 郭灵丽 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第2期247-254,共8页

目的探究溴结构域蛋白4(BRD4)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞间质转化中的作用机制。方法采用不同浓度(5、10 ng/ml)的TGF-β1刺激MLE-12细胞48 h建立上皮间质转化(EMT)细胞模型,并对细胞予以50 nmol/L BRD4抑制剂J... 目的探究溴结构域蛋白4(BRD4)在转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肺泡Ⅱ型上皮细胞间质转化中的作用机制。方法采用不同浓度(5、10 ng/ml)的TGF-β1刺激MLE-12细胞48 h建立上皮间质转化(EMT)细胞模型,并对细胞予以50 nmol/L BRD4抑制剂JQ-1,100μmol/L高迁移率族蛋白B1(HMGB1)抑制剂甘草甜素(GA)和3μg/ml的重组高迁移率族蛋白1(rHMGB1)预处理。实验分组为:对照组、TGF-β1组、JQ-1组、JQ-1+TGF-β1组、GA组、GA+TGF-β1组、JQ-1+TGF-β1+rHMGB1组。采用CCK-8法检测JQ-1对细胞活力的影响;采用Western blot检测CDH1、ZO-1、Vimentin、α-SMA、BRD4、HMGB1、TGF-β1及Smad2/3、p-Smad2/3的蛋白表达水平;通过划痕实验检测细胞迁移能力。结果与对照组比较,TGF-β1组Vimentin、α-SMA蛋白表达增加,CDH1和ZO-1蛋白表达降低,提示EMT模型构建成功。在该模型中,BRD4、HMGB1的表达明显增加。不同浓度的JQ-1均可抑制MLE-12的细胞活力,且呈浓度依赖性。JQ-1和GA均可缓解TGF-β1诱导的EMT的发生,并抑制由TGF-β1引起的HMGB1表达的增加和TGF-β1/Smad2/3通路的激活,而采用rHMGB1上调HMGB1的表达可以减少JQ-1对EMT和TGF-β1/Smad2/3通路的影响。此外,JQ-1和GA均可以有效降低TGF-β1诱导的细胞迁移;而rHMGB1可以缓解JQ-1对细胞迁移速率的抑制作用。结论BRD4可通过影响HMGB1/TGF-β1/Smad2/3信号通路调控肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质转化过程,且BRD4可能成为抑制肺纤维化的一个潜在靶点。 展开更多

关键词 溴结构域蛋白4 高迁移率族蛋白1 TGF-β1/Smad2/3 上皮间质转化 纤维化 JQ-1

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FUNDC1蛋白酪氨酸磷酸化位点突变质粒对心肌H9c2细胞线粒体自噬的影响

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作者 张朝阳 于艳丽 +2 位作者 武杰芸 田炜 徐菁蔓 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第7期629-636,共8页

目的本研究采用定点突变的方法构建FUN14域蛋白1(FUNDC1)Y11和Y18酪氨酸位点突变质粒,探究FUNDC1蛋白酪氨酸磷酸化位点突变质粒对心肌H9c2细胞线粒体自噬的影响。方法将使用全基因合成方法构建的突变质粒转染大鼠心肌H9c2细胞,实验分成... 目的本研究采用定点突变的方法构建FUN14域蛋白1(FUNDC1)Y11和Y18酪氨酸位点突变质粒,探究FUNDC1蛋白酪氨酸磷酸化位点突变质粒对心肌H9c2细胞线粒体自噬的影响。方法将使用全基因合成方法构建的突变质粒转染大鼠心肌H9c2细胞,实验分成空质粒组、FUNDC1过表达组、突变Y11组、突变Y18组和突变Y11联合Y18组五组。利用CCK-8法检测H9c2细胞活力;利用四甲基罗丹明乙酯(TMRE)检测线粒体膜电位;采用Western blot法检测细胞FUNDC1、线粒体转运孔蛋白20(TOM20)、内膜蛋白细胞色素C氧化酶Ⅳ亚型(COXⅣ)的蛋白表达水平;利用共聚焦显微镜确定转染效率以及线粒体、溶酶体共定位的情况。结果成功构建FUNDC1过表达、Y11、Y18、Y11联合Y18位点突变质粒;质粒转染细胞后共聚焦显微镜观察可见GFP荧光广泛表达。与空质粒组相比,FUNDC1过表达、Y11、Y18、Y11联合Y18组FUNDC1蛋白表达水平明显上升,细胞活力及线粒体膜电位无明显变化。与空质粒组相比,转染Y18、Y11联合18突变质粒的细胞TOM20、COXⅣ的表达水平上升,线粒体溶酶体共定位减少。结论转染FUNDC1 Y18或Y11联合Y18突变质粒,抑制心肌H9c2细胞的线粒体自噬。 展开更多

关键词 线粒体自噬 基因定点突变 FUNDC1 H9C2细胞

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Ac-SDKP对实验性矽肺纤维化模型中肺泡Ⅱ型上皮细胞衰老信号激活的调节作用 被引量：1

4

作者 李雅倩 张诗汇 +6 位作者 张乙 靳馥宇 李田 杨欣雨 刘舒鹏 徐洪 杨方 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期1-7,共7页

目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对实验性矽肺纤维化进程中肺泡II型上皮细胞细胞衰老的作用及其机制。方法 SPF级Wistar大鼠分组为对照组、矽肺模型组和Ac-SDKP治疗组。肺泡II型上皮MLE-12细胞分组为空白对照... 目的观察N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)对实验性矽肺纤维化进程中肺泡II型上皮细胞细胞衰老的作用及其机制。方法 SPF级Wistar大鼠分组为对照组、矽肺模型组和Ac-SDKP治疗组。肺泡II型上皮MLE-12细胞分组为空白对照组、SiO2组、Ac-SDKP组和SiO2+Ac-SDKP组。天狼星红染色显示胶原分布与沉积,免疫荧光染色检测肺组织及MLE-12细胞中p21的定位与表达;免疫印迹法检测I型胶原蛋白(Col I)、p-毛细血管扩张性共济失调(ATR)、p-p53、p-毛细血管扩张性共济失调突变激酶(ATM)、矽肺模型组大鼠肺组织形成典型的矽结节伴胶原沉积;与矽肺模型组相比较,Ac-SDKP治疗组大鼠肺内矽结节数量和面积显著减少。免疫荧光染色结果显示p21蛋白主要定位于肺泡II型上皮细胞。与对照组比较,矽肺模型组肺组织内Col I、p-ATM、p-ATR、p-p53、p21、p16蛋白表达水平上调,而Ac-SDKP治疗组肺组织内Col I、p-ATM、pATR、p-p53、p21、p16蛋白表达水平下调(P<0.05)。与空白对照组比较,SiO2组的MLE-12细胞Col I、p-ATM、pATR、p-p53、p21、p16蛋白表达水平上调;与SiO组比较,SiO2+Ac-SDKP组Col I、p-ATM、p-ATR、p-p53、p21、p16蛋白表达水平下调(P<0.05)。结论 Ac-SDKP能够通过抑制肺泡II型上皮细胞衰老信号的活化从而抑制胶原沉积。 展开更多

关键词 矽肺 肺纤维化 N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸 肺泡Ⅱ型上皮细胞 衰老

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甘草甜素对小鼠矽肺纤维化的干预作用 被引量：10

5

作者 张静 郭一铭 +5 位作者 李恩红 赵萌萌 贾佳佳 郝小惠 郭灵丽 刘和亮 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第1期121-125,共5页

目的探讨甘草甜素对二氧化硅诱导的小鼠矽肺纤维化的作用。方法将C57BL/6雄性小鼠,随机分为对照组、矽肺模型组及甘草甜素治疗组,每组6只。通过HE染色和天狼星红染色观察小鼠肺组织病理变化;采用肺功能仪测定小鼠肺功能,并使用试剂盒检... 目的探讨甘草甜素对二氧化硅诱导的小鼠矽肺纤维化的作用。方法将C57BL/6雄性小鼠,随机分为对照组、矽肺模型组及甘草甜素治疗组,每组6只。通过HE染色和天狼星红染色观察小鼠肺组织病理变化;采用肺功能仪测定小鼠肺功能,并使用试剂盒检测小鼠肺组织中羟脯氨酸含量;采用实时荧光定量PCR分析单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、纤连蛋白(FN)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA的表达水平;对肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数进行计数,并采用ELISA法检测BALF中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量。结果HE和天狼星红染色结果显示,与对照组相比,矽肺模型组小鼠肺组织中炎症细胞聚集、胶原分布增多,经甘草甜素治疗后,小鼠肺组织中炎症细胞和胶原分布均减少。与对照组相比,矽肺模型组小鼠呼吸暂停(PAU)和气道狭窄指数(Penh)均升高(P<0.05),而经甘草甜素治疗后,小鼠肺功能得到改善。此外,甘草甜素还可以有效降低二氧化硅引起的小鼠肺组织中羟脯氨酸含量的增加,MCP-1、FN和α-SMA mRNA的高表达以及BALF中白细胞总数和TGF-β1含量的增加(P<0.05)。结论甘草甜素可以改善矽肺小鼠的肺功能、缓解其纤维化进程。 展开更多

关键词 矽肺 甘草甜素 纤维化 转化生长因子-Β1

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miR-200b对小鼠矽肺纤维化的抑制作用

6

作者 袁翠芳 李航 +6 位作者 熊余璐 郭梓烨 王颿 陈茹茹 郝小惠 刘和亮 郭灵丽 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第8期1313-1316,共4页

目的探究微小RNA-200b(miR-200b)对二氧化硅(SiO_(2))诱导的小鼠矽肺纤维化的抑制作用。方法将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、SiO_(2)组、SiO_(2)+agomir-NC组和SiO_(2)+miR-200b agomir组,每组6只。SiO_(2)组小鼠予以气管滴注5 m... 目的探究微小RNA-200b(miR-200b)对二氧化硅(SiO_(2))诱导的小鼠矽肺纤维化的抑制作用。方法将24只雄性C57BL/6小鼠随机分为对照组、SiO_(2)组、SiO_(2)+agomir-NC组和SiO_(2)+miR-200b agomir组,每组6只。SiO_(2)组小鼠予以气管滴注5 mg SiO_(2)悬液,SiO_(2)+miR-200b agomir组和SiO_(2)+agomir-NC组小鼠分别在造模第1天、第7天气管滴注miR-200b模拟物(miR-200b agomir)和agomir的阴性对照(agomir-NC)。造模第14天检测小鼠肺功能后将其处死,采用HE和Masson染色观察小鼠肺组织病理变化;对支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白浓度和白细胞总数进行测定,并使用ELISA试剂盒检测小鼠BALF中转化生长因子-β1(TGF-β1)的含量。结果与对照组相比,SiO_(2)组和SiO_(2)+agomir-NC组小鼠肺内可见炎性细胞聚集且伴有胶原沉积,而SiO_(2)+miR-200b agomir组小鼠肺组织中炎症减轻、胶原沉积减少。与对照组相比,SiO_(2)组和SiO_(2)+agomir-NC组小鼠呼吸频率(f)加快、呼吸暂停(PAU)次数增加(P<0.05),呼气峰值时间比率(Rpef)降低(P<0.05),经过miR-200b agomir干预后,小鼠肺功能得到改善。此外,miR-200b agomir干预也可以有效缓解SiO_(2)刺激引起的小鼠BALF中总蛋白浓度、白细胞总数和TGF-β1含量的增加。结论miR-200b可以有效减缓矽肺小鼠肺功能下降,抑制小鼠矽肺纤维化的发生发展。 展开更多

关键词 矽肺 miR-200b 纤维化

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Ac-SDKP抑制YEATS4拮抗实验性矽肺的机制 被引量：1

7

作者 蔡文臣 张诗汇 +3 位作者 高一冰 牛婉丽 徐洪 杨方 《中国比较医学杂志》 CAS 北大核心 2021年第5期22-27,共6页

目的研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰(N-acetyl-seranyl-aspartate-lysyl-proline,AcSDKP)通过调节含YEATS结构域蛋白4(YEATS domain containing protein 4,YEATS4)从而抑制矽肺纤维化的作用及其机制。方法 RAW264.7细胞分... 目的研究N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰(N-acetyl-seranyl-aspartate-lysyl-proline,AcSDKP)通过调节含YEATS结构域蛋白4(YEATS domain containing protein 4,YEATS4)从而抑制矽肺纤维化的作用及其机制。方法 RAW264.7细胞分为si RNA阴性对照组(si RNA-Control,si C)、si RNA-YEATS4组(siY)、SiO_(2)+si RNA阴性对照组(S+si C)和SiO_(2)+si RNA-YEATS4组(S+siY);以及对照组(Control,C)、SiO_(2)诱导组(SiO_(2),S)、SiO_(2)+Ac-SDKP处理组(SiO_(2)+Ac-SDKP,S+Ac)和Ac-SDKP处理组(Ac)。Wistar大鼠分为对照24周组(Control 24week,C24)、矽肺24周组(Silicosis 24 week,S24)和Ac-SDKP治疗组(Ac-SDKP treatment 24 week,Ac24)。免疫印迹法(Western blot)检测I型胶原(Collagen type I,COL I)、巨噬细胞趋化蛋白-1(Monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)、精氨酸酶-1(Arginase-1)和YEATS4的表达。免疫组织化学染色法(Immunohistochemical staining,IHC)检测YEATS4在肺组织中的定位及表达。结果 Western blot结果显示,在RAW264.7细胞中,分别与si C、S+si C组比较,siY组、S+siY组COL I、MCP-1、Arginase-1表达均明显降低(P<0.05);与C组比较,S组COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4高表达;与S组比较,S+Ac组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达降低(P <0.05)。IHC及Western blot结果显示,与C24组大鼠比较,S24组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达上调;与S24组比较,Ac24组中COL I、MCP-1、Arginase-1和YEATS4表达降低(P<0.05)。结论 Ac-SDKP可能通过抑制YEATS4发挥抗矽肺纤维化的作用。 展开更多

关键词 矽肺纤维化 含YEATS结构域蛋白4 RAW264.7细胞 N-乙酰基-丝氨酰-天门冬酰-赖氨酰-脯氨酰

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小檗碱与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷单独及联合给药对心肌细胞缺氧/复氧损伤的影响

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作者 贡美娜 高亚云 +3 位作者 张束滢 逄晓倩 田炜 徐菁蔓 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2311-2318,共8页

目的 探讨小檗碱(berberine,BBR)与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷(5'-n-ethylformamidoadenosine,NECA)单独及联合给药对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2和HL-1细胞损伤的影响。方法 心肌H9c2和HL-1细胞分为Control组、BBR组、NECA组、... 目的 探讨小檗碱(berberine,BBR)与5'-N-乙基甲酰胺基腺苷(5'-n-ethylformamidoadenosine,NECA)单独及联合给药对缺氧/复氧(H/R)诱发的心肌H9c2和HL-1细胞损伤的影响。方法 心肌H9c2和HL-1细胞分为Control组、BBR组、NECA组、联合给药组、H/R组、BBR+H/R组、NECA+H/R组、联合给药+H/R组,CCK-8检测细胞活力;TMRE检测MMP;DCFH-DA检测ROS的含量;Mito SOX Red探针检测线粒体超氧化物;Western blot检测COXⅣ、Tom20、Tim23蛋白表达;qRT-PCR检测COXⅣ、Tom20基因表达。结果 在H9c2细胞中,与Control组相比,H/R组细胞活力、TMRE荧光强度明显降低,COXⅣ、Tom20和Tim23蛋白表达、COXⅣ和Tom20基因表达、ROS和线粒体超氧化物的含量均明显升高。与H/R组相比,BBR和NECA单独给药后细胞活力均增强;单独给药及联合给药后,ROS和线粒体超氧化物的含量明显降低。在HL-1细胞中,与Control组相比,H/R组细胞活力明显降低;ROS和线粒体超氧化物的含量均明显升高。与H/R组相比,BBR和NECA单独给药及联合给药后,细胞活力均增强;ROS和线粒体超氧化物的含量均明显降低。结论 BBR和NECA单独给药及联合给药是通过减少线粒体超氧化物和细胞ROS的生成,进而缓解线粒体损伤,减轻氧化应激损伤,最终降低H/R诱发的心肌细胞损伤。 展开更多

关键词 心肌缺氧/复氧损伤 小檗碱 NECA 线粒体超氧化物 ROS 氧化应激

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基于生物信息学分析筛选矽肺患者肺泡巨噬细胞中线粒体靶向标志物

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作者 程鸿明 何海兰 +3 位作者 王袁 郝小惠 王宏丽 刘和亮 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2024年第10期1828-1834,1841,共8页

目的筛选矽肺患者肺泡巨噬细胞中线粒体靶向差异基因,探究线粒体稳态在矽肺患者肺泡巨噬细胞中的作用。方法下载高通量测序数据集GSE174725,使用R软件以P<0.05,|log 2(Fold Change)|>1筛选差异表达基因,将其与线粒体基因库MitoCar... 目的筛选矽肺患者肺泡巨噬细胞中线粒体靶向差异基因,探究线粒体稳态在矽肺患者肺泡巨噬细胞中的作用。方法下载高通量测序数据集GSE174725,使用R软件以P<0.05,|log 2(Fold Change)|>1筛选差异表达基因,将其与线粒体基因库MitoCarta3.0取交集得到线粒体靶向差异表达基因,再开展富集分析得到差异基因参与的生物过程和通路,构建差异表达基因蛋白质-蛋白质相互作用网络。此外,收集矽肺患者对照人群肺泡巨噬细胞,利用RT-qPCR法检测差异基因的表达水平以及利用Western blot探究线粒体相关因子线粒体融合蛋白-1(MFFN1)、视神经萎缩蛋白-1(OPA1)、动力蛋白相关蛋白-1(DRP1)在矽肺患者肺泡巨噬细胞中的表达情况。结果在矽肺患者中共筛选出差异表达基因204个,包括上调差异基因62个,下调差异基因142个,其中线粒体靶向差异表达基因22个。线粒体靶向差异表达基因富集分析显示,其主要富集的细胞组成包括线粒体膜、内质网膜管侧的组成部分等,主要富集的生物过程包括线粒体电子传递还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸到泛醌、炎症反应、免疫反应等,主要富集的分子功能包括质子转运腺嘌呤核苷三磷酸合酶活性旋转机制、NADH脱氢酶活性、趋化因子活动等,京都基因与基因组百科全书富集分析主要集中在参与化学致癌-活性氧、白细胞介素17信号通路、toll样受体信号通路、趋化因子信号通路、肿瘤坏死因子信号通路等。此外,RT-qPCR结果显示,矽肺患者中线粒体细胞色素C氧化酶1、线粒体细胞色素C氧化酶2、线粒体细胞色素C氧化酶3、线粒体编码的NADH脱氢酶1、线粒体编码的NADH脱氢酶3、线粒体编码的NADH脱氢酶5、超氧化物歧化酶和线粒体编码的ATP合酶6表达下调(P<0.05),Western blot和RT-qPCR结果显示,矽肺患者中MFN1、OPA1表达降低(P<0.05),DRP1表达增高(P<0.05)。结论经生物信息学分析及验证最终得到8个线粒体靶向差异基因MT-CO1、MT-CO2、MT-CO3、MT-ND1、MT-ND3、MT-ND5、SOD和MT-ATP6,富集线粒体呼吸链和氧化应激等途径,可能在矽肺进程中发挥重要作用。 展开更多

关键词 矽肺 巨噬细胞 线粒体分裂 线粒体融合 生物信息学

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LPA在小鼠矽肺模型的表达及其对小鼠肺上皮细胞EMT影响 被引量：4

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作者 李欣颖 郝小惠 +5 位作者 张劲松 吴慧 崔洁 郭灵丽 王宏丽 刘和亮 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第5期771-775,共5页

目的探究溶血磷脂酸(LPA)在小鼠矽肺模型中的表达及其对小鼠肺上皮(MLE-12)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和模型组,对照组每天给予0.9%氯化钠溶液,模型组采用鼻腔滴注100 mg/L二氧化硅(SiO_(2)... 目的探究溶血磷脂酸(LPA)在小鼠矽肺模型中的表达及其对小鼠肺上皮(MLE-12)细胞上皮-间质转化(EMT)的影响。方法20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和模型组,对照组每天给予0.9%氯化钠溶液,模型组采用鼻腔滴注100 mg/L二氧化硅(SiO_(2))悬浊液50μl,连续7 d,在第28天时处死,取部分肺组织,免疫组化观察溶血磷脂酸1型受体(LPAR1)的表达,Western blot检测平滑机动蛋白α(α-SMA)、Ⅰ型胶原(COLⅠ)和LPAR1的蛋白表达;细胞增殖实验检测SiO_(2)对MLE-12细胞的增殖能力;细胞划痕实验检测SiO_(2)对MLE-12细胞的迁移能力;将MLE-12细胞分为对照组、SiO_(2)刺激组和抑制剂组,Western blot检测LPAR1和EMT相关蛋白的表达水平。结果Western blot检测显示模型组小鼠肺组织内α-SMA和COLⅠ表达增高,模型建立成功;免疫组化显示在模型组小鼠气管支气管周围上皮细胞内LPAR1表达阳性,呈现亮棕色;Western blot检测显示模型组小鼠肺组织内LPAR1的蛋白含量表达高于对照组(P<0.05);细胞增殖实验和划痕实验检测显示SiO_(2)能够促进MLE-12细胞的增殖和迁移;Western blot检测显示SiO_(2)刺激组LPAR1和间质标志物Vimentin蛋白表达增高(P<0.05),而上皮标志物E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05),且与对照组和抑制剂组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论LPA在小鼠矽肺模型中表达增高,并通过调控MLE-12细胞EMT过程促进其增殖、迁移,加速疾病的进展。 展开更多

关键词 矽肺 溶血磷脂酸 小鼠肺上皮细胞 增殖 迁移 上皮-间质转化

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肺淋巴循环障碍对矽肺发病进程的影响研究 被引量：2

11

作者 崔洁 陈紫莺 +3 位作者 王宏丽 郭灵丽 郝小惠 刘和亮 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第6期972-976,共5页

目的 探讨肺淋巴循环障碍对矽肺发病进程的影响。方法 采用胸导管结扎建立肺淋巴循环障碍模型。SPF级成年雄性SD大鼠24只随机分为对照组、结扎对照组、矽肺组、矽肺+结扎胸导管组(以下简称矽肺+结扎组)。每组各6只。对照组不做处理;结... 目的 探讨肺淋巴循环障碍对矽肺发病进程的影响。方法 采用胸导管结扎建立肺淋巴循环障碍模型。SPF级成年雄性SD大鼠24只随机分为对照组、结扎对照组、矽肺组、矽肺+结扎胸导管组(以下简称矽肺+结扎组)。每组各6只。对照组不做处理;结扎对照组给大鼠结扎胸导管后正常饲养;矽肺组大鼠采用动式染尘法建立矽肺模型(染尘仓内SiO_(2)粉尘浓度2000 mg/m^(3),每天给予大鼠动式染尘3 h);矽肺+结扎组大鼠先手术结扎大鼠胸导管,再进行动式染尘,染尘条件与矽肺组相同。HE染色观察肺组织病理变化;天狼猩红染色观察胶原沉积;免疫组化观察肺部淋巴管增生;Western blot检测大鼠肺组织中核转录因子(NF-κBp65)和血管内皮生长因子受体(VEGFR-3)、平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平。结果 HE和天狼猩红染色结果显示,相较于对照组,矽肺组和矽肺+结扎组大鼠肺组织病变更为严重。免疫组化结果显示矽肺组和矽肺+结扎组大鼠肺组织内有淋巴管增生。Western blot结果显示肺组织中NF-κBp65和α-SMA的蛋白含量矽肺+结扎组均高于矽肺组,分别为(2.42±0.05)vs(1.80±0.01)、(2.81±0.06)vs(2.57±0.01)。相反,矽肺+结扎组大鼠肺组织内VEGFR-3的含量低于矽肺组(0.87±0.01)vs(0.97±0.03)。结论 结扎胸导管可使矽肺大鼠肺部出现淋巴循环障碍,加快矽肺发病进程。 展开更多

关键词 矽肺 胸导管结扎 淋巴管增生 淋巴循环障碍

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血管紧张素转换酶2调节肺肾素血管紧张素系统减轻肢体缺血再灌注诱导的急性肺损伤 被引量：3

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作者 李树民 徐洪 +5 位作者 杨奕 李雅倩 靳馥宇 李田 杨秀红 杨方 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期618-626,共9页

目的探讨血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)对小鼠肢体缺血再灌注诱导的急性肺损伤的保护作用和机制。方法雄性野生型和ACE2转基因(过表达ACE2基因) ICR小鼠随机分为6组(n=18):野生对照组、野生模型组、ACE2对... 目的探讨血管紧张素转换酶2(angiotensin converting enzyme 2,ACE2)对小鼠肢体缺血再灌注诱导的急性肺损伤的保护作用和机制。方法雄性野生型和ACE2转基因(过表达ACE2基因) ICR小鼠随机分为6组(n=18):野生对照组、野生模型组、ACE2对照组、ACE2模型组、ACE2模型+A779干预组和ACE2模型+MLN-4760干预组。采用橡皮筋结扎双侧后肢根部的方法建立急性肺损伤模型(缺血2 h,再灌注4 h)。HE染色观察肺组织病理学变化;肺组织脏器系数、湿/干重比、支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)细胞计数和蛋白浓度检测肺组织含水量和肺泡毛细血管通透性;酶联免疫吸附法检测BALF中白介素-6(interleukin-6,IL-6)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α),以及肺组织血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,Ang Ⅱ)/Ang-(1-7)的浓度。qRT-PCR法分析肺组织ACE/ACE2的mRNA表达。Western Blot法检测肺组织ACE/ACE2和AT1/Mas受体的蛋白表达。结果与野生模型组相比,过表达ACE2基因可减轻肺组织病变,降低肺泡毛细血管通透性,降低BALF炎性细胞因子表达,逆转肺组织肾素-血管紧张素系统(renin angiotensin system,RAS)稳态失衡。而且ACE2的这些保护作用被特异性ACE2抑制剂MLN-4760和Mas受体阻断剂A779所消除。结论 ACE2可通过ACE2-Ang-(1-7)-Mas轴改善肺组织局部RAS稳态失衡减轻急性肺损伤。 展开更多

关键词 血管紧张素转化酶2 急性肺损伤 肾素-血管紧张素系统 肢体缺血再灌注

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MSR1对矽肺小鼠脂质蓄积和炎性因子分泌的影响研究 被引量：1

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作者 刘艺 李金城 +5 位作者 周昱慧 何海兰 郭灵丽 郝小惠 王宏丽 刘和亮 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第11期1928-1933,共6页

目的探究A类清道夫受体1(MSR1)在矽肺小鼠肺组织内的表达及其在小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)中介导的炎症和脂质代谢的作用。方法24只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、染毒7 d组、染毒14 d组和染毒28 d组,每组6只。RAW264.7细胞分为对照... 目的探究A类清道夫受体1(MSR1)在矽肺小鼠肺组织内的表达及其在小鼠单核巨噬细胞(RAW264.7)中介导的炎症和脂质代谢的作用。方法24只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组、染毒7 d组、染毒14 d组和染毒28 d组,每组6只。RAW264.7细胞分为对照组、siRNA-MSR1组、SiO_(2)组、siRNA-MSR1+SiO_(2)刺激组。通过苏木精-伊红(HE)染色和Van Gieson(VG)染色观察小鼠肺组织病理变化;油红O染色镜下观察脂质蓄积情况;免疫组织化学染色(IHC)检测MSR1的表达以及定位;免疫印迹法检测MSR1、炎症因子肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、IL-1β的表达。结果与对照组相比,HE和VG染色结果显示矽肺小鼠肺组织中炎性细胞聚集,胶原分布增加;IHC结果显示,矽肺小鼠模型中MSR1的表达上调;油红O染色结果显示小鼠肺组织出现大量橙红色脂滴;免疫印迹结果显示,与对照组比较,矽肺小鼠肺组织中MSR1、TNF-α、IL-6、IL-1β表达均上调(P<0.05)。与对照组比较,SiO_(2)细胞刺激组MSR1的表达上调,siRNA-MSR1组的MSR1表达降低(P<0.05),SiO_(2)组细胞内出现橙红色脂滴,siRNA-MSR1+SiO_(2)刺激组脂滴蓄积程度低于SiO_(2)组(P<0.01);ELISA结果显示SiO_(2)细胞刺激组TNF-α、IL-6、IL-1β表达上调(P<0.05)。与SiO_(2)组比较,siRNA-MSR1+SiO_(2)刺激组的TNF-α、IL-6、IL-1β表达下调(P<0.05)。结论MSR1参与了矽肺小鼠肺组织和细胞内脂质成分的调控及炎症因子的释放;抑制MSR1的表达可以拮抗巨噬细胞的炎症反应和脂质异常蓄积。MSR1可能是今后干预矽肺病程进展的潜在治疗靶点。 展开更多

关键词 矽肺 炎症反应 脂质代谢 A类清道夫受体 巨噬细胞 MSR1

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miR-455-3p靶向调控VEGF-C对矽肺淋巴管增生的影响

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作者 王静思 张梦璐 +5 位作者 崔洁 何海兰 刘艺 郭灵丽 郝小惠 刘和亮 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2023年第9期1529-1534,共6页

目的探究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)在大鼠矽肺模型淋巴管增生中的调控作用,并探讨miR-455-3p靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对人淋巴内皮细胞(HLECs)管状结构形成的影响。方法将大鼠随机分为矽肺模型组和正常对照组,矽肺模型组气管... 目的探究微小RNA-455-3p(miR-455-3p)在大鼠矽肺模型淋巴管增生中的调控作用,并探讨miR-455-3p靶向血管内皮生长因子-C(VEGF-C)对人淋巴内皮细胞(HLECs)管状结构形成的影响。方法将大鼠随机分为矽肺模型组和正常对照组,矽肺模型组气管内滴注二氧化硅(SiO 2)悬浊液,对照组滴注等量0.9%氯化钠溶液,采用HE、Masson、免疫组织化学染色观察肺组织病理改变及淋巴管增生情况,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot检测大鼠肺组织内miR-455-3p、VEGF-C表达水平;将miR-455-3p抑制剂(Inhibitors)及其阴性对照(NC)转染至HLECs中,RT-qPCR和Western blot检测细胞内miR-455-3p、VEGF-C表达水平,划痕实验检测HLECs迁移能力,基质胶管形成实验检测管状结构形成能力,双荧光素酶报告基因验证miR-455-3p和VEGF-C的靶向关系。结果与正常对照组比较,大鼠矽肺模型组肺间质内大量炎性细胞聚集,胶原逐渐沉积,且肺内淋巴管增生,肺组织内miR-455-3p表达水平低于对照组,VEGF-C表达水平高于对照组;HLECs转染后,与NC组比较,Inhibitors组细胞内miR-455-3p表达水平降低,VEGF-C水平升高,细胞迁移能力及管状结构形成能力增强(P<0.05);双荧光素酶报告基因证实VEGF-C为miR-455-3p的靶基因。结论miR-455-3p可通过靶向调控VEGF-C表达从而影响HLECs的管状结构形成能力,调节淋巴管增生。 展开更多

关键词 miR-455-3p VEGF-C 矽肺 淋巴管增生

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